To elucidate new biological ingredients in cold-brew coffee extracted with cold water, crude polysaccharide (CCP-0) was isolated by ethanol precipitation, and its immune-stimulating activities were assayed. CCP-0 mainly comprised galactose (53.6%), mannose (15.7%), arabinose (11.9%), and uronic acid (12.4%), suggesting that it might exist as a mixture of galactomannan and arabinogalactan. CCP-0 significantly increased cell proliferation on both murine peritoneal macrophages and splenocytes in a dose dependent manner. CCP-0 also significantly augmented nitric oxide and reactive oxygen species production by murine peritoneal macrophages. In addition, macrophages stimulated by CCP-0 enhanced production of various cytokines such as tumor necrosis factor-${\alpha}$, interleukin (IL)-6, and IL-12. In an in vitro assay for intestinal immune-modulating activity, CCP-0 showed higher bone-marrow cell-proliferation activity through Peyer's patch cells at $100{\mu}g/mL$ than the negative control. These results suggest that CCP-0 may potentially enhance macrophage functions and the intestinal immune system.
The prescriptions (DB-1-DB-5) were prepared with the active herbal medicines, Acanthopanax senticosus, Glycyrrhiza uralensis, Polygonatum odoratum, and Cichorium intybus. The most active crude polysaccharide fraction (DB-2-3), which was isolated through the fractionation of hot-water extract from DB-2, was significantly reduced by periodate oxidation (52.7 and 63.7%) on intestinal immune system modulating and anticancer activity. When DB-2-3 was further fractionated by column chromatographies, DB-2-3IIc-2 showed the most potent activities. In addition, DB-2-3IIc stimulated the proliferation of bone marrow cells via Peyer's patch in dose-dependent pattern by oral administration. The metastasis of colon 26-M3.1 lung carcinoma had significantly inhibited in mice fed DB-2-3IIc at 1 mg/mouse (43.8%). DB-2-3IIc-2 mainly contained uronic acid (46.1%) and 42.5% of neutral sugar with a small amount of protein (7.6%), and component sugar analysis also showed that DB-2-3IIc-2 was composed Ara, Gal, and GalA (molar ratio; 0.50:0.63:1.00). It may be suggested that activities of DB-2-3IIc-2 are resulted from pectic polysaccharides containing a polygalacturonan moiety with side chain of neutral sugars, such as Ara and Gal.
십전대보탕의 10가지 구성 천연물을 열수추출하여 장관면역 활성을 비교 검토한 결과, 창출(Atractylodes lancea DC., ALR)과 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer, PG)에서는 높은 활성을 나타내었으나 약한 활성을 갖는 황기(Astragalus membranacues, ASR)와 당귀(Angelica aculiloba Kitagawa, AR)를 제외하고는 어떤 생약에서도 거의 활성을 갖지 않았다. 한편 이러한 활성을 가진 생약(ALR, PG와 ASR) 중에서도 특히 ALR만이 종류, 생산지 및 육종조건에 관계없이 항상 일정하게 높은 활성을 보여주어 창출의 열수추출물 획분(ALR-0)이 십전대보탕의 장관면역 활성에 중요하게 관여하는 시료로 선정되었다. ALR-0 획분은 다시 용매별로 분획되어 메탄올-가용성 획분(ALR-1), 메탄올-불용성/에탄올-가용성 획분(ALR-2) 및 조다당 획분(ALR-3)으로 조제되었으며 이들의 활성을 측정한 결과, 단지 ALR-3 획분만이 Peyer's patch를 통한 골수세포의 증식을 활성화시키는 장관면역 활성을 시료농도에 의존적으로 나타내었으며 그 외의 획분에는 활성이 거의 없었다. 한편 ALR-3 획분을 $NaIO_4,\;NaClO_2$ 및 pronase로 처리한 후 활성을 측정한 결과, 모든 처리군에서 활성이 감소되었으며 특히 periodate 산화에 의해 심한 활성감소를 보였다. 이러한 결과를 토대로 십전대보탕의 장관면역 활성은 10종의 생약 중에서도 특히 창출이 중요하게 활성에 관여하는 것으로 보이며 다양한 용매별 분획을 통해 저분자보다는 에탄올에 침전된 고분자가 주요 함유물질인 조다당 획분이 장관면역 활성에 관여하는 것으로 추정되었다. 또한 periodate 산화에 의해 활성이 크게 감소되는 것으로 보아 주로 다당류가 창출의 장관면역에 중요한 활성물질인 것으로 생각된다.
Purified compound with intestinal immune system-modulating properties, GWE-2c, was isolated from methanol extract of Gelidium amansii by sequential procedures with silica gel column, LH-20 Sephadex gel column, and thin-layer chromatographies. In the presence of GWE-2c, strong immunoactivity in Peyers patch cell-mediated bone marrow cells was observed in vitro. In vivo intestinal immune-modulating activity was also enhanced by crude phenolic compound (GWE) of G. amansii in a dose-dependent manner. Investigation of production of several cytokines in Peyer's patch cells upon stimulation with GWE in vivo revealed the levels of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) and interleukin (IL)-6 increased. Results suggest that the phenolic compound from G. amansii represents immunopotentiator and biological response modifier at in vitro and in vivo levels.
동결건조된 솔잎(Pinus densiflora needles)으로부터 냉수(PD-CW), 열수(PD-HW)와 메탄올추출물(PD-M)을 분획하여 in vitro에서 Peyer's patch를 경유한 장관면역 활성을 측정한 결과, PD-M 획분에서 유력한 골수세포 증식활성을 나타내었다. 메탄올 추출방법을 확립하기 위하여 MeOH 추출물을 균질화, 교반 또는 환류 등의 방법으로 조제하였을 때, 환류방법으로 조제된 MeOH 추출물에서 유의적(p<0.05)으로 가장 높은 장관면역 활성을 in vitro에서 확인할 수 있었다. 솔잎으로부터 분획된 PD-M을 마우스에 경구 투여하고 Peyer's patch를 분리하여 ex vivo에서의 장관면역 활성도 관찰하였다. 다양한 농도로 1주일 동안 PD-M을 경구투여 한 결과, 1.0 g/kg of BW/day의 용량으로 경구투여 한 C3H/He 마우스의 Peyer's patch로부터 얻은 세포배양 상등액에서 saline 대조군보다 2.5배의 높은 장관면역 활성을 보여주었다(p<0.05). 또한 다양한 농도로 경구투여 된 Peyer's patch 세포의 배양액을 이용하여 측정한 IL-6 생산능은 1.0 g/kg of BW/day의 용량에서 1.13배로 증가하였으나 GM-CSF는 처리 용량에 따라 유의적인 값을 보이지는 않았다. 이러한 결과는 PD-M의 경구투여가 Peyer's patch 세포로부터 GM-CSF와 IL-6 등의 조혈세포 증식인자의 분비를 촉진함을 나타내는 것이며, 이러한 cytokine들이 골수세포 증식의 조절인자로서 작용함을 보여주는 것으로 생각한다.
90여종의 전통차 및 죽류용 식물로부터 조제된 다양한 용매추출물 중에서, 귤피(peels of C. unshiu)의 냉수추출물 (CUI-0)이 Peyer’s patch를 매개로 한 가장 높은 장관면역 활성을 나타내었으며 다시마(L. japonica), 둥글레(P. japonicum), 탱자(P. trifoliata)의 냉수추출물과 구기자(L. chinense) 및 치자(G. jasminoides)의 열수추출물을 제외한 나머지 식물의 용매추출물은 거의 활성을 가지지 못하였다. CUI-0는 MeOH-가용성 획분(CUI-1), MeOH-불가용성이면서 EtOH-가용성 획분(CUI-2)과 조다당 획분(CUI-3)으로 분획되었다. 이러한 획분들 중 CUI-3은 Peyer’s patch 세포를 매개로 하는 골수세포 증식의 자극활성이 가장 높았으며 arabinose, galacturonic acid, galactose, glucose, glucuronic acid와 rhmanose(molar ratio; 1.00:0.53:0.45:0.28:0.28:0.19) 등을 주요 구성당으로 함유하고 있었으며 소량의 단백질(9.4%)도 구성물질로 포함된 활성 획분임이 밝혀졌다. CUI-3의 장관면역 활성은 pronase 및 periodate 처리에 의해 감소되었으며 특히 periodate 산화는 CUI-3의 활성에 심각한 영향을 끼치는 것을 알 수 있었다. 활성 획분으로서 당 함량이 높은 CUI-3IIb-3-2는 DEAE-Sepharose FF, Sepharose CL-6B 및 Sephacryl S-200에 의해 귤피 냉수추출물의 조다당 획분으로부터 정제되었으며 HPLC에 의해 분자량 약 18,000 Da의 단일 peak임을 확인하였다. CUI-3IIb-3-2는 주로 arabinose, galactose, rhamnose, galacturonic acid와 glucuronic acid(molar ratio; 1.00:0.54:0.28:1.45:0.63) 등의 구성당으로 구성되어져 있었으며 소량의 단백질(3.2%)이 함유되어진 물질로 구성되어 있었다. 한편 CUI- 3IIb-3-2는 Peyer’s patch를 경유하였을 때만 골수세포 증식활성을 나타내었으며 활성물질 자체가 직접 골수세포 증식활성에 관여하지는 않는것으로 확인되었다. 이러한 결과로부터 귤피의 장관면역 활성은 측쇄에 arabinose와 galactose 등의 중성당이 결합된 polygalacturonan 구조를 갖는 펙틴계통의 다당류에 기인하고 있음을 보여주었다.
The six polysaccharide fractions were prepared by chromatographic procedure from the hot water extracts of the aboveground parts of Astragalus membranaceus. These six polysaccharides from aboveground parts of Astragalus membranaceus Bunge were tested for gut-mucosal immune activity and acute toxicity. In a view of molecular weight, the six fractions were estimated to be 75000, 88000, 129000 and 345000 Da, respectively. Component sugar analysis indicated that these fractions were mainly consisted of galactose (46.3 ~ 11.8%) and arabinose (35.4 ~ 9.9%) in addition to glucose, rhamnose, fucose, arabinose, xylose, mannose, glucuronic acid and galacturonic acid. Among the six major purified polysaccharides, AMA-1-b-PS2 showed highest bone merrow cell proliferation and lymphocyte of Peyer's patch stimulating activity. It may be concluded that intestinal immune system modulating activity of aboveground parts from Astragalus membranaceus Bunge is caused by polysaccharides having a polygalacturonan moiety with neutral sugars such as arabinose and galactose. In single oral dose toxicity study, no differences were observed between control and treated groups in clinical signs. The results indicated that lethal dose 50 ($LD_{50}$) of water extracts from Astragalus membranaceus-aboveground parts was found to be higher than 5000 mg/kg/day in this experiment. From the above results, we may suggest that Astragalus membranaceus-aboveground parts might have useful as a safe material for functional food and pharmaceutics.
When 10 kinds of herbal medicines were fractionated into hexane, MeOH, cold-water, and hot-water extracts, hot-water extracts from Acanthopanax senticosus (AS), Glycyrrhiza uralensis (GU), Cichorium intybus (CI), and Polygonatum odoratum (PO) showed the potent intestinal immune system modulating activity (1.72-, 1.62-, 1.60-, and 1.53-fold of control at $100{\mu}g/mL$, respectively). Especially, hot-water extracts from AS (215% compared with the control) and GU (187%) also had macrophages stimulating activity and mitogenic activity of splenocytes (7.1- and 6.5-fold) at $100{\mu}g/mL$. In addition, the effects of hot-water extracts from herbal medicines on anticancer activities were studied in mice. Hot-water extracts from AS and GU enhanced cytotoxicity of natural killer cell against cancer cell, Yac-1 (37 and 34% cytotoxicity) at E/T ratio 100:1, and colon 26-M3.1 cancer cell lines had significantly inhibited (82.1 and 75.2%) in experimental lung metastasis. These results suggest that hot-water extracts from A. senticosus and G. uralensis can be used as biological response modifiers to stimulate immune system and inhibit tumor.
For defining the possibilities of the commercial mass liquid culture of Cordyceps sinensis, the pharmacological activities of mycelia were analyzed. The mycelium of C. sinensis consists of carbohydrate (5.1%) and fat (1.3%), and contains a low content of protein (0.7%) and ash (0.5%), and 92.4% moisture. The molecular sugar ratio of carbohydrate was composed mainly of glucose, mannose (1.0 : 0.9), in addition a small amount of galactose and arabinose (0.2 : 0.1). The cellular materials of mycelia were fractionated into ethylacetate (EA), MeOH (M) and hot-water extract fraction (HW). HW fraction showed the most potent intestinal immune system modulating activity, anti-coagulant activity, and anti-complementary activity, and M fraction had the inhibition activity of radical generation as effective as genistine. These results reveal that the mycelium of liquid cultured C. sinensis showed pharmacological activities and could be used for commercial purpose.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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