To establish in vitro nodal culture conditions of Echinosophora koreensis Nakai, one of rare and endangered species famous for beautiful flowers in the Korean Peninsula, the influence of plant growth regulators (PGRs) on shooting and rooting from in vitro shoots was investigated. In shoot multiplication, addition of 6-benzylaminopurine (BA) to the half-strength Driver and Kuniyuki's media in the range of 2.22 to 8.88 ${\mu}M $induced 2.5 to 2.7 shoots per axillary bud; and addition of 2.27 ${\mu}M $ thidiazuron (TDZ) produced 3.2 shoots, during 4 weeks of culture, while zeatin and isopentenyl adenine (2ip) were not effective on shoot multiplication as observed from several combination treatments of BA with other PGRs. Shoots established were smaller than 2 cm in length, in most of the treatments. while in BA 8.88 ${\mu}M $ treatment more than 30% of shoots were longer than 2 cm and shorter than 4 cm. In rooting, naphthalene acetic acid (NAA) from 5.37 to 21.48 ${\mu}M $ showed the rooting rate from 40.0 to 62.5%. Indole butyric acid (IBA) addition had little effect on rooting (<10%), although some roots in IBA-containing media were longer than those in NAA. Micropropagation from axillary buds of nodular explants was applicable and promising to multiplication and conservation of Echinosophora koreensis Nakai.
To establish in vitro axillary bud culture conditions of Echinosophora koreensis Nakai, one of Korean endemic endangered species famous for beautiful flowers, we tested the influence of plant growth regulators (PGRs) in shooting and rooting stage from in vitro plants. In shoot multiplication, addition of 6-benzylaminopurine (BA) to the media induced 2.5 to 3 shoots per bud during 4 weeks of culture. And media including 0.5 mg L-1 thidiazuron (TDZ) produced 3 to 4 shoots per bud. However, zeatin and isopentenyl adenine (2-ip) were not successful to increase shoot number, and the combination treatments of BA with other PGRs were also not effective. Shoots were smaller than 2 cm in length, in most of the treatments. In rooting, naphthalene acetic acid (NAA) treatments in the range of 0.5 to 4.0 mg L-1 appeared to increase rooting rate by 10% to 60% approximately when compared with the control but roots developed with callus clusters. Indole butyric acid (IBA) addition had little effect on rooting (below 10%), while some roots were longer than in NAA treatments and some shoots were longer on high IBA concentrations (4.0 to 8.0 mg L-1). It is suggested that micropropagation is a highly applicable and promising to multiplication and conservation of rare and endangered endemic species.
산돌배나무의 기내번식 기술을 개발하고자 유묘의 정아를 재료로하여 기내 식물체 증식에 미치는 생장조절제의 효과를 시험하였다. 정아를 MS 배지에 BA 단독처리 혹은 BA+NAA 혼용처리 결과 대부분 줄기는 1-2개로 유도 되었으며 처리에 따른 차이는 나타나지 않았다. 줄기의 생장과정에서 정아괴저가 흔히 관찰되었으며 다경이 유도되는 줄기에서는 과수화 현상이 나타났고 줄기의 기부에는 캘러스가 형성되었다. 줄기의 증식 과정에서 BA+NAA 처리구에서 약 20%의 자발적인 발근이 이루어 졌다. 다경으로부터 얻어진 줄기는 gelrite 경화배지에서 기내발근이 저조하였으며, 기외삽목시 100 mg/L IBA 처리로 50%까지 발근되었다. 발근묘는 순화 후 정상적으로 생장하였다.
The effects of basal media, sucrose and phytohormone concentrations, and gelling agent combinations on in vitro frond proliferation of Lemna gibba G3 and 24 additional Lemna gibba strains were examined. Frond proliferation was equivalent on Schenk and Hidebrand. Murashige and Skoog. Nitsch and Nitsch, and Gamborg's B5 media and poor on murashige and Skoog medium in the absence of benzyladenine. With the addition of benzyladenine, Schenk and Hildebrand and Gamborg's B5 Were superior and equivalent. The addition of benzuyladenine increased equally frond proliferation at either 1 or $10{\mu}M$, however at $10{\mu}M$ fronds were severely curled or fused. Benzyladenine and thidiazuron suppressed root growth but kinetin was found to greatly enhance root growth. Gibberellic acid inhibited frond proliferation. Frond proliferation was significantly different on the four sucrose concentrations of 0, 1, 3, and 5% Among them, 3% sucrose was found to be superior. The reduced frond size observed in cultures grown on 8% sucrose could be explained by showing medium osmotic potential in excess of frond water potential. Gell agents also varied significantly in their ability to promote frond proliferation with 0.25% Gelrite or a mixture of 0.15% Gelrite and 0.4% agar. Proliferation of 25 Lemna gibba strains on medium neat optimal for Lemna gibba G3 showed a six-fold variation across strains with Lemna gobba G3 placing in the top 5 fastest proliferating strains.
본 연구는 윤판나물의 효과적인 기내 증식을 위한 배양 최적 조건을 구명하기 위해 수행되었다. 신초 유도 및 생장에 영향하는 배지(MS, B5 및 WPM) 및 절편체 종류에 따른 실험에서 줄기 유도는 액아 절편을 식물생장조절물질 무첨가 MS 배지에 배양 시 절편 당 2.5개로 가장 좋았고, 줄기 신장은 정아 절편을 식물생장조절물질 무첨가 MS 배지 배양 시 7.2 cm로 가장 효과적이었다. BA 침지 처리 시 신초 유도 효과는 액아배양 유래 신초를 BA 침지 무처리구에서 신초 유도(2.29개/절편) 및 신초 신장(7.28 cm)이 가장 효과적이었으며, BA 침지 시간이 길어짐에 따라 신초 유도 및 길이 생장은 감소하였다. 발근에 영향하는 IBA 농도 효과는 정아유래 신초를 1.0 mg/L 처리구에서 배양 시 최대 발근율(100%) 및 뿌리 유도수(21.3개/절편)를 보였으며, 정아 혹은 액아 유래 신초지 종류에 따른 발근율의 차이는 크지 않은 것으로 관찰되었다. 발근된 식물체는 상토로 이식하여 형태적인 변이 없이 정상적인 생장을 보였다.
참나무류의 효율적인 기내 번식법 개발을 위하여 상수리나무 유묘와 수형목을 재료로 액아를 배양하였다. 5가지 배지 가운데 WPM 배지에서 줄기 분화 및 생장이 가장 양호하였다. 싸이토키닌중 zeatin 3.0mg/L의 농도에서 줄기 분화 및 생장에 효과를 보였으나 대체로 BAP의 처리가 다경 줄기 분화 및 생장에 주효하였다. BAP와 zeatin의 공조처리는 다경줄기 유도 및 생장에 더욱 효과가 있었으며, 적정 농도는 BAP 0.5, zeatin은 0.05-1.0mg/L이었다. 기내발근은 1/2 GD 배지에 0.5mg/L IBA 처리로 90% 이상 발근되었고 인공 배양토에서 70% 이상 활착되었다. 유령 대목에 2회 접목된 27개 수형목 클론을 재료로 시험한 결과는 4개 클론만이 기내 증식의 가능성을 보였다. 재유령화된 수형목의 기내 번식은 모수령의 영향보다는 클론간의 차이에 크게 좌우되었다. 기내 반응이 우수한 수형목 클론은 증식후 90% 이상 발근되었다. 발근배지는 염류를 반감시킨 GD배지에 IBA 0.2-2.0mg/L 처리시 주효하였다. 발근묘는 인공 배양토에 이식하여 5개월 후 60% 이상 활착되었다.
5본의 백합나무 모수로부터 미숙종자 배양을 통한 체세포 배발생을 시험하였다. 두 가지 배지(MS 및 B5)에 2,4-D 및 TDZ의 농도별 조합처리로 캘러스 및 배발생 조직 유도를 시험하고 체세포배 유도, 발달 및 재분화에 미치는 명 암배양의 효과를 조사하였다. 캘러스 및 배발생 조직의 유도는 두 배지간 유의적인 차이가 없었으나 MS + 2,4-D 1.0 mg/L, TDZ 0.01 mg/L, 3% sucrose 조건에서 양호하게 나타났다. 캘러스 유도는 모수 몇 명 암배양에 따른 차이가 없었으나 배발생 조직의 유도는 암배양이 주효하여 명배양보다 약 2배의 효과가 있었고 모수간 55~72%까지 차이를 나타냈다. 체세포배 유도 및 정상적인 체세포배의 발달에 있어서도 모수의 영향을 받으며, 암배양이 필수적인 것으로 나타났고, 해부학적인 관찰을 통해 확인할 수 있었다. 본 실험 결과는 백합나무 체세포배 유도에 있어 모수의 선택과 암배양이 중요한 요인임을 시사해 준다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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