• 생명과학회지
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• 제30권4호
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• pp.394-401
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• 2020

배아줄기세포는 만능세포이기 때문에 동물에게 주입되면 종양으로 발달할 수도 있다. 따라서 연구자들은 종양 형성으로부터 비교적 자유로운 성체세포로부터 세포 특이적 줄기세포(성체줄기세포)를 확보하는데 관심을 두고 있다. 성체줄기세포는 제한적으로 세포분열을 할 수 있고 지정된 특정 세포로만 발달할 수 있다. 포유동물에서 각 조직의 세포들은 자연적 생리조건하에서는 역분화 혹은 교차분화에 의해 성체줄기세포로 전환되지 않는다. 따라서 일본 연구자들에 의하여 2006년 성체세포의 리프로그램에 의한 유도만능줄기세포(iPSCs) 기술이 소개되어 성체줄기세포 연구의 새로운 장을 열었다. 비록 연구현장에서 iPSCs 기술이 폭 넓게 이용되지만, 리프로그램의 안정성뿐만 아니라 유전체에 외래유전자의 도입 등의 문제점도 있다. Reversine은 iPSCs 보다 2년 앞서 발견된 작은 화학적 합성 분자인 퓨린 유사체이다. Reversine은 분화된 세포를 리프로그램에 의한 역분화를 유도하여 다능성 줄기세포로 전환시킬 수 있으며, 적절한 분화조건하에서 다른 세포로 교차분화를 유도할 수도 있다. 따라서 reversine은 iPSCs가 가지고 있는 문제점을 극복하고 화학적인 방법을 이용하여 성체세포를 다능성 줄기세포로 전환시킬 수 있는 물질로 활용될 수 있다. Reversine이 백색지방세포를 갈색지방형세포(beige cell)로 전변시켜 열발산에 의한 에너지소비를 촉진함을 제시하여 항비만인자로서 그 가능성을 열어 놓았다. Reversine은 세포 역분화의 기능적 역할 이외에 항암 인자로서 또 다른 기능들이 보고되고 있어 앞으로 여러 분야에서 그 이용성이 기대되는 물질이다.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제46권2호
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• pp.143-153
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• 2003

목 적 : Shiga-like toxin (SLT)을 생산하는 Esherichia coli에 의한 감염은 설사, 출혈성 대장염(hemorrhagic colitis) 및 용혈성 요독 증후군(hemolytic uremic syndrome)을 특징으로 하며, 특히 5세 이하의 소아에게서 심각한 결과를 초래한다. SLT-I의 병인으로는 다양한 숙주 매개인자들이 알려져 있다. 본 연구에서는 E. coli 0157 : H7 (ATCC 43890)로부터 정제한 SLT-I이 포유동물 세포들에 대한 세포독성과 종양괴사인자(tumor necrosis factor-${\alpha}$; TNF-${\alpha}$)의 생산에 미치는 효과를 측정하였으며, SLT-I의 수용체인 glycolipid globotriaosylceramide (Gb3)의 발현과 SLT-I의 세포독성의 관계를 규명하고자 하였다. 방 법 : SLT-I과 SLT-I B를 순수분리 정제하고 SLT-I B-FLTC 접합체를 제조하여 vero 세포, 대식세포 및 수지상세포를 대상으로 세포독성능을 측정하고 세포독성능의 차이가 SLT-I의 수용체인 Gb3의 발현과 상관관계가 있는지를 Flow cyotmetry로 분석하였다. 또한 대식세포의 종양괴사인자 생산능은 ELISA법으로 시행하였다. 결 과 : SLT-I은 대식세포(Raw264.7)로부터 TNF-${\alpha}$의 생산을 증가시켰다. 연구 대상 세포 중 SLT-I에 감수성을 나타낸 Vero 세포와 수지상세포(dendritic cells)는 Gb3 발현이 각각 83%와 68%로 높았으며, 29%의 낮은 Gb3 발현을 보인 Raw264.7 세포는 감수성을 보이지 않았다. 따라서 위의 결과로부터 SLT-I에 감수성을 보이지 않은 Raw264.7 세포를 대상으로 Gb3 발현 정도와 SLT-I의 세포독성의 관계를 규명하고자 Gb3의 발현을 증가 시킨 후 SLT-I의 세포독성을 재차 평가하였다. 이 결과 TNF-${\alpha}$의 처리에 의하여 6 h에 Gb3의 발현이 정점(43.5%)에 이르렀으며 36 h에 정상 수준(25.0%)으로 환원되었다. 그러나, Gb3의 발현이 증가함에도 불구하고 SLT-I의 세포독성에는 변화가 관찰되지 않았다. 따라서, SLT-I에 의한 세포독성은 세포의 종류에 따라서 다르며 또한, Gb3의 발현정도에만 의존적이지는 않을 것으로 생각된다. 결 론 : 이와 같은 결과는 E. coli 0157의 감염증 병인 연구에 있어 SLT-I과 Gb3의 발현의 상관관계에 대한 보다 심도 있는 연구가 필요함을 시사한다.

• 대한의생명과학회지
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• 제9권4호
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• pp.177-181
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• 2003

The baculovirus/Spodoptera frugiperda (Sf) cell system has become popular for the production of large amounts of the human erythrocyte glucose transporter, GLUT1, heterologously. However, it was not possible to show that the expressed transporter in insect cells could actually transport glucose. The possible reason for this was that the activity of the endogenous insect glucose transporter was extremely high and so rendered transport activity resulting from the expression of exogenous transporter very difficult to detect. Sf21-AE cells are commonly employed as the host permissive cell line to support the baculovirus AcNPV replication and protein synthesis. The cells grow well on TC-100 medium that contains 0.1 % D-glucose as the major carbon source, strongly suggesting the presence of endogenous glucose transporters. However, unlike the human glucose transporter, very little is known about properties of the endogenous sugar transporter(s) in insect cells. Thus, the uptake of 2-deoxy-D-glucose (2dGlc) by Sf21-AE cells and the inhibition of 2dGlc transport in the insect cells by fructose and cytochalasin B were investigated in the present work. The binding assay of cytochalasin B was also performed, which could be used as a functional assay for the endogenous glucose transporter(s) in the insect cells. Sf21-AE cells were infected with the recombinant virus AcNPV-GT or no virus, at a multiplicity of infection (MOI) of 5. Infected cells were resuspended in PBS plus and minus 300 mM fructose, and plus and minus 20 $\mu$M cytochalasin B for use in transport assays. Uptake was measured at 28$^{\circ}C$ for 1 min, with final concentration of 1 mM deoxy-D-glucose, 2-[1,2-$^3$H]- or glucose, L-[l,$^3$H]-, used at a specific radioactivity of 4 Ci/mol. The results obtained demonstrated that the sugar uptake in uninfected cells was stereospecific, and was strongly inhibited by fructose but only poorly inhibitable by cytochalasin B. It is therefore suggested that the Sf21-AE glucose transporter has very low affinity for cytochalasin B, a potent inhibitor of human erythrocyte glucose transporter.

• 생명과학회지
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• 제25권6호
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• pp.686-692
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• 2015

암조직에 대한 면역반응은 종양의 성장을 억제하거나 유도한다. Foxp3 양성 T 림프구는 종양에 대한 면역억제 반응을 유도하여 종양의 성장을 유도하는 반면 CD8 양성 T 림프구는 종양의 성장을 억제한다. 본 연구에서는 피부에서 발생한 편평세포암종, 편평세포 암종의 전암병변인 광선각화증과 보웬병 그리고 기저세포암종 조직에 면역조직화학염색을 시행하여 CD8 양성 T 림프구 및 Foxp3 양성 T 림프구의 분포 그리고 두 종류의 림프구의 비(CD8/Foxp3)를 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. CD8 양성 T 림프구와 Foxp3 양성 T 림프구는 보웬병과 평평세포암종의 침습부위에서 광선각화증과 기저세포암종의 침습부위에 비하여 더 많이 침윤하였으며 CD8/Foxp3는 보웬병에서 광선각화증과 기저세포암종의 침습부위에 비하여 낮았다. CD8 양성 T 림프구와 Foxp3 양성 T 림프구의 침윤 정도 및 CD8/Foxp3는 보웬병과 편평세포암종의 침습부위에서 유의한 차이가 없었다. 기저세포암종과 편평세포암종에서 CD8 양성 T 림프구와 Foxp3 양성 T 림프구는 침습부위에서 종양의 중심부위에 비하여 더 많이 침윤하였다. 이러한 결과로 보아 편평세포종양과 기저세포암종은 서로 다른 면역반응을 보이며 종양내에서도 부위에 따라 상이한 면역반응을 보인다고 생각된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제44권6호
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• pp.1271-1284
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• 1997

연구배경 : 종양괴사인자(tumor necrosis factor ; TNF)는 다양한 생물학적 기능을 가지고 있는 바, 그 중 생체 외에서 증명된 뚜렷한 항암 효과로 말미암아 최근 항암 유전자요법의 중요한 대상으로 관심을 모으고 있다. 현재 유전자 이입의 기술적 문제로 생체 외에서 암세포에 유전자 이입을 시행한 후 이를 다시 환자의 생체내로 이식하는 방법이 연구의 주종을 이루고 있다. 그러나 저자들의 과거의 연구를 포함한 여러 연구에서 TNF가 이입된 암세포는 TNF에 대해 내성을 보이는 것으로 증명되었고 이에는 새로이 방어 단백질을 합성하는 것이 관여할 것이라는 시사가 있었다. 이 획득내성의 기전을 밝히는 것이 종양생물학의 이해를 넓히고 보다 효과적인 항암 유전자요법을 개발하기위한 매우 중요한 과제로 생각된다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제16권9호
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• pp.3961-3968
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• 2015

Background: Variants of human papillomavirus (HPV) show more oncogenicity than do prototypes. The HPV16 Asian variant (HPV16As) plays a major role in cervical cancer of Asian populations. Some amino acid changes in the E6 protein of HPV16 variants affect E6 functions such as p53 interaction and host immune surveillance. This study aimed to investigate activities of HPV16As E6 protein on modulation of expression of miRNA-21 as well as interferon regulatory factors (IRFs) 1, 3, 7 and c-fos. Materials and Methods: Vectors expressing E6 protein of HPV16As (E6D25E) or HPV16 prototype (E6Pro) were constructed and transfected into C33A cells. HCK1T cells expressing E6D25E or E6Pro were established by transducing retrovirus-containing E6D25E or 16E6Pro. The E6AP-binding activity of E6 and proliferation of the transfected C33A cells were determined. MiR-21 and mRNA of interesting genes were detected in the transfected C33A cells and/or the HCK1T cells, with or without treatment by culture medium from HeLa cells (HeLa-CM). Results: E6D25E showed binding activity with E6AP similar to that of E6Pro. Interestingly, E6D25E showed a higher activity of miR-21 induction than did E6Pro in C33A cells expressing E6 protein. This result was similar to the HCK1T cells expressing E6 protein, with HeLa-CM treatment. The miR-21 up-regulation significantly corresponded to its target expression. Different levels of expression of IRFs were also observed in the HCK1T cells expressing E6 protein. Interestingly, when treated with HeLa-CM, IRFs 1, 3 and 7 as well as c-fos were significantly suppressed in the HCK1T cells expressing E6D25E, whereas those in the HCK1T cells expressing E6Pro were induced. A similar situation was seen for IFN-${\alpha}$ and IFN-${\beta}$. Conclusions: E6D25E of the HPV16As variant differed from the E6 prototype in its activities on epigenetic modulation and immune surveillance and this might be a key factor for the important role of this variant in cervical cancer progression.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제51권12호
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• pp.1336-1341
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• 2008

목 적: 본 연구의 목적은 사람의 동종 조혈모세포이식에서 공여자의 이식편과 환자의 이식 후 말초혈액에서 $CD4^+CD25^+$ T 세포 분획의 분포를 알아보고 급성 이식편대숙주병(GVHD)과 연관성을 알아보고자 하였다. 방 법: 동종 조혈모세포이식을 시행 받은 17명의 소아를 대상으로 하였다. 공여자의 이식편과 이식 받은 환자의 이식 후 말초혈액으로부터 얻은 검체를 유세포 분석(flow cytometry)하였다. 공여자의 이식편과 이식 후 1개월과 3개월에 환자의 말초혈액 내 $CD4^+CD25^+$ T 세포의 분획과 절대 세포수를 알아보았다. 결 과: 공여자의 이식편 내 $CD4^+CD25^+$ T 세포의 분획은 급성 GVHD 발생군과 비발생군에서 각각 0.90%, 1.06%이었으며 차이가 없었다(P=0.62). 이식편 내 $CD4^+CD25^+$ T세포의 절대수는 급성 GVHD 발생군과 비발생군이 각각 $6.18{\times}10^5/kg$와 $25.85{\times}10^5/kg$으로 급성 GVHD 비발생군이 발생군보다 많은 경향을 보였으나 유의성은 없었다(P=0.09). 급성 GVHD 비발생군의 말초혈액 $CD4^+CD25^+$ T 세포는 이식 후 1개월에 2.11%, 3개월에 1.43%로 유의하게 감소하였으나(P=0.028), 급성 GVHD 발생군의 말초혈액 내 $CD4^+CD25^+$ T 세포는 이식 후 1개월과 3개월에 각각 2.47%와 2.30%로 유의한 차이가 없었다(P=0.50). 결 론: 본 실험을 통하여 저자들은 공여자의 이식편 내 $CD4^+CD25^+$ T세포의 분포와 이식 후 환자의 급성 GVHD의 관계에 대한 유의성은 검증할 수 없었으며 이식 후 환자의 말초혈액 내 $CD4^+CD25^+$ T 세포에는 조절 T세포보다 GVHD와 연관된 활성화된 T세포의 분획이 더 클 것으로 사료되나 추가적인 조절 T세포의 표지자를 이용한 검증이 필요할 것으로 사료된다.

• Molecules and Cells
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• 제40권6호
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• pp.386-392
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• 2017

Periodontal ligament stem cells (PDLSCs) are multipotent stem cells derived from periodontium and have mesenchymal stem cell (MSC)-like characteristics. Recently, the perivascular region was recognized as the developmental origin of MSCs, which suggests the in vivo angiogenic potential of PDLSCs. In this study, we investigated whether PDLSCs could be a potential source of perivascular cells, which could contribute to in vivo angiogenesis. PDLSCs exhibited typical MSC-like characteristics such as the expression pattern of surface markers (CD29, CD44, CD73, and CD105) and differentiation potentials (osteogenic and adipogenic differentiation). Moreover, PDLSCs expressed perivascular cell markers such as NG2, ${\alpha}-smooth$ muscle actin, platelet-derived growth factor receptor ${\beta}$, and CD146. We conducted an in vivo Matrigel plug assay to confirm the in vivo angiogenic potential of PDLSCs. We could not observe significant vessel-like structures with PDLSCs alone or human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) alone at day 7 after injection. However, when PDLSCs and HUVECs were co-injected, there were vessel-like structures containing red blood cells in the lumens, which suggested that anastomosis occurred between newly formed vessels and host circulatory system. To block the $SDF-1{\alpha}$ and CXCR4 axis between PDLSCs and HUVECs, AMD3100, a CXCR4 antagonist, was added into the Matrigel plug. After day 3 and day 7 after injection, there were no significant vessel-like structures. In conclusion, we demonstrated the perivascular characteristics of PDLSCs and their contribution to in vivo angiogenesis, which might imply potential application of PDLSCs into the neovascularization of tissue engineering and vascular diseases.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• 제44권6호
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• pp.266-273
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• 2014

Purpose: We previously reported that human serum significantly reduces the invasion of various oral bacterial species into gingival epithelial cells in vitro. The aims of the present study were to characterize the serum component(s) responsible for the inhibition of bacterial invasion of epithelial cells and to examine their effect on periodontitis induced in mice. Methods: Immortalized human gingival epithelial (HOK-16B) cells were infected with various 5- (and 6-) carboxy-fluorescein diacetate succinimidyl ester-labeled oral bacteria, including Fusobacterium nucleatum, Provetella intermedia, Porphyromonas gingivalis, and Treponiema denticola, in the absence or presence of three major serum components (human serum albumin [HSA], pooled human IgG [phIgG] and ${\alpha}1$-antitrypsin). Bacterial adhesion and invasion were determined by flow cytometry. The levels of intracellular reactive oxygen species (ROS) and activation of small GTPases were examined. Experimental periodontitis was induced by oral inoculation of P. gingivalis and T. denticola in Balb/c mice. Results: HSA and phIgG, but not ${\alpha}1$-antitrypsin, efficiently inhibited the invasion of various oral bacterial species into HOK-16B cells. HSA but not phIgG decreased the adhesion of F. nucleatum onto host cells and the levels of intracellular ROS in HOK-16B cells. N-acetyl-cysteine (NAC), a ROS scavenger, decreased both the levels of intracellular ROS and invasion of F. nucleatum into HOK-16B cells, confirming the role of ROS in bacterial invasion. Infection with F. nucleatum activated Rac1, a regulator of actin cytoskeleton dynamics. Not only HSA and NAC but also phIgG decreased the F. nucleatum-induced activation of Rac1. Furthermore, both HSA plus phIgG and NAC significantly reduced the alveolar bone loss in the experimental periodontitis induced by P. gingivalis and T. denticola in mice. Conclusions: NAC and the serum components HSA and phIgG, which inhibit bacterial invasion of oral epithelial cells in vitro, can successfully prevent experimental periodontitis.

• BMB Reports
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• 제28권6호
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• pp.556-561
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• 1995

The purpose of this study was to establish an in vitro culture method of tumor-specific T cells, and determine the efficacy of the cultured tumor-specific cytotoxic T-lymphocytes (CTL) as an agent of anti-tumor immunotherapy against a murine lymphoma, TIMI.4. Tumor-specific T-lymphocytes derived from C57BL/6 mice (thy-1.2) immune to TIMI.4 were activated by in vitro stimulation with the irradiated TIMI.4 cells, and expanded by restimulation with TIMI.4 in the presence of the concanavalin A-stimulated rat spleen culture supernatant, and splenic antigen-presenting cells. In vitro restimulation enhanced markedly the proportion of $CD8^+$, a predominant surface marker of CTL and the cytotoxic activity in the cultured immune T cell population. The resulting TIMI.4-specific T cells were adoptively transferred into nude mice. The tumor cells residing in the host after 7 days of adoptive transfer to B6.PL (thy-1.1) mice were quantified by use of an antibody directed to the thy-1.2 allele. The TIMI.4 cells in the recipient nude mice were decreased in a dose-dependent manner. Anti-tumor activity of the TIMI.4-specific T cells was also demonstrated by a survival test, where the tumor-bearing nu/nu mice which received the activated T-cells survived about 30% longer than the control mice which received the tumor cells alone. These suggest that adoptive transfer of TIMI.4-specific T cells could be a candidate for effective therapy of the murine lymphoma.