For evaluation of immune stimulation effect of lacquer tree extracts, lymphocytes were counted by labeling of FITC-conjugated monoclonal antibody in the pheripheral blood of pigs that fed with a fodder supplemented by lacquer tree extracts. Populations of MHC-II+, CD4+, and CD8+T lymphocytes were increased more than 2% level after 1 week feed supply of the lacquer tree extracts. The increase of those T cells reached at maximum level after 2 weeks in the tested group. B lympyocytes with surface IgM were increased 5% after 1 week feed supply of the lacquer tree extracts, and their numbers reached maximum after 2 weeks in the tested group. For the assessment of cytotoxicity of the lacquer tree extracts, morphological changes were examined on the epithelial cells of small intestine from pigs fed with a fodder supplemented by 0.1 % lacquer tree extracts for 6 weeks (the tested group). Thin-sectioned tissue of small intestine was fixed with glutaraldehyde, then coated with gold particles, and the specimen was examined under scanning electron microscope. The villi on the mucus membrane of jejunum and ileum from the tested pigswere enlarged on the tip and were linked each other.
옻나무는 아시아지역 전역에 주로 분포하며 예로부터 도료 및 약용 식물로 많이 사용되어져 왔었다. 특히 우리나라에서 재배되는 옻나무가 그 기능이 더욱 우수하다고 알려져 있는데 그 원인은 명확히 밝혀진 바가 없다. 우선 옻나무에서 우루시올의 추출을 위하여 나무는 soxhlet의 방법으로, 옻나무 추출물은 liquid-liquid extraction (LLE)의 방법을 이용하여 각각의 우루시올을 추출하였으며, 추출한 각 성분들은 high performance liquid chromatography/ultraviolet & visible detector system (HPLC/UV-Vis)에 먼저 적용하여 분리의 최적 조건을 찾았다. 그리고 각 성분에 대한 정확한 분석을 위하여 reverse phase liquid chromatography on-line electro spray ionization mass spectrometer (LC-MS/MS)를 이용하였으며 이를 바탕으로 분자량에 따른 성분 확인과 함량을 연구하였다. 이동상의 조건으로는 methanol : 0.1% formic acid : DDW를 929 : 1 : 70의 부피비로 사용하여 최적의 분리 조건을 얻었다. 이러한 LC의 조건으로 다시 LC-MS/MS에 적용하여 MRM의 방식으로 각각의 함량을 구할 수 있었다. 분자량에 따라 총 4종류의 우루시올 동종체들이 존재를 확인하였다. 본 연구를 통하여 한국산 옻나무 추출물의 경우 외국산 옻나무의 것 보다 곁사슬에 이중결합이 많은 우루시올 동종체의 함량이 많이 존재하며 그 전체적 비율이 높은 것으로 밝혀졌다.
본 연구는 옻나무 추출물의 첨가가 영지버섯 미백활성 물질인 가나도마난디올의 생합성에 미치는 영향을 조사하기 위하여 수행하였다. 옻나무 열수 추출물을 1, 5, 10, 15%의 비율로 영지버섯 균사발효 시 첨가하고 발효 균사 추출물의 HPLC분석을 수행한 결과, 가나도마난디올 생합성이 첨가하지 않은 대조군에 비해 유의적으로 증가함을 확인하였다. 또한, 옻나무 열수 추출물이 첨가되어 발효된 영지 균사 추출물의 B16F10 세포주에 대한 멜라닌 생합성 저해능을 평가한 결과 첨가하지 않은 대조군에 비해 유의적으로 저해능이 증가함을 확인하였고, MTT분석을 통해 B16F10 세포주에 대한 세포생존율에도 영향을 미치지 않은 것을 확인하였다. 결과적으로 옻나무 추출물이 영지버섯균사의 미백활성 물질인 가나도마난디올 생합성을 촉진하여 향후 옻나무 추출물 첨가 영지버섯균사 발효 추출물이 효과적인 화장품 성분으로 사용 가능할 것으로 사료된다.
옻나무는 옻오름 같은 알러지 반응으로 인해 식품으로의 활용이 제한되므로 이러한 알러지 반응을 완화시키기 위하여 갈근 추출물과 혼합하여 알러지 억제효과를 평가하였으며, 알러지를 유발시키는 성분의 변화를 측정하여 화학적 구조변화 및 생물학적 알러지 반응 억제 양상을 관찰하였다. 이에 갈근 추출물에 대한 옻나무 추출물의 알러지 반응 완화효과를 RBL-2H3 세포에서 ${\beta}$-hexosaminidase의 양을 측정하여 평가하였으며, 갈근 추출물에서 매우 우수한 억제효능을 나타내었다. 또한, 갈근 추출물을 혼합한 결과 양성대조군 ketotifen보다 다소 우수한 효능이 나타났다. 옻나무 추출물의 알러지 유발물질 확인하고, 갈근과 혼합 추출 하였을 때의 알러지 유발물질 함량변화를 평가하기 위하여 GC/MS 분석을 실시하였다. 그 결과 4종의 알러지 유발물질을 확인할 수 있었으며, 갈근 추출물과 혼합시 알러지 유발물질은 그 함량이 적어지거나 소멸되었다. 따라서, 갈근과 혼합하여 추출하였을 때 함량이 낮아지거나 소멸되는 알러지 유발물질 4종에 대하여 탈과립 억제 효능을 측정하였다. 그 결과, 옻의 알러지 유발물질 4종으로부터 알러지를 유도한 RBL-2H3 세포에서 탈과립화 억제효능 양상이 유사하였으며, 이를 통해 갈근 추출물은 항알러지 효과를 나타냄을 알 수 있었다. 이러한 효능을 통하여 옻과 갈근을 혼합하여 추출한 복합추출물의 경우 옻의 문제점인 알러지 반응을 효과적으로 억제할 수 있을 것으로 사료된다.
The ethanol extract of Rhus verniciflua Stokes (RVS), the Korean Lacquer tree, was subsequentely isolated and fractioned into two portions using distilled water (SED) and 99% ethanol (SEE) as elution buffers through silica gel column (4x28 em, 22 $\AA$. 28~200 mesh). To know the antioxidative effect of the RVS extracts, primary hepatocytes were exposed to hydroxyl radical generated by 20 mU/$m\ell$ glucose oxidase with SED or SEE for 4 hr. The addition of 100$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ SED in culture medium showed good protection from glucose oxidase (GO)-mediated cytotoxicity of hepatocytes, showing approximately equivalent to control. When the hepatocytes were incubated with 100 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ SED or SEE only for 4 hr. the activities of cell-associated superoxide dismutase (SOD) and catalase were elevated up to 1.22 fold and 1.4 fold, respectively, compared to control. Further increase, 1.88fold in SOD activity or 1.64fold in catalase activity, was also observed when the hepatocytes were incubated with 100 units/$m\ell$ of commercial SOD or catalase for 4 hr. Moreover. the glucose oxidase-mediated cytotoxicity in cultured hepatocytes was generally reduced upon addition of lysate obtained from SED or SEE-stimulated hepatocytes in a dose-dependent manner. From these results, we suggest that, in cultured hepatocytes, RVS ethanol extract can efficiently reduce cytotoxicity induced by glucose oxidase and may increase the activity of cell-associated SOD and/or catalase, thereby preventing and/or scavenging superoxides and hydroxyl radicals in this experiment.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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