생체내 부정적 영향을 미치는 물질로 알려진 과산화지질의 생성을 억제하는 물질로서 지질대사 개선작용, 간보호작용, 혈소판응집능 억제작용 등 생체내 지질과산화 현상과 밀접한 상관성을 가지고 있을 것으로 사료되는 일련의 생리활성이 확인되었으나 아직 항 과산화지질 활성이 검토 보고된 바 없는 Brazilin 및 그 hydroxy 유도체인 hematoxylin을 대상으로 생체내 지질과산화 유도제로 $CCl_4$와 ethanol을 사용하여 지질과산화 억제효능 및 in vitro에서의 효소적, 비효소적 지질과산화에 대한 억제효능을 검토하였다. Brazilin 및 hematoxylin이 $CCl_4$로 유도된 과산화지질의 억제효과를 보면 간 homogenate에서 각각 90%, 94%, mitochondria 분획에서 각각 68%, 82%, microsome 분획에서 각각 65%, 81%의 억제효과를 보였다. 이에 반해 혈장에서의 억제효과는 각각 37%, 68%로 간에서 낮은 억제효과를 나타내었으나 이 두 물질은 간 뿐만 아니라 혈장에서도 과산화지질 억제효과가 유의성 있게 나타났다. Ethanol로 유도된 과산화지질의 억제효과를 보면 간 homogenate에서 각각 93%, 99.8%, mitochondria 분획에서 각각 74%, 98%, microsome 분획의 경우 각각 70%, 94%의 효과를 보였다. 이에 반해 혈장에서의 억제효과는 Brazilin 및 Hematoxylin이 각각 43%, 80%로 나타났다. 간조직중에서는 Brazilin과 Hematoxylin이 유사한 수준의 지질과산화 억제활성을 나타내고 있으나 혈장 과산화지질치는 현저한 차이를 나타내고 있어 Brazilin과 Hematoxylin은 간으로부터 혈액중으로의 지질의 방출에 상이한 정도로 영향을 미치거나 순환지질 기질의 보호에 의한 지질과산화 억제효과에 차가 있거나 혹은 두 가지 인자의 복합적인 작용에 의한 것으로 추정할 수 있다. 세포하수준에서의 항 지질과산화 활성을 알아보기 위해 실시한 간 misosome 및 mitochondria 분획에 대해 검토해 본 결과 양분획 모두에서 Hematoxylin이 Brazilin보다 강한 항산화 활성을 나타내었고 저지율은 양분획에서 유사한 수준이었다. Brazilin 및 hematoxylin이 효소적 지질과산화 반응인 NADPH 유도 지질과산화 반응에 미치는 영향을 검토한 결과 Brazilin의 경우 88.5%, Hematoxylin의 경우 91.0% 억제효과를 나타내었고 비효소적 지질과산화 반응인 ascorbate 유도 지질과산화 반응에서도 Brazilin이 75.7%, Hematoxylin이 81.9%의 지질과산화 억제효과를 나타내었다. 위의 결과에서 지질과산화 억제효과는 주로 자체의 항산화 작용에 의하나 microsome 약물대사활성에 의한 효소적 과산화 현상에도 억제작용이 있는 것으로 추정된다.
본 연구에서는 고지방 고콜레스테롤 식이 흰쥐에서 뱀딸기풀 파우더가 간조직의 항산화작용에 미치는 영향을 관찰하였다. 실험군을 4군으로 나누어 정상 식이군(N 군), 고지방 고콜레스테롤 식이군(HF 군), 고지방 고콜레스테롤 식이에 뱀딸기풀 파우더를 5% 첨가한 군(DA 군), 고지방 고콜레스테롤 식이에 뱀딸기풀 파우더를 10% 첨가한 군(DB 군)으로 나누었다. 식이 및 식수는 자유섭취하게 하였으며 4주간 사육한 후 희생시켰다. 간 조직 중의 항산화 효소계인 GSH-px 및 catalase 활성은 정상군(N 군)에 비해 HF 군에서는 유의적으로 감소되었으나 HF 군에 비해 뱀딸기풀 파우더 공급군(DA 및 DB 군)에서는 유의적으로 증가되었다. 유리기를 소거하는 지표인 간조직의 superoxide radical 함량을 microsome에서 측정한 결과 정상군에 비해 HF 군에서 유의적인 증가를 나타내었으나 뱀딸기풀 공급으로 유의하게 감소되었다. 또한 mitochondria에서는 HF 군에 비해 DB 군에서 정상군 수준으로 감소되어졌다. 간조직의 cytosol에서 $H_2O_2$의 함량에서는 DA 및 DB 군 모두에서 유의적인 감소로 정상군 수준을 나타내었다. 간조직의 microsome 및 mitochondria에서의 산화단백질 함량은 정상군에 비해 HF 군에서 유의적으로 증가 되었으나 뱀딸기풀 파우더의 공급으로 유의적으로 감소하였다. 과산화지질의 함량을 간조직에서 관찰 한 결과, 정상군에 비해 HF 군에서 유의적으로 증가하였고, 또한 고지방 고콜레스테롤 식이로 인해 증가된 과산화지질은 뱀딸기풀 파우더를 공급한 군에서 감소를 나타내었으며, 특히 10% 공급한 군에서 유의한 결과를 나타내었다. 이러한 결과로 미루어 뱀딸기풀에 함유된 여러 항산화성분들은 효과적으로 활성산소종을 소거하여 고지방 고콜레스테롤 식이로 인해 유발된 산화적 손상을 효과적으로 완화시켰을 것이라 사료되어진다.
Background: Mitochondrial DNA (mtDNA) mutations have been shown to be associated with cancer. This study explored whether mtDNA mutations enhance cholangiocarcinoma (CCA) development in individuals. Materials and Methods: The whole mitochondrial genome sequences of 25 CCA patient tissues were determined and compared to those of white blood cells from the corresponding individuals and 12 healthy controls. The mitochondrial genome was amplified using primers from Mitoseq and compared with the Cambridge Reference Sequence. Results: A total of 161 mutations were identified in CCA tissues and the corresponding white blood cells, indicating germline origins. Sixty-five (40%) were new. Nine mutations, representing those most frequently observed in CCA were tested on the larger cohort of 60 CCA patients and 55 controls. Similar occurrence frequencies were observed in both groups. Conclusions: While the correspondence between the cancer and mitochondrial genome mutation was low, it is of interest to explore the functions of the missense mutations in a larger cohort, given the possibility of targeting mitochondria for cancer markers and therapy in the future.
Food irradiation has been steadily increased in many countries concomitantly with increasing international trades. Harmful contaminants naturally occurred from foods which contain high levels of unsaturated fatty acids that are easily oxidized can affect the human anti-oxidation system through the generation of free radicals. Moreover, previous studies proved that ${\gamma}$-irradiation may cause production of free radicals in food. We investigated the effect of ${\gamma}$-irradiated soybeans in relation to oxidative stress in mice. Oxidative index of mice was evaluated by TBARS, DNA fragmentation in various organs such as blood lymphocytes, liver and kidney. Forty male ICR mice were equally divided into 4 groups and fed control diet or ${\gamma}$-irradiated diet containing 50% soybeans (5, 10, and 20 kGy, respectively) for 8 weeks. Peroxide values of the irradiated diets were higher than that of the non-irradiated one and increased according to the storage period. There was no significant difference in weight gain as well as in TBARS value in plasma and kidney of all groups. Liver TBARS value of the group fed with irradiated diet at 20 kGy increased significantly compared with the control group (p < 0.05). DNA oxidative damage as measured by alkaline comet assay showed that % tail DNA in the blood lymphocytes of 5 kGy and 10 kGy groups increased significantly over the control group (p < 0.05). Also, tail moments of 5 kGy and 10 kGy groups were higher than that of the control group. Ultrastructural examination shows myeline figures and swollen mitochondria in parietal and intestinal epithelial cells of the group fed with irradiated diet. Therefore, considering unsaturated fatty acid content, consumption of soybeans ${\gamma}$-irradiated with over 20 kGy or repeatedly may decrease the body's antioxidant mechanism.
Recently, we isolated HY253, a novel decahydrofluorene analog with a molecular structure of 7,8a-divinyl-2,4a,4b,5,6,7,8,8a,9,9a-decahydro-1H-fluorene-2,4a,4b,9a-tetraol from the roots of Aralia continentalis, which is known as Dokwhal (獨活), a traditional medicinal herb. Moreover, we previously reported its cytotoxic activity on cancer cell proliferation in human lung cancer A549 and cervical cancer HeLa cells. The current study aimed to evaluate its detailed molecular mechanisms in cell cycle arrest and apoptotic induction in human hepatocellular carcinoma HepG2 cells. Flow cytometric analysis of HepG2 cells treated with $60{\mu}M$ HY253 revealed appreciable cell cycle arrest at the G1 phase via inhibition of Rb phosphorylation and down-regulation of cyclin D1. Furthermore, using western blots, we found that up-regulation of cyclin-dependent kinase inhibitors, such as p21CIP1 and p27KIP1, was associated with this G1 phase arrest. Moreover, TUNEL assay and immunoblottings revealed apoptotic induction in HepG2 cells treated with $60{\mu}M$ HY253 for 24 h, which is associated with cytochrome c release from mitochondria, via down-regulation of anti-apoptotic Bcl-2 protein, which in turn resulted in activation of caspase-9 and -3, and proteolytic cleavage of poly(ADP-ribose) polymerase (PARP). Accordingly, we suggest that HY253 may be a potent chemotherapeutic hit compound for treating human liver cancer cells via up-regulation and activation of the p53 gene.
토끼 바이러스성 출혈증의 원인체를 실험 토끼에 접종하여 증식을 유도하고 간장에서 hematoxylin & eosin 염 색 에서 조직학적 진단과 세포내 viral RNA의 소재를 결정하기 위해 post-unicryl 포매한 block의 절편을 사용하여 단 염색과 전자현미경적 in situ hybridization을 시도하였다. 토끼 출혈증 viral RNA의 보합 결합에 이용하는 probe는 4717에서 4800(84bases)까지 oligonucleotide를 5'말단에 biotin-CE phosphoramidite로 표지하여 사용하였다. 보합결합물의 증명은 신호 표지로서 antibiotin antibody-l0nm gold를 사용하였으며, hybridization이나 증명은 기존 protocol에서 약간의 변법을 사용하였다. 0.02% glutaraldehyde에서 고정하고 unicryl resin 포매한 표본, biotinylated oligonucleotide probe, antibiotin antibody-l0nm gold로 실험한 결과 증강된 신호를 얻을 수 있었다. 특히 전처리를 생략하므로써 실험 과정을 간단하게 하여 신속한 결과를 얻을 수가 있었다. 전자현미경 in situ hybridization을 통하여 토끼 출혈증 바이러스의 주요 표적은 간세포로 감염 세포의 세포질 내 미토콘드리아와 핵 사이에서 immune gold입자가 뚜렷하게 표지 됨으로서 viral RNA를 증명할 수 있었다.
In this study, to understand the pathogenesis of new rabbit hemorrhagic disease virus (RHDVa) serotype, we carried out to administrate RHDVa to rabbits, and to examine sequential electron microscopic changes and relationship between pathogenesis and apoptosis. TUNEL-positive cells began to be observed from 24 hours after inoculation (HAI) and the number of positive cells was slightly increased with the course of time. Whereas marked increase of positive cells was seen in the liver from the rabbits died acutely. Typical viral particles with cup-like projections and a diameter of 30~40 nm were detected in homogenized liver samples and tissues at 36 and 48, and 48 HAI, respectively. Ultrastructurally, glycogen deposition was observed from the first stage of hepatocellular degeneration by RHDVa infection and then, swelling and disruption of cristae of mitochondria by viral particles, swelling of smooth endoplasmic reticulum, vacuoles and vesicles were detected. Condensation, margination and fragmentation of chromatin were observed in degenerative hepatocytes at 36 and 48 HAI, indicating apoptotic bodies. These data offer that hepatocytic apoptosis by RHDV infection could be closely related with mitochondrial impairment in the hepatocytes.
This study was undertaken to investigate the effect of lead on organisms. Mice received 15mg or 30mg of lead acetate per kg body weight every day for 1, 2 or 3 weeks, and the livers and kidneys were removed 24h after repeated injections. The livers and kidneys were used as sources for measurement of enzyme activities and for observation of alterations in ultrastructure. It was observed that body weights of mice treated with lead acetate were decreased when compared with those before treatment. This decrease in body weight was proportional to dose. The enzyme activities of succinate and malate dehydrogenases of experimental group that was treated with lead acetate for 1 week were nearly unchanged when compared with controls, but the enzyme activities of experimental group that was treated with lead acetate for 2 or 3 weeks were lower than those of controls. Changes in the enzyme activities were dependent on, but were not proportional to dose. Histologic examination of livers and kidneys after lead treatment showed that lead compound was accumulated and damaged in nucleus and mitochondria mainly. It was also observed that intranuclear inclusion bodies were formed only in epithelial cell of kidney proximal tubule after lead treatment. The overall changes in the ultrastructure were much greater in the livers than in the kidneys. From the above results, it nay be possible to conclude that the lead results in the decrease in body weight, reduction in the succinate dehydrogenate and malate dehydrogenase activities, and damages in the ultrastructure of kidney and liver in mouse. The presence of intranuclear inclusion bodies only in the kidney implies that these bodies protect the kidney from lead toxicity to some extent.
Unlike carbohydrats and fats, alcohol is essentially foreign to the body and it is known that the body get rid of it by oxidizing alcohol maily in the liver. Acetaldehyde is produced during ethanol metabolism and is known to be oxidized mainly by aldehyde dehydrogenase (ALDH). ALDH activity was found mainly in the mitochondrial fraction but a significant ALDH activity was also present in microsomal and cytosol fraction. Wistar rats (150~200 g, male) were given freely with 12% ethanol (Control) and/or 12% ethanol containing 0.1% ginseng saponins (Test) instead of water for 6 days and the liver was analyzed. ALDH activities of both control and test group were lower than that of normal group but test AkDH was less inhibited than control. ADH activies of both control and test were slightly higher than that of normal group but our previous data showed that it became gradually steady after prolonged ethanol feeding. MEOS activities of both control and test group were much higher than that of normal group. MEOS enzymes are inducible but the activity of test group was greatly higher than that of control. Ethanol containing [1-i4C] ethanol (5 $\mu$Ci) was injected to the above three groups and 30 min later, the distribution of radioactivity of hepatic lipids was investigated. Radioactivities of hepatic lipids of both control and test group were higher than that of normal group, however, that of test group was much lower than that of control. Analysis of individual lipids showed that phospholipid biosynthesis was significantly impaired and fatty acid and triglycerides biosynthesis were greatly stimulated. However, it was realized that the saponin prevented phospholipid biosynthesis depression and the increase of triglyceride biosynthesis considerably. It seemed that the saponin might stimulate ADH, ALDH and MEOS and the acetaldehyde formed would be removed faster. The excess hydrogen can be shunt more quickly into lipid biosynthesis. Electron microscopic observation showed that the hepatic cell of control group was si gnificantly damaged. Mitochondria were swollen and rough endoplasmic reticulum were dilated, however, hepatocytes of test group were not damaged.
본 연구에서는 고추씨의 생체 내 항산화작용을 규명하기 위하여 고콜레스테롤 고지방 식이 흰쥐 간조직의 항산화 방어계와 지질과산화에 미치는 영향을 관찰하였다. 실험동물은 체중 150$\pm$10 g 내외의 Sprague-Dawley종 수컷 흰쥐를 사용하였으며, 정상식이 대조군(N), 고지방.고콜레스테롤 공급군(HF), 고지방 고콜레스테롤 공급군에 고추씨파우더 5% 공급군(SA), 10% 공급군(SB) 및 15% 공급군(SC)으로 총 5군으로 나누었다. 식이 및 식수는 자유섭취하게 하였으며 4주간 사육한 후 희생시켰다. 실험기간 동안 체중 증가량은 정상군에 비해 고지방 고콜레스테롤 공급군에서 유의적으로 증가하였으나 고추씨 공급군에서는 정상군 수준이었으며 식이효율도 유사한 경향이었다. 간 조직 중의 항산화 효소계인 SOD 활성은 HF군에 비해 고추씨 공급군에서 다소 증가한 경향이었다. GSHpx의 활성은 정상군에 비해 고지방 콜레스테롤 공급군 모두에서 감소되었으나 SC군에서는 정상군 수준이었다. 또한 catalase 함량은 고지방 고콜레스테롤 공급군에 비해 고추씨파우더를 공급한 군에서 증가되었으나 유의적인 차이는 없었다. 유리기를 소거하는 지표인 간조직의 superoxide radical 함량을 microsome에서 관찰한 결과는 정상군에 비해 HF군에서 유의적으로 증가되었으나 고추씨파우더를 공급한 모든 군에서 감소되었다. 간조직의 mitochondria에서는 고추씨파우더를 공급한 모든 군에서 유의적으로 감소하였으며 특히 SB, SC군에서는 정상군 수준으로 감소하였다. 간조직의 cytosol에서 $H_2O_2$를 관찰한 결과 고지방 고콜레스테롤군 대조군에 비해 고추씨파우더 공급군에서 감소되었으나 유의적인 차이는 없었다. 간조직의 mitochondria에서는 정상군에 비해 HF군에서 유의적으로 증가되었으나 SC군에서는 정상군 수준으로 감소되었다. 간조직의 산화적 손상의 지표가 되는 carbonyl가 함량을 microsome에서 측정한 결과는 정상군에 비해 HF군에서 유의적으로 증가되었으나 고추씨파우더를 다량 공급한 두 군에서는 정상군 수준으로 감소되었다. 또한 mitochondria에서 측정한 결과는 HF군에 비해 고추씨파우더를 공급한 군에서 감소하였으나 군 간의 유의적인 차이는 없었다. 간 조직 중의 과산화지질의 함량을 관찰한 결과는 고지방 고콜레스테롤군에 비해 고추씨파우더를 공급한 모든 군에서 정상군 수준으로 감소하였다. 그리고 혈장에서 측정한 결과도 고추씨파우더를 공급한 군에서 정상군 수준으로 감소하는 것을 알 수 있었다. 이러한 결과는 고추씨파우더의 항산화 성분이 효과적으로 활성산소종의 소거에 관여함으로써 산화적 손상을 완화시킨 결과로 보인다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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