김치에서로부터 배 파쇄물에서 생육과 산 생성이 우수한 유산균을 선발하였다. 선발된 균주는 Ln. mesenteroides로 동정되었으며, 국립농업과학원 농업유전자원센터에 KACC 91495P로 기탁하였다. KACC 91495P 균주를 배 파쇄물에 접종한 후 pH, 적정산도, 생균수의 변화를 경시적으로 분석하였다. 배양액의 pH는 배양 9시간 이후 pH 4.05로 급격히 감소한 후 배양 18시간에 pH 3.86까지 완만하게 감소하였다. 적정산도는 배양 초기부터 15시간까지 지속적으로 증가하여 1.09% 수준에서 평형을 이루었다. 생균수는 접종 후 9시간까지 급격히 증가하고 그 이후 완만하게 증가하여 배양 18시간에는 $2.9{\times}10^9\;CFU/g$까지 증가하였다. 유기산 농도는 배양시간에 비례하여 증가하여 18시간 배양 후 젖산이 0.213%, 초산이 0.259%, 사과산이 0.217%로 분석되었다. 또한 배 발효액의 총 폴리페놀 함량은 9시간 배양 후 $134\;{\mu}g$ tannic acid/mL에서 $185\;{\mu}g$ tannic acid/mL로 약 40% 증가하였으며 따라서 DPPH radical 소거활성도 향상되었다. 또한 $4^{\circ}C$에서 KACC 91495P 균주에 의한 배 발효물은 약 2주일의 저장기간 동안 pH, 적정산도, 총균수의 변화는 미미하였다.
본 연구에서는 ethanol 과 일부 유기산(adipic acid, citric acid, acetic acid)을 첨가하였을 때 물김치 발효에 관여하는 미생물 생육의 변화를 측정하였으며 그 결과를 요약하면 다음과 같다. Ethanol 및 유기산의 첨가가 물김치 서식 미생물에 미치는 영향을 직접적으로 살펴보기 위하여 pH 4.3 의 buffer 용액에 ethanol 과 유기산을 농도별로 첨가하고 Lactobacillus plantarum, Leuconostoc mesenteroides, Kluyveromyces marxianus을 접종하여 균의 생육에 미치는 영향을 살펴 본 결과 L. plantarum 와 Leu. mesenteroides에서는 ethanol 농도가 높을수록 그리고 유기산 종류에서는 adipic acid를 첨가했을 때 성장 억제 효과가 가장 크게 나타났다. 비교 균주에서는 L. plantarum이 Leu. mesenteroides보다 유기산과 에탄올에 영향을 받아 생육이 더욱 억제되었다. Ethanol에 대해서는 L. plantarum이 Leu. mesenteroides보다 숙성 72 시간째에 40.0% 정도 생육이 억제되었으나 유기산의 경우에는 종류에 따라 생육억제 정도가 달랐다. Acetic acid의 경우 L. plantarumol 약 40.0% 정도, citric acid의 경우는 L. plantarum이 약 15.0% 정도 생육이 억제되었지만 adipic acid의 경우는 L. plantarum 와 Leu. mesenteroides 모두에게 억제 효과가 있어 무첨가군에 비해 50.0∼60.0% 정도 생육이 감소되었다. K. marxianus에서도 ethanol 농도가 높을수록 성장 억제에 효과적이나 유기산에 대해서는 차이를 보이지 않았다. Ethanol 및 유기산이 각 균에 어떠한 영향을 주었는가을 알기 위해 균체내 물질의 누출을 260nm에서의 흡광도를 측정하여 관찰한 결과 L. plantarum 에서는 ethanol 2.0% 첨가 에서와 adipic acid 0.1 를 첨가한 실험군에서 24 시간 후의 흡광도가 가장 많이 증가되었다. Leu. mesenteroides에서는 ethanol 첨가시 유의적인 차이가 보이지 않았고 유기산 중 adipic acid 첨가시 흡광도가 많이 증가되었다. K. marxianus 에서는 ethanol 농도가 높을수록 흡광도가 증가되었고 유기산 중 citric acid 에서 많이 증가되었다.
동치미에서 분리한 Leu. mesenteroides subsp. cremoris DLAB19 균주의 MNNG와 4-NQO에 대한 항돌연변이원성물질 생산을 위한 최적 조건을 조사한 결과, 탄소원으로 glucos들 첨가시 가장 높은 항돌연변이 효과를 나타내었으며, 질소원으로서 yeast extract와 bactopeptone 첨가시 항돌연변이 효과가 우수하였다. 탄소원으로 glucose의 농도를 2% 첨가시 MNNG와 4-NQO에 대한 항돌연변이 효과가 가장 우수하였으며, 질소원으로서 yeast extract와 bac-topetone의 농도를 1% 첨가시 가장 우수한 항돌연변이효과를 나타내었다. 항돌연변이원성 물질 생산을 위한 최적 배양 조건은 pH, 배양 온도, 배양 속도가 각각 7.0, 3$0^{\circ}C$ 및 150 rpm이었다. 상기의 최적 조건에서 36시간 배양시 가장 높은 항돌연변이 효과를 나타내었는데 S. enterica serovar typhimurium TA100과 TA98을 이용한 겨우 항돌연변이 효과가 각각 96.4%와 53.8%이었다.
PARK JAE-YONG;PARK JIN-SIK;KIM JONG-HWAN;JEONG SEON-JU;CHUN JIYEON;LEE JONG-HOON;KIM JEONG HWAN
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제15권4호
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pp.749-755
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2005
The ccpA gene encoding catabolite control protein A (CcpA) of Leuconostoc mesenteroides SYl, a strain isolated from kimchi, was cloned, sequenced, analyzed for transcript, and overexpressed in Escherichia coli. The ccpA ORF (open reading frame) is 1,011 bp in size, which can encode a protein of 336 amino acid residues with a molecular mass of 36,739 Da. The transcription start site was mapped at a position 49 nucleotides upstream of the start codon, and promoter sequences were also identified. The putative cre site overlapped with the -35 promoter sequence. The deduced amino acid sequence of the CcpA contained the helix-turn-helix motif found in many DNA-binding regulatory proteins. CcpA from 1. mesenteroides SY1 had $54.6\%$ identity with CcpA from Lactobacillus casei. The Northern blot experiment showed that ccpA was transcribed as a single 1.1 kb transcript, and transcription was repressed when grown on media containing glucose. CcpA was overproduced in E. coli BL21(DE3) cells using the pET expression vector, and purified to an apparent homogeneity. Gel Mobility Shift Assay with purified CcpA and a DNA fragment containing the ere sequence of the $\alpha$-galactosidase gene (aga) from L. mesenteroides SY1 revealed that CcpA bound specifically to the cre site of aga.
김치 발효에 주관여 미생물로 작용하는 Lactoba-cillus plantarum, Leuconostoc mesenteroides 균주에 세포 융합법을 적용시켜 우수한 형질의 재조합체를 얻기 위한 균주 개량의 방법으로 이용하고자 하여 그 기초가 되는 원형질 형성의 최적 조건을 조사하였다. Protoplast를 생성하기 위하여 세포벽 용균 효소로 lysozyme $40{\mu}$g/ml와 protoplast 형성률이 가장 좋은 생육시기인 15hr으로 결정하였다. $30^{\circ}C$, pH 7.5에서 현저한 흡광도 감소 경향과 protoplast 형성률도 우수하였다. 15% sucrose, 20mM $MgCl_2$, 6mM $CaCl_2$에서는 흡광도 감소 경향을 보이지 않았으나 protoplast 형성률은 다른 농도에서보다 증가하는 경향을 나타냈다. Plasma expander로 알려진 gela tin을 첨가하였을 경우에는 660nm에서 유의적인 흡광도 감소 경향을 보이지 않았으며 단지 proto-plast를 형성시키는데 있어서 중요한 보조적 역할을 수행하는 것으로 여겨진다. 균주 발육을 하기 위한 최소 저지 농도를 조사한 결과 marker로 이용할 수 있는 항생제는 erythromycin($15{\mu}$g/ml), ampicillin($50{\mu}$/ml), tetracyclin($30{\mu}$g/ml), chloramphe-nicol($30{\mu}$g/ml)이었다. Leu. mesenteroides는 모든 조건에서 L.plantarum보다 용균 작용과 protoplast 형성 효율이 낮아 L. plantarum에 준하여 protoplast 생성조건을 결정하였다.
Kim, Chang-Yong;Lee, Jin-Ha;Kim, Byung-Hoon;Yoo, Sun-Kyun;Seo, Eun-Seong;Cho, Kab-Su;Donal F. Day;Kim, Doman
Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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제7권4호
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pp.234-236
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2002
A process for the production of mannitol from fructose (5% to 25%) using Leuconostoc mesenteroides NRRL B-1149 was investigated. Fermentations were carried out In batch or fed-batch fermentations without aeration at 28$\^{C}$, pH 5.0. When 5% fructose was used In batch culture fermentation, the yield of mannitol was 78% of that expected theoretically. When the frurtose concentration was Increased to 10%, the yield dropped to 59.6% of the theoretical value. However, In the fed-batch culture, using 10% fructose, the yield was 81.9% of the theoretical value. In a 15% fruttose fed-batch culture, with 5% fructose being added initially and the other 10% fructose being added as a continuous supply the final yield was 83.7% of the theoretical yield. When 20% fructose was used In the same manner, the yield was 89.5% of theoretical yield.
Isomaltooligosaccharide (IMO) is a promising dietary component with prebiotic effect, and the long-chain IMOs are preferred to short chain ones owing to the longer persistence in the colon. To establish the optimal process for synthesis of long-chain IMOs, we systematically examined the reaction condition of dextransucrase of Leuconostoc mesenteroides B-512F by changing the ratio of sucrose to maltose (varying as 1:4, 1:2, 1:1, and 2:1) and amount of each sugar (from 2% to 20%). As a result, a ratio of 2:1 (sucrose to maltose, 10:5% or 20:10%, w/v) was determined as an optimal condition for long-chain IMO synthesis (DP3-DP9) with relatively higher yields (70-90%, respectively).
A multiplex competitive polymerase chain reaction (PCR) method was developed for the rapid identification and quantification of Leuconostoc mesnteroides and Lactobacillus plantarum populations which are the key microorganisms in kimchi fermentation. The strain-specific primers were designed to selectively amplify the target genes encoding 165 rRNA of L. plantarum and dextransucrase of L. mesenteroides. There was a linear relationship between the band intensity of PCR products and the number of colony forming units of each model organism. The PCR quantification method was compared with a traditional plate-counting method f3r the enumeration of the two lactic acid bacteria in a mixed suspension culture and also applied to a real food system, namely, watery kimchi. The population dynamics of the two model organisms in the mixed culture were reliably predictable by the competitive PCR analysis.
The present study was conducted to develop persimmon peel, a by-product of dried persimmon manufacturing, as a feed additive via lactic acid bacteria fermentation. Pediococcus pentosaceus, Lactobacillus plantarum, and three strains of Leuconostoc mesenteroides were used as a starter culture in the solid state fermentation of persimmon peel, and antioxidant activity and total polyphenol content were assessed. Leuconostoc mesenteroides KCTC 3100 showed high antioxidant activity (p<0.05), whereas Pediococcus pentosaceus showed high total polyphenol content (p<0.05). These two strains were thus selected as starter culture strains. Glucose, sucrose and molasses were used as variables for optimization and a total 15 experimental runs were produced according to Box-Behnken design. Regarding significant effects of variables, molasses showed linear and square effects on antioxidant activity of persimmon peel fermentation (p<0.05). In conclusion, optimum concentrations of glucose, sucrose, and molasses were determined to be 4.2, 3.9 and 5.3 g/L, respectively, using a response surface model. Antioxidant activity was also improved 2.5 fold after optimization.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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