We have isolated and characterized Agrius convolvuli cDNA encoding a c-type lysozyme. The cDNA sequence encodes a processed protein of 139 amino acid residues with 19 amino acid residues amino-terminal signal sequence and 120 amino acid residues mature sequence. The amino acid residues responsible for the catalytic activity and the binding of the substrate are conserved. Agrius lysozyme has a high identity to Manduca sexta. Recombinant A. convolvuli lysozyme was expressed in Escherichia coli BL21(DE3) pLysS cells for pGEX 4T-1 expression vector. Their optimal conditions for the fusion protein expression and purification were screened. Lysozyme gene amplified with primers ACLyz BamHI and ACLyz XhoI was ligated into the pGEX 4T-1 vector, which contained the glutathione S-transferase(GST) gene for fusion partner. The fusion protein was induced by IPTG and identified by SDS-PAGE analysis. Molecular weight of the fusion protein was estimated to be about 45 kDa. Recombinant lysozyme, fused to GST, was purified by glutathion-Sepharose 4B affinity chromatography. Western blot analysis of this protein revealed an immunoreactivity with the anti-Agrius lysozyme.
Caffeine이 랫트의 간조직에서 diethylnitrosamine(200mg/kg B.W., DEN)에 의해 유도되는 preneoplastic altered foci형성의 initiation단계에 미치는 효과를 관찰한 바 다음과 같은 결과를 얻었다. Altered foci의 지표로 사용되는 glutathione S-transferase(GST-P)-positive foci의 수는 caffeine 음수수 ml 당 2mg병행투여군 $(7.48{\pm}3.33)$ 및 1mg 병행 투여군 $(7.50{\pm}3.32)$ 모두에서 DEN 단독투여대조군$(14.08{\pm}5.16)$에 비하여 현저히 낮게 나타났으며, 면적 또한 caffeine 2mg병행투여군 $(0.29{\pm}0.17)$, 1mg병행투여군 $(0.30{\pm}0.13)$에서 DEN단독투여대조군 $(0.46{\pm}0.21)$에 비하여 유의성 있는 낮은 수치가 관찰되었다. 이러한 결과는 caffeine이 간암발생의 initiation 단계에 작용하여 억제효과를 나타냄을 암시하였다.
춘천시 근교의 토양으로부터 glutathione 생산균주를 분리, 동정하고 glutathione 생산 최적조건을 검토하였다. 분리된 균주는 동정을 행한 결과 Candida sp.로 판단되었다. Glutathione 생산을 위한 Candida sp의 배지조성은 fructose 1.0, yeast extract 4.0, NaCl 0.04, thiamine-HCl5{\mu}g/ml$ 및 L-cysteine 0.04 이었으며 온도는 $25^{\circ}C$, pH 6.0에서 36시간 배양하였을 때 glutathione 생산이 가장 좋았다. Glutathion 생산을 위한 최적배지에서 Candida sp. 균주에의한 glutathione 생산량은 $92{\mu}g/ml$로 YM 배지보다 약 2.5배 정도 증가하였다.
The investigation aimed to study the effect of ginseng on the hepatic glutathion S-transferase activity. The ginseng methanol extract was administered to rats and mice for 10 days and their hepatic gluthatione S-transferase activities were measured by the method of Habig et al. Glutathione S-transferase activities in the rat treated with 100 and 500mg/kg ginseng methanol extract were increased by 13.4% and 17.10%, respectively and their increases were statistically significant. Similar results were also found in the mouse treated with ginseng 100mg/kg methanol extract. To investigate components of the extract which induce the enzyme, the methanol extract was fractionated into ether and butanol fraction and their effect on the enzyme was compared. Glutathione S-transferase activities in the rat treated with ether fraction were increased by 13.1%, similar to that obtained with ginseng methanol extract, whereas, butanol fraction did not show any increase in the enzyme activities. In the rats treated with maltol, one of the components in ether fraction, 5mg/kg for 10 days, activity of glutathione S-transferase was increased by 7.89%, but its increase was not significantly different from control group. Therefore, it may be concluded that ginseng methanol extract and its ether soluble fraction had effect on the elevation of glutathione S-transferase activities, whereas, butanol fraction of ginseng methanol extract had no effect on the enzyme.
송이의 공시균(KFR1432)과 실험실에서 자체 분리한 균(YxT, WxT, $\textrm{NK}_3\textrm{T}$)의 생장속도의 차이와 FE SEM으로 확인한 미세구조의 차이로 공시균과 자체 분리균이 서로 다른 균임을 확인할 수 있었다. Tyrosinase 활성 억제 실험을 위해 각각 균사체의 열수 추출물, 에탄올 추출물, 배양액을 hexane, chloroform, ethyl acetate로 분획하였다. 그 결과 모든 균의 ethyl acetate 분획층과 수층에서 tyrosinase 활성을 억제하는 것으로 나타났으며, KFR1432의 ethyl acetate 분획층과 YxT의 수층에서 억제율이 100%를 넘어 큰 저해 활성을 보였다. 또한 항산화제 처리 결과 ascorbic acid와 glutathion은 생장을 다소 증가시키거나 별 영향을 주지 못한 반면, tocopherol 의 경우 농도가 높아질수록 생장을 억제하는 것으로 나타났다. Tyrosinase 활성 억제에 있어서는 모든 항산화제 처리구에서 무처리구에 비해 높은 억제율을 보였다.
In this study, the liver protective effect of the hot water extracts of Scutellaria radix (SR) was investigated. The SR exhibited a hepatoprotective activity against $CCl_4$-induced liver damage in Sprague-Dawley (SD) rats and Chang cell. And the SR also showed significant decrease of malodialdehyde (MDA) and increase of glutathion (GSH), catalase activity in rat liver homogenate. The expression of cytochrome P450 2E1 (CYP2E1), measured by RT-PCR and western blot, was significantly decreased in the SR treated SD rats and Chang cell. But $CCl_4$ and SR has no significant effect on 1A1 and 3A1 isoform of cytochrome P450. Based on these findings, it is suggested that hepatoprotective effects of SR possibly related to antioxidative effects and downregulation of CYP2E1 expression.
Oxidative stress is one of the major limiting factor in plant productivity. Reactive oxygens species (ROS) generated during metabolic processes damage cellular functions and consequently lead to disease, senescence and cell death. Plants have evolved an efficient defense system by which the ROS is scavenged by antioxidant enzymes such as superoxide dismutase (SOD) and ascorbate peroxidase (APX). Attempts to reduce oxidative damages under the stress conditions have included the manipulation of 갠 scavenging enzymes by gene transfer technology. Increased SOD activities of transgenic plants lead to increased resistance against oxidative stresses derived from methyl viologen (MV), and from photooxidative damage caused by high light and low temperature. Transgenic tobacco plants overexpressing APX showed reduced damage following either MV treatment of photooxidative treatment. Overexpression of glutathion reductase (GR) leads to increase in pool of ascorbate and GSH, known as small antioxidant molecules. These results indicate through overexpression of enzymes involved in ROS-scavenging could maintain or improve the plant productivities under environment stress condition. In this study, the rational approaches to develop stress-tolerant plants by gene manipulation of antioxidant enzymes will be introduced to provide solutions for the global food and environmental problems in the $21^\textrm{st}$ century.
Water extract from Cnidii Rhizoma (CRW) was tested for colon cancer chemopreventive activity by measuring the induction of phase II detoxification enzyme activity [quinone reductase (QR) and glutathione S-transferase (GST)] and glutathion (GSH) levels and ornithine decarboxylase (ODC) activity in cultured human colorectal adenocarcinoma HT-29 cells. CRW inhibited cell proliferation in cultured HT-29 cells. CRW induced QR activity in a dose-dependent manner in a concentration range of 0.1${\sim}$5.0 $mg/m{\ell}$. GST activity was also induced with the treatment of CRW in HT-29 cells. In addition GSH levels was increased with CRW. CRW inhibited ODC activity, a key enzyme of polyamine biosynthesis, which is enhanced in tumor promotion. These results suggest that CRW has colon cancer chemopreventive activity by increasing phase II enzyme activity and GSH levels and inhibiting ODC activity in vitro.
The hepatoprotective effect of liposoluble portion of Pyropia yezoensis (PYLP) was investigated against alcohol-induced liver injury in mice. Fatty acids were predominant in PYLP obtained from hexane fraction of 70% EtOH extract after ultrasonication. In particular, polyunsaturated fatty acids such as eicosapentaenoic acid and linoleic acid accounted for 56.91% of the total lipids. PYLP significantly reduced liver damage induced by the alcohol treatment in mice. PYLP treatment increased the activity of antioxidant enzymes including superoxide dismutase, catalase, and glutathion peroxidase by reducing thiobarbituric acid reactive substances. Histological observations showed that PYLP minimizes damage to living tissue induced by alcohol treatment by modulating the expression level of proteins involved in the anti-apoptotic signaling pathway. Our results suggest that PYLP, rich in polyunsaturated fatty acids extracted from the red alga P. yezoensis, will be useful as a potential liver protectant in the hangover industry.
Objectives : The purpose of this study is to evaluate antioxidant activities and reducing serum alcohol concentration of extract of Lentinus edodes on the alcohol administered rats. Methods : Antioxidant effect was measured by total phenolic compound and DPPH-radical scavenging activity of extract of Lentinus edodes in vitro. Blood alcohol concentration, aldehyde concentration, malondialdehyde concentration, glutathion concentration were measured in vivo. Results : The extract of Lentinus edodes increased DPPH-radical scavenging activity dose-dependently. The water extract with boiling water showed lower antioxidant activity and phenolic content than 70% ethanol extract in vitro. Blood alcohol concentration was significantly reduced by pre-treatment of ethanol extract of Lentinus edodes. The effect was more significant than commercial product used as a positive control. Conclusions : This study suggest that Lentinus edodes can be a potential nature resource for the management of ethanol toxicity although the mechanism of action involved in the treatment remains to be explored.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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