불안정한 생리활성물질들은 외부 환경에 의해 빠르게 분해된다. 그러므로 이러한 물질들을 안정화시키기 위한 캡슐화 기술은 매우 중요하다. 비타민 $D_3$의 전구체인 7-디하이드로콜레스테롤(7-DHC)은 일반인의 표피 각화세포에서 열충격 단백질(Heat Shock Protein)의 발현을 단백질과 mRNA의 수준에서 증가시키는 것으로 알려졌다. 하지만 7-DHC의 국소용 피부 제제로의 이용은 낮은 용해도와 화학적 불안정성 때문에 이용이 제한되었다. 본 연구에서 7-DHC는 나노에멀젼(NE), 고형 지질 나노 입자 (SLN) 그리고 키토산이 코팅된 고형 지질 나노 입자(CASLN)에 봉입하였다. NE와 SLN은 지질의 용융점 이상의 온도에서 고압의 호모제나이져를 통과시켜 제조하였다. CASLN은 SLN 분산액에 키토산을 용액을 첨가하여 제조하였으며 양(+)의 제타전위를 나타내었다. NE, SLN, CASLN 속에서 7-DHC의 안정도를 각각의 온도조건에서 시간의 경과에 따라 확인하였다. 열분석과 X선 회절 분석은 지질의 결정화 정도를 확인하기 위해서 수행하였다. 그 결과, CASLN은 기존의 SLN보다 불안정한 7-DHC를 효과적으로 봉입함으로서 안정성을 개선시켰다.
In order to explore tick proteins as potential targets for further developing vaccine against ticks, the total proteins of unfed female Dermacentor silvarum were screened with anti-D. silvarum serum produced from rabbits. The results of western blot showed that 3 antigenic proteins of about 100, 68, and 52 kDa were detected by polyclonal antibodies, which means that they probably have immunogenicity. Then, unfed female tick proteins were separated by 12% SDS-PAGE, and target proteins (100, 68, and 52 kDa) were cut and analyzed by LC-MS/MS, respectively. The comparative results of peptide sequences showed that they might be vitellogenin (Vg), heat shock protein 60 (Hsp60), and fructose-1, 6-bisphosphate aldolase (FBA), respectively. These data will lay the foundation for the further validation of antigenic proteins to prevent infestation and diseases transmitted by D. silvarum.
Objective: Shearing is one of the practices that is applied periodically to fiber producing animals, which can also alter resistance of animals to high temperatures in especially summer months. This study aimed to investigate effects of shearing on some physiological and hormonal parameters in Akkaraman sheep during summer season. Methods: This study was carried out on 39 non-pregnant Akkaraman ewes (aged 1.5 years at the beginning of experiment). The 39 ewes were chosen randomly from the flock belonging to the Erciyes University and they were assigned to two groups as follows: i) group A (n = 20) designed as the control group, they were shorn and group B (n = 19) designed as the experimental group, they were unshorn. Prior to the shearing (-1 day) and on days 1, 7, 15, 30, 45, 60, 75, and 90 following the shearing, blood samples were taken from the vena jugularis of each sheep. Cortisol, β-endorphin, growth hormone (GH), thyroxine (T4), triiodothyronine (T3), and heat shock protein 70 (HSP-70) concentrations were determined using the enzyme immunoassay method. Body weight (BW), rectal temperature (RT), pulse rate (PR), and respiratory rate (RR) of each sheep were recorded at the same time. The data obtained were analyzed using two-way repeated measures analysis of variance. Results: Statistical analysis showed a significant effect of shearing×period interaction (p<0.01) and a significant effect of period (p<0.01) on BW, HSP-70, cortisol, T4 and RT, PR, GH, β-endorphin, T3, respectively. Also these analysis showed no significant effect of shearing×period interaction or period on RR. Conclusion: The results showed that the thermoregulation abilities of sheep were affected by shearing treatment and the shorn ewes were less affected by heat stress. In conclusion, based on the data of this study, shearing can be considered as a necessary management practice that requires protection for sheep from the effect of heat stress.
To examine the differential expression of proteins during the cycling (70~80% confluences) and G0/G1 (full confluences) phases in porcine fetal fibroblast cells, we used a global proteomics approach by 2-D gel electrophoresis (2-DE) and MALDI-TOF-MS. Cycling cell were harvested at approximately 70% to 80% confluent state while cells in G0/G1 phase were recovered after maintenance of a confluent state for 48 hr. Cellular proteins with isoelectric points ranging between 3.0~10.0, were analyzed by 2-DE with 2 replicates of each sample. A total of approximately 700 spots were detected by 2.D gels stained with Coomassie brilliant blue. On comparing the cell samples obtained from the cycling and G0/G1 phases, a total of 13 spots were identified as differentially expressed proteins, of which 8 spots were up-regulated in the cycling cell and 5 were up-regulated in the G0/G1 phase. Differentially expressed proteins included K3 keratin, similar to serine protease 23 precursor, protein disulfide-isomerase A3, microsomal protease ER-60, alpha-actinin-2, and heat-shock protein 90 beta. The identified proteins were grouped on the basis of their basic functions such as molecular binding, catabolic, cell growth, and transcription regulatory proteins. Our results show expression profiles of key proteins in porcine fetal fibroblast cells during different cell cycle status.
Kim, Hyo Jeong;Park, Min Young;Ma, Kyung-Cheol;Kim, Young Cheol
식물병연구
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제26권4호
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pp.279-282
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2020
In 2019, symptoms of Botrytis mold on the peony (Paeonia lactiflora Pall.) 'Sarah Bernhardt' were observed during a survey of the commercial greenhouses of Gangjin County, South Korea. The initial symptoms, small brown spots, were observed mainly at the leaf margins. The lesions extended to the interior of leaves forming irregular spots in which abundant conidia developed. Fungal colonies were obtained from surface-sterilized tissue excised from growing edges of the lesions that were transferred to potato dextrose agar. Melanized irregular sclerotia were formed in these colonies after 40 days at 8℃. Molecular phylogeny based on sequences of genes for glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, heat-shock protein 60, and RNA polymerase subunit II were highest for the PBC-2 isolate to the type strains of Botrytis cinerea, rather than other Botrytis species associated with peony diseases. Following Koch's postulates, healthy Sarah Bernhardt plants were inoculated with a foliar application of conidial suspensions of the isolate PBC-2. Following incubation under humidity with a 12 hr photoperiod for 7 days, symptoms developed on the leaf margins that were identical to those observed in the greenhouses. This study is the first report of Botrytis blight caused by B. cinerea on peonies grown in commercial greenhouses in South Korea.
Zhou, Jia;Yue, Shuangming;Xue, Benchu;Wang, Zhisheng;Wang, Lizhi;Peng, Quanhui;Xue, Bai
Journal of Animal Science and Technology
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제63권5호
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pp.1126-1141
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2021
Recent evidence has shown that methionine (Met) supplementation can improve milk protein synthesis under hyperthermia (which reduces milk production). To explore the mechanism by which milk protein synthesis is affected by Met supplementation under hyperthermia, mammary alveolar (MAC-T) cells were incubated at a hyperthermic temperature of 42℃ for 6 h in media with different concentrations of Met. While the control group (CON) contained a normal amino acid concentration profile (60 ㎍/mL of Met), the three treatment groups were supplemented with Met at concentrations of 10 ㎍/mL (MET70, 70 ㎍/mL of Met), 20 ㎍/mL (MET80, 80 ㎍/mL of Met), and 30 ㎍/mL (MET90,90 ㎍/mL of Met). Our results show that additional Met supplementation increases the mRNA and protein levels of BCL2 (B-cell lymphoma-2, an anti-apoptosis agent), and decreases the mRNA and protein levels of BAX (Bcl-2-associated X protein, a pro-apoptosis agent), especially at an additional supplementary concentration of 20 ㎍/mL (group Met80). Supplementation with higher concentrations of Met decreased the mRNA levels of Caspase-3 and Caspase-9, and increased protein levels of heat shock protein (HSP70). The total protein levels of the mechanistic target of rapamycin (mTOR) and the mTOR signalling pathway-related proteins, AKT, ribosomal protein S6 kinase B1 (RPS6KB1), and ribosomal protein S6 (RPS6), increased with increasing Met supplementation, and peaked at 80 ㎍/mL Met (group Met80). In addition, we also found that additional Met supplementation upregulated the gene expression of αS1-casein (CSN1S1), β-casein (CSN2), and the amino acid transporter genes SLC38A2, SLC38A3 which are known to be mTOR targets. Additional Met supplementation, however, had no effect on the gene expression of κ-casein (CSN3) and solute carrier family 34 member 2 (SLC34A2). Our results suggest that additional Met supplementation with 20 ㎍/mL may promote the synthesis of milk proteins in bovine mammary epithelial cells under hyperthermia by inhibiting apoptosis, activating the AKT-mTOR-RPS6KB1 signalling pathway, and regulating the entry of amino acids into these cells.
Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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제36권5호
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pp.346-352
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2010
Introduction: Heat shock protein70 (HSP70) is a highly conserved family of proteins produced after a variety of stresses. Many studies reported that the overexpression of HSP70 can improve the prognosis of the patients with sepsis through a reduction of the nitric oxide concentration. However, these results only revealed the effect of HSP70 and nitric oxide. No studies have examined the relationship between HSP70 and nitric oxide. The aim of this study was to evaluate the effect of the overexpression of HSP70 on the expression of inducible nitric oxide synthase and the nitric oxide concentration. In addition, the mechanism of the relationship of HSP70 and inducible nitric oxide synthase (iNOS) in sepsis was examined. Materials and Methods: The experiments were performed on male sprague-dawley rats. Sepsis was induced by a cecal ligation and puncture (CLP). Glutamine (GLN) or saline was administered 1 hour after the initiation of sepsis. Serum and lung tissues were acquired from the rats 12 hours or 24 hours after the initiation of sepsis. The nitric oxide concentration, the expression of HSP70 in lung, and the gene expression of iNOS in lung were analyzed. The three groups, sham operation, CLP and CLP+GLN, were compared. Results: Compared to the other groups, in CLP+GLN, GLN administered after the initiation of sepsis enhanced the expression of HSP70 in the lung at 12 hours ($47.19{\pm}10.04$ vs. $33.22{\pm}8.28$, P=0.025) and 24 hours ($47.06{\pm}10.60$ vs. $31.90{\pm}4.83$, P=0.004). In CLP+GLN, GLN attenuated the expression of iNOS messenger RNA (mRNA) in the lung at 12 hours ($5,513.73{\pm}1,051.60$ vs. $4,167.17{\pm}951.59$, P=0.025) and 24 hours ($18,740.27{\pm}8,241.20$ vs. $9,437.65{\pm}2,521.07$, P=0.016), and reduced the concentration of nitric oxide in the serum at 12 hours ($0.86{\pm}0.48$ vs. $3.82{\pm}2.53$, P=0.016) and 24 hours ($0.39{\pm}0.25$ vs. $1.85{\pm}1.70$, P=0.025). Conclusion: The overexpression of HSP70 induced by the administration of GLN in sepsis attenuates the expression of the iNOS gene but reduces the nitric oxide concentration.
The application of high pressure on cellular morphology, proliferation and protein expression of Jurkat cells (human T lymphocyte cell line) has been extensively investigated. In the present study, we manufactured a novel pressure chamber that modulates 5% $CO_{2}$, temperature and pressure (up to 3 ATA). Jurkat cells was incubated 2 ATA pressure and analyzed cellular morphology and growth using an electron microscopy and MTT assay. The cells showed the morphological changes in the cell surface, which appeared to cause a severe damage in cell membrane. The growth rate of the cells under 2 ATA pressure decreased as cultured time got increased. Furthermore, a long term exposure of high pressure on Jurkat cells may act as one of the important cellular stresses that leads to inducing cell death. Cellular proteomes were separated by 2-dimensional electrophoresis with pH 3-10 ranges of IPG Dry strips. And many proteins showed significant up-and-down expressions with hyperbaric pressure. Out of all, 10 spots were identified significantly using matrix-assisted laser desorption/ionization-time of fight (MALDI-TOF) mass spectrometry. We and found that 9 protein expressions were decreased and one protein, heat shock protein HSP 60, was increased in Jurkat cells under 2 ATA. Identified proteins were related to lipid metabolism and signal transduction.
환경에 존재하는 중금속인 Cd은 생물에게 유입되며 먹이사슬을 통해 생물에게 축적된다. 본 연구에서는 카드뮴 노출에 따른 오염지표생물인 실지렁이(Tubifex tubifex)의 체내 농축 반응 및 스트레스 유전자 발현 패턴을 분석하기 위해, 퇴적물 내 카드뮴 노출 후 생존율 변화, 체내 농축 농도 측정, 그리고 스트레스 반응 유전자인 열 충격 단백질(HSP60 and HSP70)과 항산화효소인 GST의 발현 패턴을 관찰하였다, Cd 노출 퇴적물에 노출된 T. tubifex의 생존율은 노출 10일에 0.4 mg kg-1 Cd에서 93%, 1.87 mg kg-1 Cd에서 96%, 6.09 mg kg-1 Cd에서 93%로 관찰되었다. T. tubifex의 체내 Cd 농도는 퇴적물 내 Cd 농도에 비해 높게 나타났으며, 0.4 mg kg-1 Cd에서는 실험 10일에 18.4 mg kg-1 Cd, 1.87 mg kg-1 Cd에서 실험 1일에 13.06 mg kg-1 Cd, 6.09 mg kg-1 Cd에서 실험 10일에 79.11 mg kg-1 Cd로 가장 높게 나타났다. HSP60 유전자 발현은 6.09 mg kg-1 Cd 노출 퇴적물에서 시간 의존적으로 발현이 대조군에 비해 증가였으며, HSP70은 모든 농도에서 대조군에 비해 시간 의존적인 발현의 증가를 보였다. 또한, GST는 모든 농도에서 실험 1일에 대조군에 비해 발현이 증가한 후, 실험 10일까지 발현이 감소하였다. 이러한 연구결과는 퇴적물 내에 존재하는 Cd에 대한 실지렁이의 생태독성학적 및 분자유전학적 독성영향을 확인한 결과로, 환경 내 오염지표종으로 실지렁이를 이용한 환경독성평가의 기초자료로 활용될 수 있을 것이다.
비닐하우스는 노지보다 UV-B 선량이 적고 외기와 차단되어 노지와 다른 생육환경 하에서 작물이 생육하게 된다. 본 연구는 UV-B 저선량 상태인 비닐하우스 재배 잎들깨에 UV-B를 처리하여 수량과 생리변화를 검토하고자 수행하였다. UV-B는 형광램프를 이용하여 잎들깨 수관으로부터 150, 120, 90 cm에서 처리하여 각각 노지자연량, 노지자연량+50% 증가량, 노지자연량+100% 증가량을 다른 광의 간섭이 없는 밤 9시부터 2시간씩 30일간 처리하였다. UV-B 처리에 의한 잎들깨 수량은 비닐하우스, 노지 자연량 150% 증가량, 노지자연량, 노지자연량+100% 증가량 처리 순이었다. 7월 20일의 자연 UV-B 선량은 노지 13.6 kJ/일, 비닐하우스 4.9 kJ/일로 비닐하우스의 UV-B 선량은 노지보다 64% 감소되는 것으로 측정되었다. UV-B가 균일하게 처리된 잎들깨의 단백질을 추출하여 2차원전기영동으로 분리하고, 이미지분석하여 발현량을 분석한 결과 UV-B에 의해 33개의 단백질 발현이 변화되었으며 이중 10개가 동정되었다. 동정된 단백질의 기능별로 분류하면 광합성과 관련된 것이 40%, 스트레스 및 스트레스 방어와 관련된 것이 60%였다. UV-B에 의해 발현이 감소한 단백질은 광합성과 관련된 ATP synthase CF1 alpha chain이었고 발현이 증가한 단백질은 DNA recombination and repair protein recF, Heat shock protein 21, Catalase, Galactinol synthase, S-adenosyl-L-methionine, Calcium-dependent protein kinase(CDPK)-like 로 주로 스트레스 및 스트레스 방어와 관련된 단백질들로서 UV-B는 잎들깨 세포내 DNA와 광합성기구를 손상시켜 광합성에 저해적으로 작용하여 수량을 감소시킨 것으로 판단되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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