Development of Chromatographic Downstream Processing for The Purification of Monoclonal Antibody from Ascites Fluid: Part 1. Tandem Use of Hydroxylapatite Chromatography and Gel Permeation Chromatography

복수로부터의 단세포군 항체의 정제를 위한 크로마토그래프 분리 정제 시스템의 개발 - 1. 히드록실 아파타이트 크로마토그라프와 겔 여과 크로마토그라프로 이루어진 2단계 연속공정 사용 -

A sequential system composed of hydroxylapatite chromatography and gel permeation chromatography was developed to purify the IgM type monoclonal antibody against the colon cancer cell SC-1 from the ascitic fluid of mice injected with the murine hybridoma CH07E02. In the hydroxylapatite chromatographic step the band dilution could be reduced by controlling the gradient and flow rate of the eluent, the sodium phospate buffer, the optimum values for these variables being 5.82$\times$10$^{-3}$M/cm and 0.2$m\ell/\textrm{cm}^2$/min, respectively. A degree of purity better than 99.99% as judged from silverstaining of the SDS-PAGE bands, was obtained by adding the gel permeation chromatographic step in tandem.

생쥐 하이브리도마 세포를 주사한 생쥐의 복수로부터 대장암에 대한 단세포군 항체 IgM을 분리 정제해 내기 위하여 히드록실 아파타이트 크로마토그라피와 겔 여과 크로마토그라피를 연속적으로 사용하는 2단계 분리 정제 시스템을 개발하였다. 히드록실 아파타이트 크로마토그라피 단계에서는 단백질 밴드의 희석현상을 탈착제인 인산 나트륨 완충액의 농도구배와 유속을 제어함에 의하여 줄일 수 있었는 바 이들 변수들의 최적치는 5.92$\times$$10^{-3}$M/cm및 0.2$m\ell/\textrm{cm}^2$/min으로 각각 나타났다. 겔 여과 크로마토그라피를 제 2단계로 사용함으로 써 SDS-PAGE 밴드들의 은착색으로 판단된 바 99.99% 이상의 순도를 갖는 단세포군 항체 단백질을 분리 정제해 낼 수 있었다.