• 한국미생물·생명공학회지
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• 제35권2호
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• pp.112-117
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• 2007

Protein kinase는 진핵생물과 원핵생물을 포함하는 모든 생명체에서 세포생존에 절대적으로 중요한 조절 기능을 담당한다. 일반적으로 원핵생물은 histidine 과 aspartic acid kinase로 구성된 bacterial two-component regulatory system에 의하여 환경변화에 따른 유전자의 발현이 조절되지만, 방선균을 비롯한 고등 원핵생물에서는 진핵생물성의 serine/threonine kinase들이 세포분화와 같은 분화과정을 조절하고 있다. Streptomycin 생산균인 Streptomyces griseus 균주에서도 다양한 serine/threonine kinase들이 존재하는 것으로 추정되며, 이들의 기능을 밝히는 것은 생명현상을 이해하는 중요한 열쇠를 제공해 줄 것으로 기대된다. 따라서, S. griseus로부터 protein kinase 를 동정하는 연구를 실시하였으며, 기존의 복잡한 chromatography법의 단점을 보완하기 위해 anti-phosphothreonine, anti-phosphoserine, anti-phosphotyrosine antibody를 이용한 immunoaffinity column chromatography 방법을 도입하였다. 실험 결과 약 14, 29, 31, 35, 40, 52, 56, 60 kDa의 단백질을 효과적으로 동정 할 수 있었으며, nonradioactive protein kination assay 방법으로 이들의 인산화능을 확인하였다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제11권2호
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• pp.149-157
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• 1996

A procedure for the determination of Aflatoxins in food and grains which utilizes reversed phased liquid chromatographic (LC) analysis with postcolumn derivatization by an electrochemical cell and determination with a fluorescence detector has been evaluated. The LC mobile phase was water-acetonitrile-methanol (6+2+2) with 1mM KBr and 1 mM HNO3 which gave baseline separation for the four Aflatoxins (AfB1, AfB2, AfG1, AfG2). The electrochemical cell set at 7V, generated bromine and derivatized aflatoxins B1 and G1, The derivatives were detected by the fluorescence detector. The aflatoxins in naturally contaminated corn samples were isolated by three different cleanup procedures: the AOAC method I column(CB method), a rapid filtrate column (Romer's column), and an immunoaffinity column. The final extract were quantitated with fluordensitometric TLC and the LC postcolumn derivatization techniques. The results were quite similar, however the LC technique showed less interferences and could be automated. Samples of corn, raw peanuts, peanut butter and dried dates were also analyzed successfully with this procedure.

• 대한약학회:학술대회논문집
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• 대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.1
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• pp.290.3-291
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• 2003

To increase detection sensitivity for multi-DDT residues (o,p-/p,p-DDT, o,p-/p,p-DDE, o,o-/o,p-DDD) analysis, a highly selective sample clean-up method was introduced prior to GC/MS analysis using immunoaffinity column. The immunoaffinity matrix was prepared by coupling IgG fraction of DDT antiserum to cyanogens bromide activated Sepharose 4B. Three DDT antisera (DDA-1, DDHP-2, DDCP-3) were test for affinity column ligand that obtained by imunizing respective DDT immunogen to rabbits, and IgG was purified using protein A affinity purification. (omitted)

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제17권1호
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• pp.71-80
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• 1990

항정자항체를 검사할 수 있는 면역분석법개발을 위하여 immunoaffinity chromatography로 분리 정제한 정자표현항원을 microtiter plate에 고정화 시킨것과 효소와 화학발광체로 표지된 2차항체를 사용하여 ELISA법과 CIA법을 개발하고 이 방법의 이용 가능성을 검토하기 위하여 기존 방법인 Kibrick test법으로 임상소견이 다른 남성혈청을 분석 비교하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 인간정자 표면항원을 분리하기 위한 immunoaffinity column을 제작키 위하여 인간정자를 토끼에 주사하여 정자에 대한 항혈청을 생산하였으며 이를 Protein A-Sepharose column으로 분리 정제하여 CNBr activated Sepharose-4B에 coupling시켜 immunoaffinity column을 제작하였다. 이 column에 균질화된 정자를 반응시키고 SDS를 넣은 Tris-HCI buffer로 용출시켰을때 60KD정도의 분자량을 갖는 분획을 얻었다. 2. 분리 정제된 human IgG를 microtier plate에 농도를 달리하여 고정화 시키고 ELISA용 Goat anti-human IgG-HRP conjugate와 CIA용 Rabbit anti-human IgG-ABEI-H conjugate와 반응시켜 그 활성도를 측정하였던 바 농도에 따라 반응의 정도가 감소하였다. 3. ELISA법으로 양성혈청의 희석곡선을 작성하였을때 경사가 완만한 것과 급한 것의 두 종류의 경향을 띈 곡선으로 대별되었으며 완만한 경사를 나타내는 것에서 1:160 희석치에서 O.D가가 0.1이하를 음성, 0.1이상 0.2이하를 약양성(weak positive) 그리고 0.2이상을 양성으로 판별하였다. 4. ELISA, CIA 그리고 Kibrick test로 동일시료를 분석 비교하였던바 ELISA와 CIA는 거의 동일한 상관관계를 보였으나 Kibrick test와는 50% 수준만 일치함을 보였다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제35권3호
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• pp.252-260
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• 2020

본 연구는 특수용도식품에 함유되어 있는 비타민B₁₂와 비오틴에 대하여 식품의 복잡한 매질 특성에 특이성을 확보할 수 있도록 현행 식품공전 시험법을 개선하고자 하였다. 식품공전에서 비타민B₁₂와 비오틴의 시험법에 항체반응을 통해서 분석물질과 특이적으로 결합하여 그 외의 성분들을 효과적으로 제거할 수 있는 면역친화성 컬럼을 도입하여 시험용액을 정제 및 농축함으로써 전처리 과정을 개선하였다. 식품 등 시험법 마련 표준절차에 관한 가이드라인에 따라 밸리데이션(특이성, 직선성, 검출한계, 정량한계, 정확도, 정밀도)을 수행하고 개선된 시험법을 이용하여 유통 중인 특수용도식품의 대상 품목에 대해 시험법 적용여부를 확인하였다. 본 연구사업의 수행으로 시험·검사의 정확성을 증대시켜 특수용도식품 품질관리에 대한 신뢰성을 더 높일 것으로 본다.

• 한국식품과학회지
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• 제24권4호
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• pp.367-370
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• 1992

Aflatoxin은 세계 여러 곳에서 식품에 오염되어 발견되며 증가하는 인간의 간암발생과 빈번히 역학적으로 관련하여 보고되는 발암물질이다. 이러한 aflatoxin의 발암성 규명에 대한 연구의 일환으로 20 mg calf thynmus DNA와 8 mg 표준 aflatoxin $B_1$을 반응시켜 화학적으로 aflatoxin $B_1$을 반응시켜 화학적으로 aflatoxin $B_1-DNA$ adduct를 합성하였다. 합성된 aflatoxin $B_1-DNA$ adduct는 산가수분해와 열처리에 의해 거대한 DNA 분자를 절단하였고, immunoaffinity column을 통과시켜 aflatoxin $B_1-DNA$ adduct만 선택적으로 정제한 후 HPLC법으로 정량하였다. 그 결과 반응생성물의 대부분은 aflatoxin $B_1-guanine$ adduct였으며, 그 함량은 aflatoxin $B_1$으로 5.2 mg이었다.

• 한국식품과학회지
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• 제36권1호
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• pp.158-161
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• 2004

국내 전통식품 중에 함유되어 있는 ochratoxin A를 검출할 수 있는 신속, 정확한 분석방법을 확립하고자 immunoaffinity column과 $C_{18}$ Sep-Pak cartridge를 비교 후 분리도와 회수율이 우수한 immunoaffinity column으로 전처리 방법을 사용하였으며 HPLC 검출한계는 $0.5{\mu}g/kg$로 나타났다. 오염도조사를 위하여 시판되는 장류(고추장, 된장, 간장 각 20건) 60건을 수거하여 분석한 결과 고추장 3건, 된장 2건, 간장 1건에서 $0.5-1.3{\mu}g/kg$ 수준으로 검출되었으며 수거된 선식 40건에서는 ochratoxin A가 검출한계이하 수준이었다. 이는 일부 외국의 규격치인 $5-50{\mu}g/kg$와 비교해 볼 때 낮은 수준이었다.

• 한국식품과학회지
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• 제39권5호
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• pp.488-493
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• 2007

국내유통중인 곡류, 견과류 및 그 가공품 총 25품목, 393건의 시료에 대해 immunoaffinity column 정제방법을 이용하여 총아플라톡신 오염실태를 조사하였으며, 그 결과 곡류 및 곡류가공품 6건, 견과류 및 견과류 가공품 37건에서 아플라톡신 오염이 확인되었으며 오염수준은 아플라톡신 $B_1$으로서 $0.04-2.65{\mu}g/kg$, 총아플라톡신으로서 $0.04-5.51{\mu}g/kg$ 범위로 나타났다. Immunoaffinity column 정제를 거쳐 HPLC-FLD로 분석한 결과 아플라톡신이 검출된 시료에 대해서 LC-MS/MS로 확인하였으며, 그 결과 모두 아플라톡신으로 확인되었다. 본 연구결과에서 나타난 곡류 및 견과류에 대한 아플라톡신 검출빈도 및 오염수준은 국내, 외 연구 결과와 유사하거나 비교적 낮게 나타났으며 국내 아플라톡신 기준 및 미국, CODEX에서 설정된 기준규격 이하로 검출되었다.

• 한국축산식품학회지
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• 제41권2호
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• pp.335-342
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• 2021

Vitamin B12 deficiency may lead to serious health issues in both infants and adults. A simple analytical method involving sample pretreatment with enzyme, followed by cyanide addition under acidic conditions; separation on an immunoaffinity column; and high-performance liquid chromatography (HPLC) was developed for the rapid detection and quantitation of vitamin B12 in powdered milk. Detection limit and powdered milk recovery were determined by quantitative analysis. The limits of detection and quantitation were 2.71 and 8.21 ㎍/L, respectively. Relative standard deviations of the intra-day and inter-day precisions varied in the ranges of 0.98%-5.31% and 2.16%-3.90%, respectively. Recovery of the analysis varied in the range of 83.41%-106.57%, suggesting that the values were acceptable. Additionally, vitamin B12 content and recovery in SRM 1849a were 54.10 ㎍/kg and 112.24%, respectively. Our results suggested that the analytical method, including the sample pretreatment step, was valid. This analytical method can be implemented in many laboratory-scale experiments that seek to save time and labor. Therefore, this study shows that immunoaffinity-HPLC/ultraviolet is an acceptable technique for constructing a reliable database on vitamin B12 in powdered milk containing starch as well as protein and/or fat in high amounts.

• 한국식생활문화학회지
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• 제35권3호
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• pp.278-284
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• 2020

In this study, biotin (vitamin B7) contents of frequently consumed foods in Korea were determined by using immunoaffinity column in conjunction with high-performance liquid chromatography (HPLC). The biotin contents of 24 foods of plant origin and 27 foods of animal origin were selected. The highest biotin contents in frequently consumed foods of plant origin were found in red beans (Huinguseul; 11.475 ㎍/100 g). On the other hand, biotin was not detected in any varieties of sorghum. For frequently consumed foods of animal origin, salted pollack roe (7.486 ㎍/100 g) showed the highest biotin content. However, beef and fish contained less biotin. All biotin analyses were conducted under analytical quality control. The limits of detection and limits of quantification of biotin were 0.007 and 0.023 ㎍/100 g, respectively, and the accuracy/recovery percentage was 95.35-105.02%. The precision values were 4.041% (repeatability) and 3.835% (reproducibility). Taken together, our data provide reliable data on the biotin contents of frequently consumed foods in Korea.