Aspergi11us niger F-580, a potent producer of aminopeptidase M inhibitor, was isolated from the brown spots of plant leaves with a pathological trait. The inhibitory activity was found only in the fungal mat formed by surface culture of Aspergi11us niger F-580, but not in the culture supernatant or cell pellet. The inhibitor was purified from the hot water extract of this fungal mat by using chromatographies on Diaion HP-20, DEAE-cellulose, Sephadex G-l0 and YMC-ODS-AQ columns. The purified inhibitor was analyzed by UV, mass, and NMR spectroscopies, and identified as OF494911, which had been isolated as an aminopeptidase B inhibitor from Penicillium rugulosum OF4949
The selective inhibition of PTP1B has been widely recognized as a potential drug target for the treatment of type 2 diabetes and obesity. In the course of screening for PTP1B inhibitory fungal metabolites, the organic extracts of several fungal species isolated from marine environments were found to exhibit significant inhibitory effects, and the bioassay-guided investigation of these extracts resulted in the isolation of fructigenine A (1), cyclopenol (2), echinulin (3), flavoglaucin (4), and viridicatol (5). The structures of these compounds were determined mainly by analysis of NMR and MS data. These compounds inhibited PTP1B activity with 50% inhibitory concentration values of 10.7, 30.0, 29.4, 13.4, and 64.0 ${\mu}M$, respectively. Furthermore, the kinetic analysis of PTP1B inhibition by compounds 1 and 5 suggested that compound 1 inhibited PTP1B activity in a noncompetitive manner, whereas compound 5 inhibited PTP1B activity in a competitive manner.
The iron uptake and utilization pathways play a critical role in allowing human pathogens, including Cryptococcus neoformans, the causative agent of fatal meningoencephalitis, to survive within the mammalian body by competing with the host for iron. Here we show that the iron regulon is also required for diverse environmental stress responses and that in C. neoformans, it is regulated by the high-osmolarity glycerol response (HOG) pathway. Between CFO1 and CFO2, two ferroxidase genes in the iron regulon, CFO1 but not CFO2 was induced during oxidative and osmotic stress. Interestingly, we found that the HOG pathway repressed basal expression of both CFO1 and CFO2. Furthermore, when the HOG pathway was blocked, CFO2 also responded to oxidative and osmotic stress and the response of CFO1 was increased. We also established that CFO1 plays a major role in responding and adapting to diverse environmental stresses, including oxidative and genotoxic damage, osmotic fluctuations, heavy metal stress, and stress induced by cell membrane destabilizers. Therefore, our findings indicate that in C. neoformans, the iron uptake and utilization pathways are not only required for iron acquisition and survival, but also play a significant role in the environmental stress response through crosstalk with the HOG pathway.
An anti-fungal material produced by actinomycetes was isolated from domestic soil. This actinomycetes was identified as Streptomyces albogriseus by 16S rDNA sequence. YEME (yeast extract 4 g, malt extract 10 g, glucose 4 g, D.W 1l, pH 7.00.2) medium was used for production of anti-fungal materials. S. albogriseus was cultured in a shaking incubator for 2 weeks at 150 rpm and $25^{\circ}C$. An anti-fungal material produced by S. albogriseus was identified at 340 nm by uv/vis- spectrometer and it showed powerful anti-fungal activity. This is the first report that secondary metabolite produced by S. albogriseus showed an activity against phytopathogenic fungi such as Collectrichum coccodes, Botrytis cinerea, Cladosporium cucumerinum, Didymella bryoniae.
Chitinase activities from Shumard oak tissues were determined to study changes in chitinase activities related to water stress. The enzyme extracted in sodium acetate buffer (0.1M, pH 4.5) was assayed by a colorimetric method. In addition, the fungal hyphae of Hypoxylon atropunctatum in xylem tissues of oak were observed through scanning electron microscopy. The enzyme in oak tissues was mainly endochitinase, and optimum pH for enzyme activity was 5. Specific chitinase activities from both of stems held under high relative humidity (ranges of 0.63-1.11 pKatal/$\mu\textrm{g}$ of protein) and stems held under low relative humidity (ranges of 0.41-0.99 pKatal/$\mu\textrm{g}$ of protein) were significantly increased following fungal inoculation with H. atropunctatum. However, there was no significant difference in chitinase activities between tissues held under high and low humidities, which might be due to fungal chitinase. Scanning electron microscopy showed holes in fungal hyphae in the xylem tissues of stems held under high humidity but not in the stems held under ow humidity, suggesting that hyphae might be hydrolyzed by plant hydolases such as chitinase.
The ascomycete fungus Fusarium graminearum is a major causal agent for Fusarium head blight in cereals and produces mycotoxins such as trichothecenes and zearalenone. Isolation of the fungal strains from air or cereals can be hampered by various other airborne fungal pathogens and saprophytic fungi. In this study, we developed a selective medium specific to F. graminearum using toxoflavin produced by the bacterial pathogen Burkholderia glumae. F. graminearum was resistant to toxoflavin, while other fungi were sensitive to this toxin. Supplementing toxoflavin into medium enhanced the isolation of F. graminearum from rice grains by suppressing the growth of saprophytic fungal species. In addition, a medium with or without toxoflavin exposed to wheat fields for 1 h had 84% or 25%, respectively, of colonies identified as F. graminearum. This selection medium provides an efficient tool for isolating F. graminearum, and can be adopted by research groups working on genetics and disease forecasting.
Cheng, Yan Fen;Jin, Wei;Mao, Sheng Yong;Zhu, Wei-Yun
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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v.26
no.10
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pp.1416-1423
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2013
The metabolomic profile of the anaerobic fungus Piromyces sp. F1, isolated from the rumen of goats, and how this is affected by the presence of naturally associated methanogens, was analyzed by nuclear magnetic resonance spectroscopy. The major metabolites in the fungal monoculture were formate, lactate, ethanol, acetate, succinate, sugars/amino acids and ${\alpha}$-ketoglutarate, whereas the co-cultures of anaerobic fungi and associated methanogens produced citrate. This is the first report of citrate as a major metabolite of anaerobic fungi. Univariate analysis showed that the mean values of formate, lactate, ethanol, citrate, succinate and acetate in co-cultures were significantly higher than those in the fungal monoculture, while the mean values of glucose and ${\alpha}$-ketoglutarate were significantly reduced in co-cultures. Unsupervised principal components analysis revealed separation of metabolite profiles of the fungal mono-culture and co-cultures. In conclusion, the novel finding of citrate as one of the major metabolites of anaerobic fungi associated with methanogens may suggest a new yet to be identified pathway exists in co-culture. Anaerobic fungal metabolism was shifted by associated methanogens, indicating that anaerobic fungi are important providers of substrates for methanogens in the rumen and thus play a key role in ruminal methanogenesis.
In order to breed a Cordyceps bassiana isolate that stably forms fruiting body in artificial cultivation, isolates derived from subculturing and single spores were tested through mating. From C. bassiana EFCC 783, three subcultured isolates EFCC 2830, EFCC 2831 and EFCC 2832 were obtained and fourteen single conidial isolates were obtained from these three subcultured isolates. Two different morphological types were found in the fourteen single conidial isolates. One type was able to form synnemata and another type was not able to form synnemata. Since switch of morphological type was not observed despite their continuous subculturing, cross was performed between the two types and the formation of fruiting body was examined. Ascospores were obtained from a selected fruiting body formed by hybrid of the cross. Self-cross and combinational cross of the ascospore-derived isolates generated hybrids that stably produce high quality fruiting body in artificial media.
Vendramin, Elena;Gastaldo, Andrea;Tondello, Alessandra;Baldan, Barbara;Villani, Mariacristina;Squartini, Andrea
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.20
no.3
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pp.630-636
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2010
A survey of the endangered orchid Orchis militaris populations was carried out in north-eastern Italy. The occurrence of fungal root endophytes was investigated by light and electron microscopies and molecular techniques. Two main sites of presence were individuated in the Euganean Hills, differing as to the percentage of flowering individuals and of capsules completing maturity. Fluorescence microscopy revealed an intracellular cortical colonization by hyphal pelotons. Two ITS PCR products co-amplified. Sequencing revealed for the former an identity and a high similarity (99%) with a Tulasnellaceae (Basidiomycota) fungus found within tissues of the same host in independent studies in Hungary and Estonia, suggesting an interesting case of tight specificity throughout the Eurosiberian home range. The second amplicon had 99% similarity with Tetracladium species (Ascomycota) recently demonstrated as potential endophytes. TEM revealed two different hyphal structures. Double fungal colonization appears to occur in Orchis militaris and the possible requirement of a specific fungal partner throws light on the causes of this plant's rarity and threatened status.
Stem tissues of tomato plants (cv. Kwanyang) inoculated with Phytophthora capsici were examined by light and electron microscopy to compare early cytological differences between comaptible and incompatible interactions of tomatoes with the fungus. Twenty four hours after inoculation, the compatible isolate S 197 colonized severely the epidermis, cortex, and xylem vessels of stem tissue, whereas only few fungal cells colonized the stem tissues inoculated with the incompatible isolate CBS 178.26. Fragmented plasma membrane, distorted chloroplast, degraded cell wall, remnants of host cytoplasm were early ultrastructural features of the damaged host cell observed both in the compatible and incompatible interaction, a number of vesicles were distributed in the space between fungal cell walls and plasma membrane. The degradation of host cell walls by P. capsici was more pronounced in the compatible than the incompatible interactions. The incompatible interactions of tomato cells with P. capsici were characterized by formation of host cell wall apposition in the cortical parenchyma cells, indicating that the apposition of electron-dense material from the host cell walls may function as a plant defense reaction to the fungus. The fungal cells encased by wall appositions had abnormal cytoplasm and separated plasma membranes. The haustorium which formed from the fungal hyphae did not further penetrate through the host wall apposition and cytoplasmic aggregation, especially in the incompatible reactions. In contrast, the haustorium of the compatible isolate S 197 was not encased by wall appositions.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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