Melhylovorus sp. strain SS1 grown on methanol was found to show activities of key enzymes of the linear route, $NAD^+$-linked formaldehyde and formate dehydrogenases, and the cyclic route, hexulose-6-phosphate synthase, glucose-6-phosphate isomerase, glucose-6-phosphate dehydrogenase, and 6-phosphogluconate dehydrogenase, for formaldehyde oxidation. The activities of the cyclic route enzymes were higher than those of the linear route enzymes. The bacterium also exhibited activities of the key enzymes of the ribulose monophosphate and Entner-Doudoroff pathways and transaldolase involved in the formaldehyde assimilation and the enzymes involved in the biosynthesis of extracellular polysaccharide. Cells grown in the presence of 2.3 mM ammonium sulfate were higher in the productivity of extracellular polysaccharide, but lower in the growth yield, than those grown in the presence 7.6 mM ammonium sulfate. The activities of 6-phosphogluconate dehydrogenase, phosphoglucomutase, and UDP-pyrophosphorylase in cells grown under nitrogen-limited condition were higher, but that of 6-phosphogluconate dehydratase/2-keto-3-deoxy-6-phosphogluconate aldolase was lower, than those in cells grown in the presence of sufficient amount of nitrogen source.
By spectrophotometric assay method, the following enzymes could be detected in Dunaliella tertiolecta and Chlorella pyrenoidosa cell-free extracts: Hexokinase; Glucose-6-phosphate, 6-Phosphogluconate and Triosephosphate dehydrogenase; Transketolase; Phosphogluco and Ribosephosphate isomerase; Phosphoglucomutase; Phosphofructokinase; Fructosediphosphate aldorase and Ribulosephosphate 3-epimerase. Such enzymes are in accordance with the proposed pathway of glucose catabolism by D. tertiolecta as well as C. pyrenoidosa. Also, it could be estimated, under the presence of NADP, that pentose phosphate pathway were more active than glycolytic pathway in D. tertiolecta cell-free systems.
Phosphosugars are found in all living organisms and are commercially valuable compounds with possible applications in the development of a wide range of specialty chemicals and medicines. In carbohydrate metabolism, fructose 6-phosphate (F6P) is an essential intermediate formed by phosphorylation of 6' position of fructose in glycolysis, gluconeogenesis, pentose phosphate pathway and Calvin cycle. In glycolysis, F6P lies within the glycolysis metabolic pathway and is produced by isomerisation of glucose 6-phosphate. For large-scale production, F6P could be produced from starch using many enzymes such as pullulanase, starch phosphorylase, isomerase and mutase. In enzymatic reactions carried out at high temperatures, the solubility of starch is increased and microbial contamination is minimized. Thus, thermophile-derived enzymes are preferred over mesophile-derived enzymes for industrial applications using starch. Recently, we reported the production of glucose 1-phosphate (G1P) from starch by Thermus caldophilus GK24 enzymes. Here we report the production of F6P from starch through three steps; from starch to glucose 1-phosphate (glucan phosphorylase, GP), then glucose 6-phosphate (phosphoglucomutase, GM) and then F6P (phosphoglucoisomerase, GI). Using 200 L of 1.2% soluble starch solution in potassium phosphate buffer, 1,253 g of G1P were produced. Then, 30% yields of F6P were attained at the optimum reaction conditions of GM : G1 (1 : 2.3), 63.5$^{\circ}C$, and pH 6.85. The optimum conditions were found by response surface methodology and the theoretical values were confirmed by the experiments. The optimum starch concentrations were 20 g/L under the given conditions.
The contractility of isolated rat atria, suspended in Krebs-Ringer bicarbonate medium containing 5.5mM glucose, was depressed approximately 50% by 0.1 mM of lidocaine. Partial recovery of the lidocaine-depressed contractility was achieved by the metabolizable substrates pyruvate, acetate, and fructose, but not by addition of glucose. Glucose produced the dose-dependent increase in the force of contraction of normal atria, whereas pyruvate, acetate, and fructose produced no significant effect in the contractile activity of the normal atria. In the absence of exogenous glucose lidocaine produced more marked depression of atrial contractility than that in the presence of exogenous glucose. The results of this study may confirm that the utilization of cardiac glycogen is also inhibited by lidocaine at sites of the glucose phosphate isomerase step or step between glycogen to glucose-6-phosphate.
Kwak, Seong Eun;Shin, Hyung Eun;Zhang, Di Di;Lee, Jihyun;Yoon, Kyung Jin;Bae, Jun Hyun;Moon, Hyo Youl;Song, Wook
Korean Journal of Exercise Nutrition
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v.23
no.2
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pp.28-33
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2019
[Purpose] Recent studies have shown that glucose-6-phosphate isomerase (GPI)-which is a glycolysis interconversion enzyme-reduces oxidative stress. However, these studies are limited to tumors such as fibrosarcoma, and there are no studies that have examined the effects of exercise on GPI expression in mice skeletal muscle. Furthermore, GPI acts in an autocrine manner thorough its receptor, autocrine motility factor receptor (AMFR); therefore, we investigated expression level changes of secreted GPI from skeletal muscle in in vitro study to examine the potential role of GPI on skeletal muscle. [Methods] First, we performed an in vitro study, to identify the condition that upregulates GPI levels in skeletal muscle cells; we treated C2C12 muscle cells with an exercise-mimicking chemical, AICAR. AICAR treatment upregulated GPI expression level in C2C12 cell and its secretomes. To confirm the direct effect of GPI on skeletal muscle cells, we treated C2C12 cells with GPI recombinant protein. [Results] We found that GPI improved the viability of C2C12 cells. In the in vivo study, the exercise-treated mice group showed upregulated GPI expression in skeletal muscle. Based on the in vitro study results, we speculated that expression level of GPI in skeletal muscle might be associated with muscle function. We analyzed the association between GPI expression level and the grip strength of the all mice group. The mice group's grip strengths were upregulated after 2 weeks of treadmill exercise, and GPI expression level positively correlated with the grip strength. [Conclusion] These results suggested that the exercise-induced GPI expression in skeletal muscle might have a positive effect on skeletal muscle function.
Interstrain polymorphisms of isoenzyme profiles and mitochondrial (Mt) DNA fingerprints were observed among seven strains of Acnnthnmoeba isolated from different sources and morphologically assigned to A. polvphngn. Mt DNA ringerprints by eight restriction endonucleases (Bgl II, Sca I, Cla I, EcoR I, Xbo I, Kpn I, Sal I, and Sst I) revealed considerable interstrain polymorphisms . Isoenzyme profiles revealed considerable interstrain polymorphisms for acid phosphatase, lactate dehydrogenase, and glucose-6- phosphate dehydrogenase while those for glucose phosphate isomerase , leucine aminopeptidase , and malate dehydrogenase showed similarity Despite of the interstrain polymorphisms, the isoengyme profiles and Mt DNA fingerprints of the strain Ap were found to be identical with those of the strain .tones . Mt DNA fingerprinting was found to be highly applicable for the strain identification, characterization, and differentiation. Key words: Acanthnmoebn polyphcga, interstrain polymorphism, isoenzyme profiles , Mt DNA fingerprints, strain differentiation, strain identification.
A horizontal starch gal electrophoresis for enzyme proteins extracted from 3 species of Korean planorbid snails; Gyraulus convexiusculus, Hippeutis cantori and Segmentina hemisphaerula was carried out in order to elucidate their genetic relationships.The results from 12 enzymes employed in three different kinds of buffer systems are summarized as follows:1) Two loci from each enzyme of aldehyde oxidase, esterase, glucose phosphate isomerase. isocitrate dehydrogenase, leucine aminopeptidase, malate dehyogenase, peptidase and xanthine oxidase were detected, and only one locus was observed from each of the following four enzymes: 6-phosphogluconate dehydrogenase, glyceraldehyde-phosphate dehydrogenase, glutamate oxaloacetate transaminase and glycerol-3-phosphate dehydrogenase.2) Most of loci in 3 species of planorbid snails employed showed homozygous and monomorphic banding patterns and some of them were specifis as genetic markers among different species. However, a few of loci (EST-1. EST-2 and GPI-2)showed polymorphic banding patterns. 3)Hippeutis cantori and Segmentina hemisphaerula were more closely clustered in a dendrogram with the genetic iddentity value of 0.431, and these two species were lineated with Gyraulus convexiusculus as another cluster at the value of 0.294.In summarizing the above results, three species of Korean planorbid snails employed in this study mostly showed monomorphic enzyme protein banding patterns and genetic differences specific among 3 species.
Matrix Assisted Laser Desorption ionization Time of Flight (MALDI-TOF) was used for enzymes identification related to B -1,3-glucan synthesis. Agrobacterium sp. ATCC31750 was cultivated with two stage Continuous Stirrer Tank Reactor (CSTR) and the cells were harvested and their protein profiles were analysed by two dimensional electrophoresis. The specific enzyme spot was treated with trypsin and ana lysed by MALDI-TOF to get peptide molecular weight. The peptide molecular weights were matched with Agrobacterium tumefacience's Data Base from the matrix science site, then could identify the avaliable key enzymes. In this study, we identified key metabolite of synthesis of beta-1,3-glucan, such as glucose-6-phosphate isomerase, phosphoglucomutase, B-1,3-glucan synthase and glucokinase, and we also identified uracil phosphoribocyl transferase and Ribosome recycling factor also.
Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society
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v.10
no.7
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pp.1766-1772
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2009
In this study, we are interested in comparing the protein profiles of acid-shocked and control cells of S. mutans isolated from Korean children with caries. The results of 2D gel electrophoresis showed that twelve proteins are up-regulated when the cells were grown under 20 mM lactic acid stress in the exponential phase. Up-proteins under acid stress were estimated a major key of the survival and proliferation of S. mutans in low pH environments. These proteins are estimated generally associated with three biochemical pathways: glycolysis, alternative acid production and branched-chain amino acid biosynthesis.
Protozoan viruses may influence the function and pathogenicity of the protozoa. Trichomonas vaginalis is a parasitic protozoan that could contain a double stranded RNA (dsRNA) virus, T. vaginalis virus (TVV). However, there are few reports on the properties of the virus. To further determine variations in protein expression of T. vaginalis, we detected 2 strains of T. vaginalis; the virus-infected ($V^+$) and uninfected ($V^-$) isolates to examine differentially expressed proteins upon TVV infection. Using a stable isotope N-terminal labeling strategy (iTRAQ) on soluble fractions to analyze proteomes, we identified 293 proteins, of which 50 were altered in $V^+$ compared with $V^-$ isolates. The results showed that the expression of 29 proteins was increased, and 21 proteins decreased in $V^+$ isolates. These differentially expressed proteins can be classified into 4 categories: ribosomal proteins, metabolic enzymes, heat shock proteins, and putative uncharacterized proteins. Quantitative PCR was used to detect 4 metabolic processes proteins: glycogen phosphorylase, malate dehydrogenase, triosephosphate isomerase, and glucose-6-phosphate isomerase, which were differentially expressed in $V^+$ and $V^-$ isolates. Our findings suggest that mRNA levels of these genes were consistent with protein expression levels. This study was the first which analyzed protein expression variations upon TVV infection. These observations will provide a basis for future studies concerning the possible roles of these proteins in host-parasite interactions.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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