2'-Fucosyllactose (2'-FL) is one of the most important human milk oligosaccharides and has several health benefits for infants. The levels of 2'-FL in breast milk or samples from other sources can be quantified by high-performance liquid chromatography. However, this method cannot be used for simultaneous detection of the target compound in numerous samples. Here, we developed a simple method for quantifying 2'-FL in a microplate format. The method involves two steps: (i) release of $\text\tiny{L}$-fucose from 2'-FL by ${\alpha}$-(1-2,3,4,6)-$\text\tiny{L}$-fucosidase and (ii) measurement of NADPH formed during the oxidation of $\text\tiny{L}$-fucose by $\text\tiny{L}$-fucose dehydrogenase. This method enables measurement of up to 5 g/l 2'-FL in 50 min using a 96-well microplate. The efficiency and simplicity of the proposed method make it suitable for the analyses of a large number of samples simultaneously.
BIOLOG GN microplate를 이용한 유일탄소원의 이용능 비교를 통한 대사적 유사성과 16S rDNA 의 PCR 증폭산물의 제한효소 지문 분석에 따른 유전적 유사성을 5종의 식생토양에 따른 토양미생물 군집을 대상으로 비교하였다. 16S rDNA를 증폭하여 제한효소 지문을 분석한 결과, 토양으로부터 직접 추출하여 증폭한 토양세균 군집의 16S rDNA의 유전적 유사도는 BIOLOG GN microplate를 이용한 대사적 구조와 일치하는 경향을 보았다. 그러나 배양된 종속영양세균 군집의 다양성과는 유전적 유사도가 매우 낮게 나타났다.
BIOLOG GN microplate를 이용하여 6종의 식생 토양에 따른 토양미생물 군집의 유일탄소원 이용능을 비교 분석하였다. 전체적으로 축합물, 아미노산, 카르복실산 화합물을 잘 이용하였으나, amide의 경우 낮은 이용능을 보였다. 대응분석을 통해 6종류의 식생 토양에 따른 토양미생물 군집은 크게 삼림토양, 초지-경작지토양, 비식생 토양의 3가지 그룹의 대사적 다양성의 차이를 보이는 집단으로 분류되었다. 다차원 척도법 분석을 통해 신갈나무 삼림토양의 미생물 군집은 소나무와 떡갈나무 삼림토양의 미생물 군집과는 또 다른 그룹으로 분리되었다. 이러한 식생토양형에 다른 미생물 군집의 대사 다양성의 차이로 볼 때, 식생의천이에 따라 식생에 영향을 받는 미생물 군집의 대사 다양성 또한 식생의 천이에 대응하여 변화하고 있음을 확인하였다.
Due to the inaccuracy of micro-machining, various special processing methods have been investigated recently. Among them, pulse electrochemical machining is a promising machining method with the advantage of no residual stress and thermal deformation. Because the cross section of the wire electrode used in this study is circular, wire-pulse electrochemical machining is suitable for micro-hole machining. By applying the response surface methodology, the experimental plan was made of three factors and three levels: machining time, duty factor, and voltage. The regression equation was obtained through experiments. Then, by referring to the main effect diagram, we fixed the duty factor and machining time with little relevance, and solved the equation for the target 900 microns to obtain the voltage value. The results obtained from the response surface methodology were approximately those of the target value when the actual experiment was carried out. Therefore, it is concluded that the optimal conditions for hole processing can be obtained by the response surface methodology.
전립선특이 항원 (PSA: Prostate Specific Antigen)은 전립선 세포에서 분비되는 단백질로서 장기 특이성이 높아 전립선암의 조기진단 및 치료의 예후를 판단하기 위해 임상에서 널리 사용되고 있는 혈청 종양표지검사의 대상항원이다. 그러나 혈청 PSA치는 전립선암 뿐 아니라 양성 전립선질환인 전립선비대증 (BPH), 전립선 경색, 전립선 염증 등에서도 상승될 수 있다. 혈청 내의 PSA는 여러 가지 분자형태로 이루어져 있으며 대표적으로 ${alpha}_1$-antichymotrypsin과 결합된 결합형 PSA(PSA-ACT)와 유리형 PSA (free PSA)로 나눌 수 있다. 전립선 암 환자의 혈청에는 결합형 PSA가 95% 이상으로 매우 높고 유리형 PSA의 분포는 매우 작은 반면 전립성비대증에서는 유리형 PSA의 농도가 높아지므로, 결합형 PSA와 동시에 유리형 PSA를 측정하면 종양표지검사로서의 특이성과 예민도를 높일 수 있다는 보고가 있어, 최근 혈청내의 유리형 PSA의 측정의 중요성이 임상적으로 대두되고 있다. 이에 본 연구에서는 sandwich 원리로 유리형 PSA 효소면역 측정법 (EIA) kit를 개발하고 그 유용성을 검토한 결과, 고, 저 농도에서의 일내, 일간 변이 계수 (CV)는 4% 이하였으며 상품화된 free PSA kit와 비교하였을 때 두 방법간의 상관계수는 0.9965으로 매우 양호하였다. 또한 농도가 높은 세 환자의 검체를 희석하여 직선성 검사를 하였을 때 상관계수가 모두 0.995이상으로 나타났다. 또한 microplate 법에서 문제될 수 있는 hook effect는 유리형 PSA농도가 40 ng/mL까지 나타나지 않았으며, 98.9%~104.1%의 회수율을 나타내었다. 따라서 본 연구에서 개발한 면역측정법 kit는 혈청 중의 유리형 PSA를 정확하고 간편하게 분석할 수 있으므로 임상 실험실에서 전립선암이나 전립선질환의 진단 및 치료효과의 판정에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
본 연구는 식물세포막을 파괴시켜 제초활성을 나타내게 하는 화합물(막과산화형 제초제)을 미지의 많은 화합물로부터 신속하게 탐색하기 위한 새로운 검정법을 확립하기 위하여 실시되었으며, 확립한 전체적인 검정과정은 다음과 같다. 96-well microplate에 시험용액 $200{\mu}L$ 넣고 여기에 오이자엽으로부터 적출한 직경 4 mm의 절편 1개씩을 띄운다. 항온실의 광조건 하에서 회전진탕기로 조금씩 흔들어주면서 8시간 배양한 후 절편을 제거한 다음, 배양액에 HVA와 HRP를 첨가하여 반응시킨 후 마이크로평판용 형광검출기를 이용하여 형광도(Ex 320 nm, Em 425 nm)를 측정한다. 형광변화량이 높을수록 제초활성이 높은 것으로 판단한다. 본 방법은 96-well microplate에서 작업을 수행할 수 있고 형광검출 기술을 이용함으로써 검정과정과 작업을 간편하게 하여 검정효율을 기존보다 현저히 높인 것이 특징이다. 아울러 활성검정을 추출된 효소가 아닌 잎 절편수준에서 수행하기 때문에 보다 실용화에 근접한 정량적 데이터를 얻을 수 있는 장점을 가진다.
분지아미노산 생합성 과정에 관여하는 첫 번째 효소인 acetolactate synthase (ALS)를 대상으로 수행할 수 있도록 고효율 검색방법(High Throughput Screening, HTS)을 개발하였고, 이를 이용하여 식물특이적 효소 저해제로 알려진 107개의 기존 화합물 중에서 새로운 ALS 저해 화합물을 선발하였다. 기존의 방법과 비교할 경우 한사람이 1회 수행한다고 하면 8 배 효율이지만 연속적으로 수행한다고 할 경우 1/10 이하의 양, 동일한 재료의 적용, 측정 결과의 계산, enzyme kinetics 등을 감안하면 최소 100 배 이상의 효과를 얻을 수 있다. 새로운 ALS 저해제로 탐색된 화학물질은, ammooxyacetic acid, azelaic acid, citric acid, cyanuric fluoride, glyoxylic acid, itaconic acid, malonic acid, niclosamid, oxalic acid, 2-oxoglutaric acid, suramin 등이었다. 앞으로 이들을 기본 구조로 하여 신규 ALS 저해 제초제의 개발을 위한 유도체의 합성에 이용되었으면 한다.
Species of scotochromogenic mycobacteria of Group II isolated from sputa of patients with pulmonary tuberculosis and tuberculosis-like diseases from 1979 to 1984 were identified by simple biochemical tests using. nitrate reduction, Tween-80 hydrolysis, arylsulfatase and urease test, and serotypes of the isolates belonging to M. scrofulaceum were differentiated by bacterial agglutination test. Of 39 strains. tested, 11(28.2%) proved to be M. scrofulaceum, 15(38.5%) M. flavescens and 13(33.3%) M. gordonae. But none of the isolates belonged to M. szulgai and M. xenopi known as major pathogens of mycobacteria of Group II. Of 11 strains of the isolates identified as M. scrofulaceum 3 strains(27.3%) each belonged to serotype 41 and 42, and 4 strains(36.4%) belonged to serotype 43, but one strain was not typable because of its inagglutinability by any one of the type specific sera. In addition, the sensitivity and specificity of rabbit immune sera against type strains of serotype 41, 42 and 43 of M. scrofulaceum were analysed by bacterial agglutination test. In the sensitivity of microplate test with 11 isolates of M. scrofulaceum, a comparative tandem test using 2 units and one unit of absorbed antisera against three serotypes appeared to be superior to a conventional microplate test using one unit of type specific antisera.
우백혈청(牛白血病)virus에 대한 혈청항체의 측정(測定)을 위한 간접효소면역법(間接酵素免疫法)(ELISA)의 확립(確立) 및 ELISA법(法)의 감도(感度)를 알기 위하여 한천(寒天) gel 면역확산법(免疫擴散法)(ID)과 비교검토(比較檢討)하였으며 한우(韓牛), 유우(乳牛) 및 육우(肉牛)등 264두(頭)의 혈청(血淸)을 공시(供試)하였다. 혈청(血淸)을 가(加)하지 않은 공(孔)의 흡광치(吸光値)(C)로서 혈청치(血淸値)를 제(除)한 후, 표준(標準)BLV항체흡성혈청치(N)로서 피검혈청치(被檢血淸値)(T)를 나눈치(値)(T-C/N-C)가 1.5이상(以上)인 것을 BLV항체 양성(陽性)으로 하였을 때 gp-ID의 성적(成績)과 98.5%(259/263)가 일치(一致)되었다. gp-ID 향성혈청(陽性血淸) 145예(例)중 144예(例)가 ELISA 양성(陽性)으로 99.6%, gp-ID 음성혈청(陰性血淸) 118예(例)중 115예(例)가 ELISA음성(陰性)으로 97.5%가 일치(一致)되었다. 이상에서와 같이 gp-ID용(用)의 BLV 항원(抗原)을 사용한 ELISA법(法)을 gp-ID와 동등(同等) 또는 더 감도(感度)가 우수한 BLV의 혈청항체측정법 임이 입증되었으며 실용성(實用性)이 충분(充分)하다고 사료(思料)된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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