Ninety-two isolates of Fusarium species were obtained from Chinese corn samples. The predominant Fusarium species isolated from corn seeds were F. moniliforme, F. proliferatum, F. oxysporum and F. subglutinans, and all 13 species were identified. Each isolate was grown on autoclaved wheat grains and wheat cultures were fed by twenty-one-day-old female rats for the toxicity test. Twenty-six out of 92 isolates caused the death accompanying feed refusal, severe weight loss, liver damage, and hemorrhages in the stomach and intestines. Of the toxigenic isolates, 17 isolates of F. moniliforme, 4 of F. oxysporum, 3 of F. proliferatum, and one of each F. sporotrichioides and unknown species were lethal to rats. The analyses of fumonisin B1 production of the 26 toxigenic Fusarium isolates were carried out by thin layer chromatography and high-performance liquid chromatography, and fumonisin B1 was confirmed by mass spectrometry. Fumonisin B1 was produced in wheat culture at levels ranging from 280 $\mu\textrm{g}$/g to 3,952 $\mu\textrm{g}$/g by all of toxigenic F. moniliforme and F. proliferatum, but by none of the other toxigenic Fusarium species. The present results suggest the high possibility of natural occurrence of fumonisin B1 in corn samples imported from China.
Two fumonisin-nonproducing strains of Fusarium verticillioides and their fumonisin producing progenitors were tested for aggressiveness toward maize, sorghum, rice, and beetroot seedlings grown under greenhouse conditions. None of the plants showed obvious disease symptoms after root dip inoculation. Fungal biomass was determined by species-specific real-time PCR. No significant (P = 0.05) differences in systemic colonization were detected between the wild type strains and mutants not producing fumonisins. F. verticillioides was not detected in any of the non-inoculated control plants. The fungus grew from roots to the first two internodes/leaves of maize, rice and beet regardless of fumonisin production. The systemic growth of F. verticillioides in sorghum was limited. The results showed that fumonisin production was not required for the infection of roots of maize, rice and beet by F. verticillioides.
In this study, we used functional genomic strategies, proteomics and quantitative real-time (qRT)-PCR, to advance our understanding of genes associated with fumonisin production in the fungus Fusarium verticillioides. Earlier studies have demonstrated that deletion of the FCC1 gene, which encodes a C-type cyclin, leads to a drastic reduction in fumonisin production and conidiation in the mutant strain (FT536). The premise of our research was that comparative analysis of F. verticillioides wild-type and FT536 proteomes will reveal putative proteins, and ultimately corresponding genes, that are important for fumonisin biosynthesis. We isolated proteins that were significantly upregulated in either the wild type or FT536 via two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis, and subsequently obtained sequences by mass spectrometry. Homologs of identified proteins, e.g., carboxypeptidase, laccase, and nitrogen metabolite repression protein, are known to have functions involved in fungal secondary metabolism and development. We also identified gene sequences corresponding to the selected proteins and investigated their transcriptional profiles via quantitative real-time (qRT)-PCR in order to identify genes that show concomitant expression patterns during fumonisin biosynthesis. These genes can be selected as targets for functional analysis to further verify their roles in $FB_1$ biosynthesis.
The efficiency of gamma irradiation (0, 1, 5, 10, 15, 20, and 30 kGy) as a sterilization method of corn samples (30 g) artificially contaminated with Fusarium moniliforme stored at normal condition ($25^{\circ}C$ with approximate relative humidity (RH) of 55%) and optimal condition ($25^{\circ}C$ with a controlled RH of 97%) was studied. The results showed that the fungal growth and the amount of fumonisin were decreased as the dose of gamma irradiation increased. Gamma irradiation at 1-5 kGy treatment significantly inhibited the growth of F. moniliforme by 1-2 log reduction on corn samples (P < 0.05). Sublethal effect of gamma irradiation was observed at 10-20 kGy doses after storage, and a complete inactivation required 30 kGy. Fungal growth and fumonisin production increased with higher humidity and longer storage time in all corn samples. This study also demonstrated that there was no strict correlation between fungal growth and fumonisin production. Storage at normal condition significantly resulted in lower growth and fumonisin production of F. moniliforme as compared with those stored at optimal condition (P < 0.05). Gamma irradiation with the dose of ${\geq}5$ kGy followed by storage at normal condition successfully prolonged the shelf life of irradiated corns, intended for human and animal consumptions, up to 7 weeks.
수분활성도를 $0.85{\sim}0.97$로 조절한 벼에서 Fusarium moniliforme NRRL 13569의 성장과 Fumonisin $B_{1}(FB_{1})$ 생성량을 조사하였다. 곰팡이이 성장은 Aw 0.97에서 가장 높았다. 곰팡이의 성장 속도와 최대 성장량은 수분활성도가 낮아질수록 점진적으로 감소하는 경향이었다. 곰팡이의 성장은 Aw 0.85에서도 가능한 것으로 나타나 벼에서 F. moniliforme의 성장을 막으려면 이보다 더 낮은 수분활성도의 유지가 필요한 것으로 생각된다. $FB_{1}$의 생성은 Aw 0.93과 0.90에서 흔적 수준의 생성량을 보였으며 그 이하에서는 $FB_{1}$의 생성을 확인할 수 없었다. 따라서 독소의 축적의 방지는 0.90 보다 낮은 Aw에서 가능하다고 생각된다.
The effects of some nutrients and culture conditions on the growth and the production of fumonisin B$_{1}$, (FB$_{1}$) from Fusarium moniliforme NRRL 13569 were investigated in liquid culture. Xylose and soytone yielded the highest mycelial growth as the C- and N-source, respectively. The highest level of FB$_{1}$, was obtained when yeast extract was used as the N-source but no FB$_{1}$, from NaNO$_{3}$. While Fe$^{+++}$ showed inhibition effect on FB$_{1}$, production, Zn$^{++}$ enhanced the FB$_{1}$, production as well as the mycelial growth. FB$_{1}$, was maximally produced when the initial pH value and the specific surface area of the medium was adjusted to 5 and 1.4 cm$^{2}$/ml, respectively. FB$_{1}$ formation reached the maximum value (210, 000 ng/ml) in 30 days and then decreased in Czapek medium substitued with 1% xylose and 0.3% yeast extract, and supplemented with 0.2% NH$_{4}$H$_{2}$PO$_{4}$ where the initial pH value and the specific surface area of the medium are optimally controlled.
Gibberellea fujikuroi (Gf) 종복합체는 최소 15개의 종으로 구성되어 있으며, 대부분 식물에 병을 일으킬 뿐 아니라 푸모니신과 같은 곰팡이독소를 생성한다. 본 연구에서는 우리나라 벼와 옥수수로부터 분리한 Gf 종복합체 소속 야생형 균주의 푸모니신 생성능을 검정하였다. 이들 분석대상 균주는 모두 푸모니신 생합성에 필수적인 polyketide synthase 유전자 FUM1을 가지고 있는 것으로 확인되었다. 총 88주의 Gf 종복합체 소속 균주(55 F. fujikuroi, 10 F. verticillioides, 20 F. proliferatum, 2 F. subglutinans, 1 F. concentricum)와 Gf 종복합체의 근연종인 4주의 F. commune를 쌀 배지에 배양한 후 각 균주의 푸모니신 생성 농도를 HPLC 방법으로 측정하였다. 대부분의 F. verticillioides과 F. proliferatum 균주는 기주 식물에 관계없이 푸모니신 $B_1$($0.5-2,686.4{\mu}g/g$)과 $B_2$($0.7-1,497.6{\mu}g/g$)를 다양한 범위 내에서 생성하였다. 반면 모든 F. fujikuroi을 비롯한 다른 Fusarium spp.의 균주로부터는 푸모니신이 검출되지 않았거나 $10{\mu}g/g$ 이하 수준의 미량만 검출되었다. 흥미롭게도 F. proliferatum과 F. fujikuroi의 경우, 옥수수 유래 균주 집단에서 벼 유래 균주 집단에 비해 상대적으로 고농도 푸모니신 생성 균주의 비율이 높았다. 한편, FUM1 유전자를 함유하고 있는 F. commune의 푸모니신 생성능은 본 연구를 통해 처음 보고된다.
Cheng, Yeong-Hsiang;Wu, Jih-Fang;Lee, Der-Nan;Yang, Che-Ming J.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제15권4호
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pp.610-614
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2002
The purpose of this study was to investigate the prevalence of fumonisin contamination in corn and corn-based feeds in Taiwan. A total of 233 samples was collected from 8 feed mill factories located in four different regions in Taiwan. The presence of fumonisin $B_1$ ($FB_1$) and $B_2$ ($FB_2$) was determined by thin layer chromatograph, while the total fumonisin content was determined using immuno-affinity column cleanup and fluorometer quantitation. Our results showed that 55 samples of swine feeds had the highest percentage of incidence of $FB_1$ and $FB_2$ (41.8% and 41.8%, respectively), followed by 66 samples of duck feeds (40.9% and 37.8%). However, the percentage of incidence of $FB_1$ and $FB_2$ was much lower in 43 samples of broiler feeds (23.2% and 13.9%) and 69 samples of corn (17.3% and 10.1%). Corn and duck feeds were found to have a significant higher level of means of total fumonisins ($5.4{\pm}1.5$ and $5.8{\pm}0.6$ ppm, respectively) than swine feeds ($2.9{\pm}0.4$ ppm) and broiler feeds ($3.0{\pm}0.5$ ppm). Comparing fumonisins distribution in different regions, the highest percentage of $FB_1$ incidence (39.2%) was found in the eastern region of Taiwan, and total fumonisins level ($4.5{\pm}0.7$ ppm) was significantly higher than other regions. However, the highest percentage of $FB_2$ incidence (32.0%) was found in the central region of Taiwan. Trimonthly analysis of data showed that both high percentage of $FB_1$ and $FB_2$ incidence (39.3% and 37.7%) and total concentration of fumonisin ($5.7{\pm}0.4$ ppm) were found in the period of Jan. to Mar., The incidence and concentration were significantly higher than other trimothly periods. These results indicate that fumonisin B mycotoxins are both widespread and persistent in feed-grade corn and corn-based feeds in Taiwan.
Ra, Do Kyung;Choi, Jae Yeon;Lee, Ju Ho;Nam, Ji Hyun;Lee, Jeoung Gu;Lee, Sung Mo
한국동물위생학회지
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제42권3호
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pp.127-133
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2019
The purpose of this study was to investigate the contamination level of representative mycotoxins that have adverse effects on livestock by using LC-MS/MS method and to utilize the results as basic data for the establishment of quality control system for feed, and to provide information on production and storage. A total of nine mycotoxins, including aflatoxin $B_1$, aflatoxin $B_2$, aflatoxin $G_1$, aflatoxin $G_2$, ochratoxin A, fumonisin $B_1$, fumonisin $B_2$, deoxynivalenol (DON), zearalenone (ZEN) were simultaneously analyzed in LC-MS/MS under ESI positive mode. Fumonisin $B_1$ and fumonisin $B_2$ were detected from 3 cases of 75 forage produced in Incheon area, the detection rate was 4.0%. The detection concentration was 0.01~0.02 mg/kg, which was lower than the domestic recommended limit. Fumonisins were detected in a slightly different manner from the results of mycotoxin studies reported in Korea, which is attributed to the high temperature and dry summer weather of the year. The result of LC-MS/MS method performance of 9 mycotoxins, the recovery of DON was quite low as $41.53{\pm}3.91%$ that is not suitable for simultaneous analysis. This is probably due to that the extract solution used in this study was not suitable for the extraction of DON, along with the characteristics of a very dry forage. For the study of mycotoxins in Incheon area forage for the first time, further investigation is needed for the safe supply of livestock products.
Park, Sook-Young;Seo, Jeong-Ah;Lee, Yin-Won;Lee, Yong-Hwan
The Plant Pathology Journal
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제17권5호
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pp.281-289
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2001
We analyzed 88 strains of Gibberella fujikuroi (Analmorph: Fusarium section Liseola) from maize in Korea for mating population, mating type, fumonisin production vegetative compatibility, and random amplified polymorphic DNA (RAPD) patterns. We found 50 strains that were MATA-2, 22 that were MATA-1, 1 that was MATD-1, and 15 that were not reproducibly fertile with any of the mating type testers. Of the 50 MATA-2, 15 were female fertile, while 10 of the 22 MATA-1 strains were female fertile. A total of 1,138 nitrate non-utilizing (nit) mutants were recovered from a total of 88 strains. These strains were grouped into 39 vegetative compatability groups (VCGs) by demonstrating heterokaryosis between nit mutants. A single maize ear could be infected by more than one VCG of F. moniliforme. RAPD analysis measured genetic diversity among 63 strains of F. moniliforme. Several VCGs were distinguished by RAPD fingerprinting patterns. Most strains produced significant levels of fumonisins. However, 6 MATA-2 strains from a single VCG produced higher levels of fumonisin $\textrm{B}_3$ than that of fumonisin $\textrm{B}_1$ or $\textrm{B}_2$. From these data, we concluded that most Korean strains of F. moniliforme associated with maize belonged to mating population A and produced significant levels of fumonisins. Futhermore, RAPD analysis could differentiate strains associated with different VCGs.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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