최근 혹병이 심하게 발생한 충북지방의 포도나무의 뿌리로부터 선택배지를 이용하여 Agrobacterium속 세균을 분리하고 동정하였다. 분리균의 지방산 분석을 통한 MIDI에 의한 동정, 16S rDNA 염기서열, 생화학적 특성, 종 특이적 primer을 이용한 PCR 결과로 13개 분리균은 모두 A. tumefaciens로 동정 되었으며, 포도나무 혹병균인 A. vitis는 분리되지 않았다. 모든 분리균은 토마토와 포도나무의 줄기와 뿌리에 병원성을 나타내지 않았다. Rep-PCR 결과 분리균은 A. tumefaciens와 일부 유사성이 있지만 전체적으로 병원균인 A. tumefaciens와 A. vitis와는 유사성이 낮았다. 이상의 결과는 충북 일부 지방의 MBA와 거봉에서 발생한 혹병을 일으키는 병원균은 토양이나 뿌리로부터 전반되지 않고 묘목을 통해서 전반되었을 가능성을 시사하고 있다.
Jung, Sung-Min;Hur, Youn-Young;Preece, John E.;Fiehn, Oliver;Kim, Young-Ho
The Plant Pathology Journal
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제32권6호
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pp.489-499
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2016
Green shoot cuttings of 10 different grapevine species were inoculated with Agrobacterium vitis to find disease-related metabolites in the grapevine. Crown galls formed 60 days after inoculation varied in gall severity (GS) evaluated by gall incidence (GI) and gall diameter (GD), which were classified into three response types as RR (low GI and small GD), SR (high GI and small GD), and SS (high GI and large GD), corresponding to resistant, moderately resistant, and susceptible responses, respectively. In this, 4, 4, and 2 Vitis species were classified into RR, SR, and SS, respectively. Gas chromatography mass spectrometry (GC-MS) analysis of the grapevine stem metabolites with A. vitis infection showed 134 metabolites in various compound classes critically occurred, which were differentially clustered with the response types by the principal component analysis. Multivariate analysis of the metabolite profile revealed that 11 metabolites increased significantly in relation to the response types, mostly at post-inoculation stages, more prevalently (8 metabolites) at two days after inoculation than other stages, and more related to SS (7 metabolites) than RR (3 metabolites) or SR (one metabolite). This suggests most of the disease-related metabolites may be rarely pre-existing but mostly induced by pathogen infection largely for facilitating gall development except stilbene compound resveratrol, a phytoalexin that may be involved in the resistance response. All of these aspects may be used for the selection of resistant grapevine cultivars and their rootstocks for the control of the crown gall disease of the grapevine.
The main grape producing regions in Korea were surveyed for the occurrence and relative incidence of crown gall disease on grapevine. The results of the survey showed that the disease tended to affect tetraploid cultivars, which produce a large and sweet fruit but are very weak to cold weather. Incidence of crown gall disease was high on the tetraploid cultivars, Kyoho (Gerbong), Daebong, and Black Olympia while it was low on the diploid cultivars, Cambell Early and Sheridan. The disease incidence was very high on Anseong, Cheonan, and Chincheon, where the major growing areas of tetraploid cultivars and grapevines were burried in the winter to protect from freeze injury, whereas it was low in Yungdong, Kimcheon, and Nonsan. Crown gall disease did not increased with grapevine age on both Cambell Early and Kyoho. It remained low in Cambell Early, but high for all ages on Kyoho, Galls were found on the crown region and mid part of the trunk, but more galls were on small branches and canes on Kyoho grapevines. More than one third of ZKyoho grapevines inspected had galls on multiple locations on grapevines. On Kyoho, 56.3% of the galls covered more than 50% of the crown gall disease affects severely on the cultivar.
최근에 재배면적이 급격히 증가하고 있는 포도에 난방제 병해인 줄기혹병의 길항세균을 선발하여 생물학적 방제의 가능성을 조사한 결과 포도 줄기혹병 이병포장으로부터 채취한 토양에서 길항균 strain 27를 선발하여 in vitro 및 in vivo bioassay결과 biovar 1 병원균인 A. tumefaciens C58과 Ach5, biovar 2 병원균인 A. rhizogenes 13264 및 biovar 3 병원균인 A. vitis 등을 모두 억제시키는 효과를 보였으며, Strain 27의 세균학적 특성은 pAgK84와 비슷한 크기(46 Kb)의 plasmid를 갖고 있음을 확인하였다.
한국 포도나무의 뿌리혹병에 의한 발생생태를 조사하기 위하여 뿌리혹병이 발병주율 및 포도나무 재배포장에서 병원균을 측정하였다. 노지와 하우스재배 '거봉'의 뿌리혹병 발병주율은 각각 $0.4{\sim}97.9%$ 및 $1.4{\sim}3.8%$, '캠벨얼리'의 발병주율은 각각 $1.2{\sim}2.1%$ 및 $0{\sim}1.8%$이었다. Agrobacterium 속의 밀도는 뿌리혹병이 발생한 포장의 토양이 뿌리혹병이 발생하지 않은 토양보다 많이 분리되었다. 플레이트상에서 콜로니 형태와 크기로 21개의 포도나무 토양 샘플로부터 Agrobacterium spp. 480균주를 선발하였다. 이들 중 포도나무에 접종하였을 때 13균주만이 뿌리혹을 형성하였다.
포도나무의 추위피해는 여러 형태로 나타난다. 월동피해 중에는 기계적 피해, 동해 또는 수세의 약화 원인이 된다. 본 연구는 '거봉'의 뿌리혹병의 피해를 억제하기 위하여 저항성 대목의 선발과 월동법 개선을 통한 방제법을 개발하기 위하여 실시하였다. SO4, 5BB, 3306대목에 $10^4cfu/ml$의 뿌리혹병균(YK2823, YK3312, LMG259, HKA234)을 접종했을 때는 혹이 발병하지 않았으나 $10^6cfu/ml$의 높은 농도에서는 모든 대목에서 혹이 형성된다. 그러나 혹의 크기는 거봉에서보다 매우 작았다. 인공접종에 의하여 3품종의 뿌리혹병 저항성 대목을 선발하였다. 볏짚과 보온덮개로 줄기와 가지에 피복하는 월동법은 뿌리 혹병을 예방하는데 가장 효과적이었다. 이러한 처리방법은 포도나무가 월동하는 동안 수체의 온도 차이가 $9.6^{\circ}C$로 온도변화가 최소화되었고 동해발생이 없어 정상적으로 생육하였다.
한국식물병리학회 1994년도 Proceedings of International Symposium on BIOLOGICAL CONTROL OF PLANT DISEASES Korean Society of Plant Pathology
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pp.11-26
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1994
Crown gall of stonefruit and nut trees is one of the very few plant diseases subject to efficient biological control. The disease is caused by the soil-inhabiting bacteria Agrobacterium tumefaciens and Agrobacterium rhizogenes and the original control organism was a non-pathogenic isolate of A. rhizogenes strain K84. Control is achieved by dipping planting material in a cell suspension of strain K84 which specifically inhibits pathogenic strains containing a nopaline Ti plasmid. Because the agrocin 84-encoding plasmid (pAgK84) is conjugative, it can be transmitted from the control strain to pathogenic strains which, as a result, become immune to agrocin 84 and cannot be controlled. To prevent this happening, the transfer genes on pAgK84 were located and then largely eliminated by recombinant DNA technology. The resulting construct, strain K1026, is transfer deficient but controls crown gall just as effectively as does strain K84. Field data from Spain confirm that pAgK84 can transfer to pathogenic recipients from strain K84 but not from strain K1026. The latter has been registered in Australia as a pesticide and is the first genetically engineered organism in the world to be released fro commercial use. It is recommended as a replacement for strain K84 to prevent a breakdown in the effectiveness of biological control of crown gall. Several reports indicate that both strains K84 and K1026 sometimes control crown gall pathogens that are resistant to agrocin 84. A possible reason for this is that both strains produce a second antibiotic called 434 which inhibits growth of nearly all isolates of A. rhizogenes, both pathogens and non-pathogens. Crown gall of grapevine is caused by another species, Agrobacterium vitis. It is resistant to agrocin 84 and cannot be controlled by strains K84 or K1026. It is different from other crown gall pathogens in several characteristics, including the fact that, although a rhizosphere coloniser, its also lives systemically in the vascular tissue of grapevine. Pathogen free propagating material can be obtained from tissue culture or, less surely, by heat therapy of dormant cuttings. A number of laboratories are searching for a biocontrol strain that will prevent, or at least delay, reinfection. A non-pathogenic A. vitis strain F/25 from South Africa looks very promising in this regard.
2002년에서 2005년 동안 경북김천, 천안, 경기지역의 포도재배지로부터 채집한 300여점의 포도 혹병반으로부터 A. vitis의 PCR 특이검출 Phe A primer를 이용하여 포도혹병균의 대량분리를 실시하여 0.25kb의 PCR 특이밴드가 증폭된 51균주가 포도 혹병균으로 선발되었다. 이 균주들을 Ti-Plasmid 유래의 Vir A primer로 적용한 결과 40균주에서 0.5kb의 특이밴드가 검출되었다. 거봉포도와 당근절편에서 다양한 양상의 병원성을 보였으며 25균주가 거봉포도에 강한 병원성을 나타내었으며, 다른 균주는 약하거나 비 병원성을 보였다. 본 연구에서 분리한 10개 균주를 대상으로한 세균의 이화학적 특성은 균주간에 약간은 달랐으나, 3-Ketolactose의 비생성, 2%NaC 첨가 배지에서의 성장, Melezitose로부터의 산을 생성하지 못하는 등 비교균주와 대체적으로 일치하는 경향을 보였다. 따라서, PheA and Vir A primer를 이용하여 Agrobacterium vitis 균주를 대량 분리할 수 있으며 신속, 정확하게 동정할 수 있을 것으로 생각되었다.
거봉 포도나무에 혹병을 일으키는 A. vitis 균주간의 DNA 다양성 평가를 하기 위하여 12종류의 URP primer 적용 성을 조사한 결과 URP1F, URP2F, URP2R, URP4R, URP17R primer가 균주 간 DNA 다형성검정에 유용하였다. 국내외에서 분리한 59 A. vitis 균주를 URP-PCR 증폭하였던 바 균주간의 매우 다양한 PCR 다형성 밴드를 형성 하였으며 12 strain type으로 나눌 수 있었으며 거봉포도로부터 분리된 A. vitis 균주는 4 strain type의 비교적 단순한 유전적 다양성으로 나타났으나, 거봉이외의 다른 포도 품종이나 국외에서 도입된 A. vitis 균주는 8 strain type의 많은 유전적 다양성을 보여 거봉품종 유래 국내 균주와는 PCR 다형성 type에 있어 차이점을 보였다. URP-PCR 다형성 밴드를 집괴 분석하여 UPGMA dendrogram을 작성한 결과 7개의 대 Group으로 분류할 수 있었으며, 그룹 간에는 $62{\sim}100$%까지 다양한 유전적 유사성이 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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