• 제목/요약/키워드: gel permeation chromatography

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남극에서 분리한 저온성 세균 유래 단백질 분해 효소 (Purification and Characterization of Extracellular Protease form Psychrotrophic Antarctic Bacteria)

  • 조기웅;방지헌;홍혜원;박승일;이윤호
    • 미생물학회지
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    • 제38권4호
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    • pp.254-259
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    • 2002
  • 저온에서 최적 생육을 보이는 저온성 균주를 남극해양에서 분리하여 생화학적 특성 및 165 rRNA 염기서열로부터 Shewanella sp.에 속하는 균주로 동정하고 Shewanella sp. L93으로명명하였다. 본 균주에서 생산되는 저온성 세포외 단백질 분해 효소(extracellular protease)를 ammonium sulfate precipitation, High-Q column chromatography, 일차 gel permeation chromatography, BioScale Q2 ion exchange chromatography 및 gel permeation chromatography를 통하여 purification fold 19.3, yield 0.7 %로 정제하였고 그 특성을 조사하였다.

Pseudomonas sp. Aryl Acylamidase의 정제 및 성질 (Purification and Characterization of Aryl Acylamidase from Pseudomonas sp.)

  • 황인균;방원기
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제26권5호
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    • pp.413-419
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    • 1998
  • Acetaminophen 자화성 Pseudomonas sp.에 존재하는 aryl acylamidase[EC 3.5.1.13]는 ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sephacel anion exchange chromatography, Phenyl-Sepharose CL-4B hydrophobic interaction chroamtography 및 Sephadex G-100 gel-permeation chromatography를 통해 순수 정제되었다. 정제된 효소는 SDS-PAGE상에서 분자량을 측정한 결과 56 kDa, Sephadex G-100 gel-permeation chromatography로 측정한 결과 57 kDa이었으며, 따라서 단일한 subunit로 구성된 효소이었다. 정제된 효소의 최대 활성을 위한 pH와 온도는 각각 pH 10.5와 4$0^{\circ}C$이였다. 5$0^{\circ}C$에서 30분간 처리시 34%의 잔존활성을 나타내었다. Acetaminophen과 4'-nitroacetanilide쉐 대한 Km값은 각각 0.10 mM과 0.11 mM 이었다.

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핵전이법에 의해 형성된 Saccharomycopsis 속과 Saccharomyces 속의 잡종에서 glucoamylase 생산에 관한 연구 (Production of Glucoamylase from Hybrid Constructed by Intergenic Nuclear Transfer between Saccharomycopsis sp. and Saccharomyces sp.)

  • 양영기;임채영;김종권;문명님;이영하
    • 미생물학회지
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    • 제37권3호
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    • pp.182-188
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    • 2001
  • 핵전이에 의해 형성된 잡종의 유도 배양액으로부터 glucoamylase를 정제하고 몇몇의 효소 특성을 조사하였다. 효소는 76배 정제하였고, ammonium sulfate fractionation, Sephadex G-150 gel permeation chromatography 그리고 DEAE-Sephadex A-50 ion exchange chromatography의 순서 배양액으로부터 정제한 결과 전반적인 수율은 16%를 나타내었다. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis와 Sephadex G-150 gel permeation chromatography에 의하여 정제된 glucoamylase의 분자량을 측정한 결과 57.5 kDa를 나타내었으며, 정제된 효소의 최적 pH와 온도는 각각 5.0과 $40^{\circ}C$로 나타났다. 또한 가용성 전분에 대한 Km값은 2.6 mg/ml을 나타내었으며, 정제된 효소는 $Ca^{2+}$, EDTA, $Co^{2+}$, $Mg^{2+}$, 그리고 $Mn^{2+}$의 존재하에 활성이 중진됨을 알수 있었다.

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Bacillus sphaericus Asporogenic Mutant Spo - D1216의 독성에 관한 연구 (Studies on the Toxic Activity of Bacillus sphaericus Spo -D1216 Asporogenic Mutant)

  • 복거중;김영한;이형환
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제13권2호
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    • pp.157-162
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    • 1985
  • Bacillus sphaericus 1593 K-5 균주의 Culex pallens 모기유충에 대한 LC$_{50}$(cells/$m\ell$)은 2.6$\times$$10^2$이었다. B. sphericus 1593 K-5 Spo-D 1216 균주는 Culex pallens 모기유충에 대해 독성을 나타내지 않았다. B. sphaericus 1593 K-5 균주는 포자가 형성되어 가면서 독성이 증가함을 보였다. B. sphaericus 1593 K-5 균주의 세포질을 Sep-hadex G-100 컬럼상에서 gel permeation 크로마토그래피를 행하였을 때 3개의 단백질 분획을 보였으며 이 중 한 분획이 활성분획있다. 이 활성 분획을 DEAE-Sepha dex A-50 컬럼상에서 ion-exchange 크로마토그래피를 행하였을 때 4개의 단백질 분획을 보였으며 이중 한 분획이 활성분획이었다. B. sphericus 1593 K-5 Spo-D1216균주의 세포질은 Sephadex G-100 컬럼상에서 gel permeation 크로마토그래피를 행하였을 때 2개의 단백질 분획을 보였으며 이 분획 모두가 활성이 없음이 생체실험 결과 밝혀졌다.다.

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복수로부터의 단세포군 항체의 정제를 위한 크로마토그래프 분리 정제 시스템의 개발 - 1. 히드록실 아파타이트 크로마토그라프와 겔 여과 크로마토그라프로 이루어진 2단계 연속공정 사용 - (Development of Chromatographic Downstream Processing for The Purification of Monoclonal Antibody from Ascites Fluid: Part 1. Tandem Use of Hydroxylapatite Chromatography and Gel Permeation Chromatography)

  • Ahn, I.S.;Park, C.Y.
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제17권1호
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    • pp.19-23
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    • 1989
  • 생쥐 하이브리도마 세포를 주사한 생쥐의 복수로부터 대장암에 대한 단세포군 항체 IgM을 분리 정제해 내기 위하여 히드록실 아파타이트 크로마토그라피와 겔 여과 크로마토그라피를 연속적으로 사용하는 2단계 분리 정제 시스템을 개발하였다. 히드록실 아파타이트 크로마토그라피 단계에서는 단백질 밴드의 희석현상을 탈착제인 인산 나트륨 완충액의 농도구배와 유속을 제어함에 의하여 줄일 수 있었는 바 이들 변수들의 최적치는 5.92$\times$$10^{-3}$M/cm및 0.2$m\ell/\textrm{cm}^2$/min으로 각각 나타났다. 겔 여과 크로마토그라피를 제 2단계로 사용함으로 써 SDS-PAGE 밴드들의 은착색으로 판단된 바 99.99% 이상의 순도를 갖는 단세포군 항체 단백질을 분리 정제해 낼 수 있었다.

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Pseudomonas fluorescens에 의한 Furfural의 분해대사 조절물질에 관하여 (Purification and Characterization of the Regulatory Substance of Furfural Biodegradation in Pseudomonas fluorescens)

  • 이병웅;유병설;이계준;하영칠
    • 미생물학회지
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    • 제23권4호
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    • pp.241-247
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    • 1985
  • Pseudomonas fluorescens에 의해 세포외에 생산된 furfural의 furoic acid로의 생물학적 전환을 촉진시키는 ninhydrin 반응에 양성인 대사물 (Ninhydrin positive Substance=NPS)을 ion exchange chromatography와 gel permeation chromatography 그리고 cellulose columm chromatography에 의하여 분리, 정제하였다. IR spectrophotometry와 $^H$-NMR spectrometry 그리고 $^{13}C-NMR$ spectrometry에 의해 이 NPS는 -$^H$ and $-NH_2$와 그리고 $-CH_2-OH$group을 갖는 유기물질로 추정된다.

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Effect of Analytical Parameters of Gel Permeation Chromatography on Molecular Weight Measurements of Urea-Formaldehyde Resins

  • Jeong, Bora;Park, Byung-Dae
    • Journal of the Korean Wood Science and Technology
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    • 제45권4호
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    • pp.471-481
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    • 2017
  • As the molecular weight (MW) of urea-formaldehyde (UF) resins had a great impact on their properties, this work was conducted to study effect of analytical parameters of gel permeation chromatography (GPC) on the MW measurement of UF resins. GPC parameters such as flow rate, column, detector temperature, and sample injection temperature were selected to compare number-average molecular weight (Mn), weight-average molecular weight (Mw), molecular weight distribution (MWD) and polydispersity index (PDI) of two UF resins with different viscosities. As expected, UF resin with higher viscosity resulted in greater Mn and Mw than those of low viscosity UF resin. When the flow rate increased, both Mn and Mw of UF resins decreased and MWD became narrower. By contrast, both Mn and Mw increased and MWD became wide when the column, detector, and sample injection temperature increased. The column, detector, and sample injection temperature of $50^{\circ}C$ at a flow rate of $0.5m{\ell}/min$ resulted in the highest MW and broadest MWD for the GPC analysis. These results suggest that the apparent molecular size or a hydrodynamic radius of UF resin molecules dissolved in the mobile phase affect to Mn, Mw and MWD.

Overexpression of Escherichia coli Thiol Peroxidase in the Periplasmic Space

  • Kim, Sung-Jin;Cha, Mee-Kyung;Kim, Il-Han;Kim, Ha-Kun
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제8권1호
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    • pp.92-95
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    • 1998
  • Overproduction of Escherichia coli thiol peroxidase in the periplasmic space was achieved by locating the appropriate gene on a downstream region of the strong T7 promoter. E. coli strain BL21 carrying the recombinant plasmid pSK-TPX was induced by IPTG, lysed, and analyzed by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. A large amount of the overexpressed thiol peroxidase was located in the periplasmic space. A homogeneous thiol peroxidase was obtained from E. coli osmotic shock fluid by simple one-step gel permeation chromatography.

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Molecular Weight Determination of Polymers by Matrix Assisted Laser Desorption Ionization in Mass Spectrometry

  • Kim, Jin Sung;Yoo, Jong Shin
    • 분석과학
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    • 제8권4호
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    • pp.465-468
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    • 1995
  • Matrix assisted laser desorption ionization in mass spectrometry is a fast and accurate method to determine the molecular weight of natural and synthetic polymers. Unknown peptides such as elastase inhibitor and $\small{D}$-hydantoinase were analyzed using sinapinic acid as matrix and their molecular weights were compared with the results from protein sequencer and gel filtration chomatography, respectively. Synthetic polymers such as polyethyleneglycol, polypropyleneglycol, polydimethylsiloxane, and polystyrene were analyzed using matrices such as 2,5-dihydroxybenzoic acid, 4-hdroxyazobenzenecarboxylic acid, and 2-nitrophenyl octyl ether. Average molecular weights of polystyrene were compared with molecular weights by gel permeation chromatography.

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