Purpose: Under different culture conditions, periodontal ligament (PDL) stem cells are capable of differentiating into cementoblast-like cells, adipocytes, and collagen-forming cells. Several previous studies reported that because of the stem cells in the PDL, the PDL have a regenerative capacity which, when appropriately triggered, participates in restoring connective tissues and mineralized tissues. Therefore, this study analyzed the genes involved in mineralization during differentiation of human PDL (hPDL) cells, and searched for candidate genes possibly associated with the mineralization of hPDL cells. Methods: To analyze the gene expression pattern of hPDL cells during differentiation, the hPDL cells were cultured in two conditions, with or without osteogenic cocktails (${\beta}$-glycerophosphate, ascorbic acid and dexamethasone), and a DNA microarray analysis of the cells cultured on days 7 and 14 was performed. Reverse transcription-polymerase chain reaction was performed to validate the DNA microarray data. Results: The up-regulated genes on day 7 by hPDL cells cultured in osteogenic medium were thought to be associated with calcium/iron/metal ion binding or homeostasis (PDE1A, HFE and PCDH9) and cell viability (PCDH9), and the down-regulated genes were thought to be associated with proliferation (PHGDH and PSAT1). Also, the up-regulated genes on day 14 by hPDL cells cultured in osteogenic medium were thought to be associated with apoptosis, angiogenesis (ANGPTL4 and FOXO1A), and adipogenesis (ANGPTL4 and SEC14L2), and the down-regulated genes were thought to be associated with cell migration (SLC16A4). Conclusions: This study suggests that when appropriately triggered, the stem cells in the hPDL differentiate into osteoblasts/cementoblasts, and the genes related to calcium binding (PDE1A and PCDH9), which were strongly expressed at the stage of matrix maturation, may be associated with differentiation of the hPDL cells into osteoblasts/cementoblasts.
The complete nucleotide sequence of the cDNA clone encoding rat skeletal muscle myosin- binding protein H (MyBP-H) was determined and amino acid sequence was deduced from the nucleotide sequence (GenBank accession number AF077338). The full-length cDNA of 1782 base pairs(bp) contains a single open reading frame of 1454 bp encoding a rat MyBP-H protein of the predicted molecular mass 52.7kDa and includes the common consensus 1CA__TG' protein binding motif. The cDNA sequence of rat MyBP-H show 92%, 84% and 41% homology with those of mouse, human and chicken, respectively. The protein contains tandem internal motifs array (-FN III-Ig C2-FN III- Ig C2-) in the C-terminal region which resembles to the immunoglobulin superfamily C2 and fibronectin type III motifs. The amino acid sequence of the C-terminal Ig C2 was highly conserved among MyBPs family and other thick filament binding proteins, suggesting that the C-terminal Ig C2 might play an important role in its function. All proteins belonging to MyBP-H member contains `RKPS` sequence which is assumed to be cAMP- and cGMP-dependent protein kinase A phosphorylation site. Computer analysis of the primary sequence of rat MyBP-H predicted 11 protein kinase C (PKC)phosphorylation site, 7 casein kinase II (CK2) phosphorylation site and 4N-myristoylation site.
Two cases of natural human infection by Heterophyopsis continua (Heterophyidae) were identified by collection of adult worms in 1983 in Korea. And in order to know the source of infection a study on fish intermediate hosts was performed along the southwestern coastal areas. The cases were 21 and 50 year old males residing in southern coastal areas. They had the clinical complaints of non-specific gastrointestinal symptoms such as epigastric pain and one of them also complained the discharge of tapeworm segments. Praziquantel in single dose of 10~15mg/kg was given followed by purgation with magnesium salt and 2 and 46 specimens of H. continua were collected from the diarrheal stools. They said to have eaten raw ilesh of several kinds of brackish water fishes. The results of fish examination for metacercarial infection were as follows: I. Seventeen (663.0%) out of 27 perches (Lateolabrax japonicus) and 10 (29.4%) out of 34 gobies (Acantkogobius flavimanus) harboured the metacercariae but none of 42 mullets (Mugil cepkalus) were found to harbour them. 2. The average metacercarial density in perches was 55.1 and 18.7 per fish respectively. And the majority of the metacercariae were collected from the muscle of body portions in these fishes. 3. After the metaeercariae were experimentally fed to two rats and one young dog. two adult worms were recovered from the dog while none from the rats. These worms were also identified as H. continua. From the results it was concluded that the brackish water flshes which the human cases said to have eaten were the source of infection.
pH sensitive polymers have long been utilized as one important type among many interesting drug delivery systems. This is due to the reason of different pH environments in human organs, which requires different pH control mechanism depending upon the organs. In the present study the pH sensitivity was investigated for both pH sensitive and pH insensitive biopolymers using the diffusion effect along with the swelling effect. NMR microscopy was performed along with optical microscopy. For the analysis of diffusion effect, UMR Microscopy was perFormed to measure diffusion coefficients for various liquids such as distilled water, acetone and DMSO(dimethyl sulfoxide). Also, this technique is expected to contribute to the studies for many pH drug delivery systems.
The gene encoding β-galactosidase was cloned from Bifidobacterium longum RD47 with combinations of several bifidobacterial promoters, and expressed in B. bifidum BGN4. Among the recombinant bifidobacteria, BGN4+G1 showed the highest β-galactosidase level, for which the hydrolytic activity was continuously 2.5 to 4.2 times higher than that of BGN4 and 4.3 to 9.6 times higher than that of RD47. The β-galactosidase activity of BGN4+G1 was exceedingly superior to that of any of the other 35 lactic acid bacteria. When commercial whole milk and BGN4+G1 were reacted, BGN4+G1 removed nearly 50% of the lactose in the milk by the 63-h time point, and a final 61% at 93 h. These figures are about twice the lactose removal rate of conventional fermented milk. As for the reaction of commercial whole milk and crude enzyme extract from BGN4+G1, the β-galactosidase of BGN4+G1 eliminated 51% of the lactose in milk in 2 h. As shown below, we also compared the strengths and characteristics of the strong bifidobacterial promoters reported by previous studies.
This study evaluated the sanitation management standards for vegetable preparation processes without a cooking stage. The aerobic plate counts (APC), coliform counts, and Escherichia coli of the samples at each production step were analyzed, and microbial growth of the samples stored at different temperatures was measured. The validation was judged in accordance with the microbial criteria stipulated by the British PHLS. After washing and disinfection, the APCs of the two samples decreased to 3~4 log CFU/g in both seasons. Compared to the purchasing stage, the decrease in coliform counts was approximately 0~3 log CFU/g in both seasons; E. coli was not detected. The initial APC and coliform levels of two vegetable samples were 4~5 log CFU/g in both seasons, with an increase of 1 log CFU/g taking more than 6 h at 25℃ and 2 h at 35℃. More than 10 h at 25℃ and 6 h at 35℃ were required to increase the E. coli O157:H7 count by 1~2 log CFU/g for two seasoned samples. In conclusion, washing and disinfection effects and changes in microbial growth during room temperature storage were similar in the two vegetables. Despite the low sanitizing effect of the two vegetables, when cut vegetables were stored under the critical limit within 2 h at two different room temperatures, seasoned lettuce and chicory were at the 'satisfactory' or 'acceptable' levels of PHLS regardless of the storage temperatures. The validation of sanitation management standards applied to vegetable preparation with the no-cook step was approved.
Objective: To investigate the effects of ROS on kinematic parameters in human spermatozoa. To verify the changes in above parameters, human spermatozoa were incubated with xanthine-xanthine oxidase (X-XO), $H_2O_2$, sodium nitroprusside (SNP) or lymphocyte. Otherwise, spemlatozoa were incubated under low $O_2 (5%) condition. Methods: CASA was employed to analyze sperm motion parameters. Results: Under $H_2O_2 treatment, all kinematic parameters of spermatozoa were dramatically increased during 30 min, but gradually decreased thereafter. Under the low concentration of $H_2O_2 (125 ${\mu}M$ and 250 ${\mu}M$), the movement velocity (VAP, VCL, VSL) decreased, but forward movement increased. Under the 1mM $H_2O_2, sperm showed reduced kinematic parameters except during first 30 min of incubation. In the cases of X-XO and SNP treatment, the movement velocity increased but the forward movement reduced. After incubation for 3 hr treatment, the kinematic parameters gradually decreased in high concentration of X-XO. However these parameters maintained or increased in low concentration of X-XO. There was no obvious changes in the above parameters in the high concentration of SNP. In the presence of high concentration of lymphocytes, all parameters decreased. Under the 5% $O_2 condition, the parameters of the movement velocity and movement pattern increased, but forward movement decreased. Taken togethers, it suggested that ROS increased the movement velocity but decreased the forward movement and lateral head replacement. $H_2O_2, X-XO, SNP and lymphocyte treatment significantly increased capacitated spermatozoa within I h of incubation. There was no significant difference in capacitation between low- and high $O_2 group. Conclusion: The early onset of capacitation in the presence of ROS suggest that ROS might be a positive regulator of sperm capacitation and hyperactivation. These results demonstrate that low concentration ROS facilitates the movement velocity but high concentration ROS was inhibitory.
DNA damage induced by reactive oxygen species (ROS) seems to play an important role in the induction of mutation and cancer. Hydrogen peroxide $(H_2O_2)$ has been shown to induce a variety of genetic alterations, probably by the generation of hydroxyl radicals via Fenton reaction. In this study, we examined the ability of medicinal herbs in the suppression of $H_2O_2$-induced mutagenesis. Human fibroblast GM00637 cells were treated with $H_2O_2$ in the presence or absence of medicinal herbs, and $H_2O_2$-induced mutant frequency was measured at the hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase (HPRT) locus. Treatment of cells with various doses of $H_2O_2$ caused a significant increase of the HPRT mutant frequency. However, pretreatment of cells with several medicinal herbs reduced $H_2O_2$-induced mutant frequency. The strong antimutagenic effects were observed from the methylene chloride and ethyl acetate fractions of Selaginella tamariscina, Panax ginseng, and Angelica acutiloba; ethyl acetate fractions of Rehmania glutinosa, Leonurus sibiricus, Curcuma zedoaria and Commiphora molmol; butanol fractions of Scutellaria barbata, Tribulus terrestris, Curcuma zedoaria, Cyperus rotundus and Carthamus tinctorius, which were more than 60% inhibition of $H_2O_2$-induced mutant frequency at the HPRT locus.
Objectives : In this study, the author tried to investigate whether Geonpye-tang(GPT) significantly affects PMA-, EGF- or TNF-alpha-induced MUC5AC mucin production and gene expression from human airway epithelial cells. Materials and Methods : Effects of the agent on PMA-, EGF- or TNF-alpha-induced MUC5AC mucin production and gene expression from human airway epithelial cells (NCI-H292) were investigated. Confluent NCI-H292 cells were pretreated for 30 min in the presence of GPT and treated with PMA (10ng/ml) or EGF (25ng/ml) or TNF-alpha (0.2nM), to assess both effect of the agent on PMA- or EGF- or TNF-alpha-induced MUC5AC mucin production by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and gene expression by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Possible cytotoxicity of the agent was assessed by examining the rate of survival and proliferation of NCI-H292 cells after treatment with the agent over 72 hrs (SRB assay). Results : (1) GPT significantly inhibited PMA-induced and EGF-induced MUC5AC mucin production from NCI-H292 cells. However, GPT did not affect TNF-alpha-induced MUC5AC mucin production. (2) GPT significantly inhibited the expression levels of PMA-, EGF- or TNF-alpha-induced MUC5AC genes in NCI-H292 cells (3) GPT did not show significant cytotoxicity to NCI-H292 cells. Conclusion : This result suggests that GPT can affect the production and gene expression of respiratory mucin observed in diverse respiratory diseases accompanied by mucus hypersecretion. This can explain the traditional use of GPT in oriental medicine. Effects of GPT with their components should be further investigated using animal experimental models that reflect pathophysiology of airway diseases through future studies.
In the course of screening for novel cell cycle inhibitors and apoptotic inducers, CR389, elucidated as 5-(1H-benzoimidazol-2-yl)-1H-pyridin-2-one, was generated as a new hit compound. Flow cytometric analysis and western blots of PA-1 cells treated with $60{\mu}M$ CR389 revealed an appreciable cell cycle arrest at the G2/M phase through direct inhibition of the CDK1 complex. In addition, activation of p53 via phosphorylation at Ser15 and subsequent up-regulation of p21CIP1 showed that CR389 also induces p53-dependent-p21CIP1-mediated cell cycle arrest. Furthermore, apoptotic induction in $60{\mu}M$ CR389-treated PA-1 cells is associated with the release of cytochrome c from mitochondria through up-regulation of the proapoptotic Bax protein, which results in the activation of procaspase-9 and -3, and the cleavage of poly(ADP-ribose) polymerase (PARP). Accordingly, CR389 seems to have multiple mechanisms of antiproliferative activity through p53-mediated pathways against human ovarian cancer cells. Therefore, we conclude that CR389 is a candidate therapeutic agent for the treatment of human ovarian cancer via the activation of p53.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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