경제적인 채소류 중 향신료뿐만 아니라 약용으로서 이용 가치가 많은 마늘은 영양번식성 작물로 virus에 감염되어 있으므로, 조직배양에 의하여 마늘의 virus-free한 개체의 생산을 목적으로, 배양부위의 상위에 따른 배양효과의 차이와 호르몬 조성과 당의 농도가 조직배양의 생육 분화에 미치는 영향을 조사하였다. 또한 신초원기 유도를 위한 배양조건을 검토하였으며, 배양체의 조직학적 관찰을 행하였다. 치상부위 별로 보통엽 중하부조직이 배지조성에는 NAA 0.02 + BAP 1.0 mg/l 첨가배지가 발육과 분화에 다소 양호하였다. Shoot 분화에는 sucrose 40 g 첨가구에서 BAP의 증가에 따라 shoot형성이 다소 양호하였으며 NAA 0.02 + BAP 0.2 mg/l 첨가구에서는 가근이 유도되었다. 액체 회전 배양에서 신초원기라고 판단되는 조직이 유도되었다.
The principal objective of this study was to determine the optimal liquid culture conditions in shake flasks for maximal sporulation of Beauveria bassiana. The optimal initial pH for the spore production of B. bassiana using Potato Dextrose Broth was 5.2. The screening in shake flasks of carbon and nitrogen sources resulted in the identification of an optimal medium based on 3% sucrose and 1% casamino acid, with a C : N ratio of 22 : 4. Using this medium, a production level of $5.65{\times}10^7$ spores per ml was obtained after 5 days of culture. Using 3% corn meal, 2% corn steep powder, and 2% rice bran, the maximum spore concentration of $8.54{\times}10^8$/ml was achieved 8 days after inoculation at $25^{\circ}C$ in a rotary shaking incubator operated at 200 rpm. This represents a yield gain of approximately 2.89 times that of pre-optimization.
카사바 (Manihot esculenta Crantz, cv. MCol 22)의 마디 절편을 MS 기본배지에 3종류의 사이토키닌을 여러 농도로 첨가한 조건에서 2주동안 현탁배양한 결과, 고체배지에서 3주 배양된 것보다 훨씬 생장이 효과적이었다. 현탁배양된 유식물에서는 과수화현상이 나타났으나, 이들을 세사 (마사토 + 1/2농도의 크놉씨액)를 담은 유리배양병에 이식하여 생육시킨 결과, 유경에서 새 잎이 신장되면서 과수화를 벗어나 4주후에는 4~6개의 마디를 가진 유경길이 3~5 cm의 정상 유묘로 생장됨으로서, 목본식물인 카사바의 경우 마디절편의 현탁배양에 의한 대량증식의 가능성을 확인했다. 현탁배양시 저농도의 제아틴 (0.01-0.05 mg 1$^{-1}$) 처리는 BAP 최적조건에서 보다 2배나 길게 부정아 길이를 신장시켰다. 사이토키닌 처리로 부정아가 잘 발생된 유식물은 토양이식 작업을 간편하게 했으며, 토양 이식 후 부정근을 활발히 발생시켜 one step culture시스템 배양이 가능하게 했다. 과수화된 유식물은 기외에서 순화가 어려웠으나 유기물이 혼입되지 않은 세사를 담은 유리배양병에서는 비무균조건일지라도 95% 이상 순화될 수 있었다.
본 연구에서는 trametes versicolor에서 분비하는 laccase를 분리 정제하고, 그 효소특성을 조사하였다. 공시균의 배지로는 PDB배지를 사용하였으며, 이 효소를 유도하기 위하여 공시균 접종 5일 후 inducer로 2,5-xylidine (0.2 mM)을 첨가하였다. Inducer 첨가 2일 후 laccase를 수확하여 Glass filter (GF/C)를 이용하여 균사체를 제거한 후 laccase 여과액의 정제시간을 단축시키고, 쉽게 단백질을 농축시키기 위하여 ultramicrofilter (Viva flow 50, GE Healthcare Bioscience, USA)를 사용하여 농축하였다. 이렇게 농축된 laccase 여과액은 Hitrap Q FF column으로 부분 정제하여 활성이 검출된 peak를 확인할 수 있었다. 효소의 특성을 조사한 결과 효소의 활성이 가장 높은 pH는 5.0이었으며 최적 온도는 $60^{\circ}C$였고, specific activity는 syringaldazine을 substrate로 사용하여 확인한 결과 crude한 상태에서는 약 32 U/mg였고, 농축한 후에는 약 409 U/mg였으며 Hitrap Q FF column으로 분리한 후에는 약 1.243 U/mg였다. 그리고 SDS-PAGE gel 사진으로 확인한 결과 단백질의 크기는 약 53 kDa이었다.
The effects of lights with different wavelengths on the growth and the yield of extracellular polysaccharides of Nostoc flagelliforme cells were investigated in a liquid cultivation. N. flagelliforme cells were cultured for 16 days in 500 ml conical flasks containing BG11 culture medium under $27{\mu}mol{\cdot}m^{-2}{\cdot}s^{-1}$ of light intensity and $25^{\circ}C$ on a rotary shaker (140 rpm). The chlorophyll a, phycocyanin, allophycocyanin, and phycoerythrin contents in N. flagelliforme cells under the lights of different wavelengths were also measured. It was found that the cell biomass and the yield of polysaccharide changed with different wavelengths of light. The biomass and the yield of extracellular polysaccharides under the red or violet light were higher than those under other light colors. Chlorophyll a, phycocyanin, and allophycocyanin are the main pigments in N. flagelliforme cells. The results showed that N. flagelliforme, like other cyanobacteria, has the ability of adjusting the contents and relative ratio of its pigments with the light quality. As a conclusion, N. flagelliforme cells favor red and violet lights and perform the complementary chromatic adaptation ability to acclimate to the changes of the light quality in the environment.
본 연구에서는 온실가루이 방제를 위하여 감염된 이병체로부터 균주 분리 및 농촌진흥청 및 경상북도농업기술원에서 균주를 분양 받아 5 종의 균주를 확보하여, 최종적으로 활성이 가장 높은 분리균주 M130을 선발하였다. Beauveria bassiana M130을 이용하여 균주가 갖는 효소학적 활성을 분석하였다. Chitinase와 protease의 활성을 조사한 결과, 타 균주에 비하여 높은 효소학적 활성을 가지는 조건을 얻었으며, 선발된 균주의 포자생산의 최적화를 위한 방안으로 PDB (potato dextrose broth)배지와 미강추출물을 이용한 ERBM (extracted rice bran medium)을 비교하여, 더 높은 생육도와 포자 생성량을 보인 ERBM을 본 균주를 배양하는 기본배지로 선발하였다. ERBM을 이용한 액체배양시의 최적조건으로, 기본배지인 ERBM에 0.5% $(NH_4)_2SO_4$를 첨가하여 pH 5, $28^{\circ}C$에서 배양최적화를 하였다. 향후 곤충병원성곰팡이 Beauveria bassiana M130의 최적화 조건에 따라 배양을 한다면 포자의 생산량 및 방제효과가 높아질 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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