잉어(Cyprinus carpio) 암컷과 붕어(Carassius auratus) 수컷간 유도된 잡종에 대한 세포 유전학적 연구를 수행하였다. 유도된 잡종의 세포 및 핵의 크기는 양친의 중간값을 나타내었고, 염색체의 경우 잉어, 붕어 및 유도된 잡종 모두 2n=100 으로 나타났다. Flow cytometry를 이용, 잡종의 genome size를 분석한 결과, 유도된 잡종은 3.7pg/cell를 갖음으로서 잉어(3.6pg/cell)와 붕어(3.8pg/cell)의 중간치를 나타내었다.
Efficient plant regenerationsystem from cell suspension cultures was established in D. acicularis (2n = 90) by monitoring ploidy level and visual selection of the cultures. The highly regenerable cell lines selected maintained original ploidy level and consisted of compact cell clumps with yellowish color and relatively moderate growth, suggesting that it is possible to select visually the highly regenerable cell lines with the original ploidy level. All the regenerated plantlets from the highly regenerable cell cultures exhibited normal phenotypes and no variations in ploidy level were observed by flow cytometry (FCM) analysis.
Kumar, Prakash P.;Turner, Ian M.;Rao, A. Nagaraja;Arumuganathan, K.
Plant Biotechnology Reports
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제5권4호
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pp.317-322
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2011
We determined the nuclear DNA content (genome size) of over 35 accessions each of bamboo and rattan species from Southeast Asia. The 2C DNA per nucleus was quantified by flow cytometry. The fluorescence of nuclei isolated from the leaves and stained with propidium iodide was measured. The genome size of the bamboo species examined was between 2.5 and 5.9 pg DNA per 2C nucleus. The genome size of the rattan species examined ranged from 1.8 to 10.5 pg DNA per 2C nucleus. This information will be useful for scientists working in diverse areas of plant biology such as biotechnology, biodiversity, genome analysis, plant breeding, physiology and molecular biology. Such data may be utilized to attempt to correlate the genome size with the ploidy status of bamboo species in cases where ploidy status has been reported.
Ann, Xiao-Hua;Lun, Yong-Zhi;Zhang, Wei;Liu, Ben;Li, Xing-Yun;Zhong, Min-Tao;Wang, Xiao-Li;Cao, Jing;Ning, An-Hong;Huang, Min
Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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제15권12호
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pp.5055-5061
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2014
In this study, an anti-oxidant and anti-tumor protein Latcripin-3 of Lentinula edodes C91-3 was expressed in Escherichia coli. for the first time. According to the cDNA library, the full-length gene of Latcripin-3 was cloned by the methods of 3'-full rapid amplification of cDNA Ends (RACE) and 5'-full RACE. The structural domain gene of Latcripin-3 was inserted into the pET32 a(+). The functional protein of Latcripin-3 was expressed in Rosetta-gami (DE3) E. coli, evaluated by Western blotting and mass spectrometry. DPPH testing showed that the protein Latcripin-3 can scavenge free radicals remarkably well. The activity of functional protein Latcripin-3 on A549 cells was studied with flow cytometry and the MTT method. The MTT assay results showed that there was a decreases in cell viability in a dose-dependent and time-dependent manner in protein Latcripin-3 treated groups. Flow cytometry demonstrated that Latcripin-3 can induce apoptosis and block S phase dramatically in human A549 lung cancer cells as compared to the control group. At the same time, the cell ultrastructure observed by transmission electron microscopy supported the results of flow cytometry. This research offers new insights and advantages for identifying anti-oxidant and anti-tumor proteins.
Razmkhah, Mahboobeh;Arabpour, Fahimeh;Taghipour, Mousa;Mehrafshan, Ali;Chenari, Nooshafarin;Ghaderi, Abbas
Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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제15권17호
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pp.7201-7205
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2014
Chemokine and chemokine receptor expression by tumor cells contributes to tumor growth and angiogenesis and thus these factors may be considered as tumor markers. Here we aimed to characterize cells directly extracted from glioma, meningioma, and secondary brain tumors as well as non-tumoral cells in vitro. Cells were isolated from brain tissues using 0.2% collagenase and characterized by flow cytometry. Expression of SDF-1, CXCR4, CXCR7, RANTES, CCR5, MCP-1 and IP-10 was defined using flow cytometry and qRT-PCR methods. Brain tissue isolated cells were observed as spindle-shaped cell populations. No significant differences were observed for expression of SDF-1, CXCR4, CXCR7, RANTES, CCR5, and IP-10 transcripts. However, the expression of CXCR4 was approximately 13-fold and 110-fold higher than its counterpart, CXCR7, in meningioma and glioma cells, respectively. CXCR7 was not detectable in secondary tumors but CXCR4 was expressed. In non tumoral cells, CXCR7 had 1.3-fold higher mRNA expression than CXCR4. Flow cytometry analyses of RANTES, MCP-1, IP-10, CCR5 and CXCR4 expression showed no significant difference between low and high grade gliomas. Differential expression of CXCR4 and CXCR7 in brain tumors derived cells compared to non-tumoral samples may have crucial impacts on therapeutic interventions targeting the SDF-1/CXCR4/CXCR7 axis.
In this study, multiparametric flow cytometry (FCM) was installed to enumerate the diagnosis of Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 and Escherichia coli K12 (IFO 3301). The nucleic acids (DNA/RNA) were double stained by a LIVE/DEAD bacLight viability kit, involving green SYTO 9 and red propidium iodide (PI), based on the permeability of two chemicals according to the integrity of plasma membrane. As the results showed, the gate for dead bacteria was defined as the range of $0.2{\times}10^0$ to $6.0{\times}10^1$ photo multiplier tube (PMT) 2 fluorescence (X-axis) and $2.0{\times}10^0$ to $2.0{\times}10^2$ PMT 4 fluorescence (Y-axis), and the gate for live bacteria was defined as the range of $6.0{\times}10^0$ to $6.0{\times}10^2$ PMT 2 fluorescence (X-axis) and $2.0{\times}10^0$ to $4.0{\times}10^2$ PMT 4 fluorescence (Y-axis). In the comparison of the number of the tested bacteria detected by FCM (viability assessment) and plate culture (cultivability assessment), the number of bacteria detected by FCM well represented the number of bacteria that was detected by the colony forming unit (CFU) counting method when bacteria were exposed to isopropyl alcohol and silver/copper cations. Consequently, it is concluded that the application of FCM to monitor the functional effect of disinfectants on the physiological status of target bacteria can offer more rapid and reliable data than the plate culture colony counting method.
참돔 이리도바이러스(RSIV)는 이리도바이러스과에 속하며, 많은 아시아 국가에서 감염성 어류 질병을 유발하여 양식산업에 커다란 경제적 손실을 입히는 바이러스이다. 우리는 최근에 효모표면발현(yeast surface display, YSD)를 사용하여 다양한 해양바이러스를 동정하고 검출할 수 있는 새로운 실험시스템을 개발하였다. 이 연구에서 우리는 참돔 이리도 바이러스(RSIV)의 외피단백질을 효모표면 발현 기법을 이용하여 발현시켰다. 바이러스 외피단백질 유전자는 염기서열 데이터베이스에 기초하여 합성되었고, 효모발현벡터인 pCTCON2으로 서브클로닝되었다. 이 벡터는 효모 strain EBY100으로 형질전환 되었다. Flow cytometry와 Western blot analysis를 통해 RSIV 외피단백질의 발현을 확인하였다. ${\beta}$-mercaptoethanol 처리에 의해 발현된 바이러스 외피단백질을 효모 표면로부터 분리하였다. 이 연구의 결과는 YSD 시스템이 해양바이러스 외피단백질을 획득하기 위한 매우 좋은 발현시스템이라는 것을 보여준다.
Predictive tests for the identification of contact sensitizing chemicals have been developed. We measured the sensitization potential with three predictive tests, the in vitro and the in vivo Local Lymph Node Assay(LLNA), ELISA to detect interferon-gamma(IFN-${\gamma}$) from supernatant and flow cytometry to detect change of cell surface proteins, using draining lymph nodes of mice. BALB/c mice were exposed to various chemicals or vehicles on the ears daily for 3 consecutive days in all experiments. With some exceptions of propyl paraben, neomycin sulfate, the in vivo LLNA was able to detect the sensitizing capacity of test chemicals and was more sensitive than the in vitro LLNA for chemicals used in the present study. In another experiment, contact sensitivity was assessed by the ELISA to detect IFN-Υ from the supernatants of the cultured LNCs after sensitization with chemicals. There was a good correlation between the LLNA and the IFN-Υ production for test chemicals. We also examined the change of cell surface proteins on LNCs after sensitization by flow cytometry for some cell adhesion molecules(ICAM-1, E-cadherine, B7 molecule), T cell markers(CD3, CD4, CD8, T$\alpha$$\beta$,T${\gamma}$$\delta$) and B cell markers(LR1, CD45R, I-Ad). The number of ICAM-1 positive cells and B cells in LNCs were increased after sensitization with DNCB, TNCB, isoeugenol and 25%, 50% cinnamic aldehyde compared with that of vehicle as a control. In conclusion, the in vivo LLNA could provide more sensitive screening test for moderate to strong sensitizers and some weak sensitizers including cosmetic raw materials than the in vitro LLNA. The production of IFN-Υ by allergen-activated LNCs might be a values indicators without radioisotopes for the identification of contact allergens. Detection of allergens by testing the increase of ICAM-1 positive cells and B cells in LNCs by flow cytometry might be used as a test method to detect allergens.
The radiation-induced apoptosis was studied for two human cancer cell lines (KB cells, RPMI 2650 cells) and the human gingival fibroblast cell line (HGF-1 cells). The single irradiation of 2, 10, 20Gy was done with 241.5 cGylmin dose rate using the /sup 137/Cs MK cell irradiator. The cells were stained with propidium iodide and examined under the fluoro-microscope and assayed with the flow cytometry a day after irradiation. Also, the LDH assay was done to determine the amount of necrotic cells. The obtained results were as follows: 1. On the fluoro-microscope, many fragmented nuclei were detected in the KB, RPMI 2650, and HGF-1 cells after irradiation. 2. On the DNA content histogram obtained from the flow cytometry, the percentages of the pre-Gl peak of the control and 2, 10 and 20Gy irradiation group were 4.5, 55.0, 52.3, and 66.6% on KB cells, 2.7, 3.3, 31.8, and 32.6% on RPMI 2650 cells and 2.8, 21.8, 30.4, and 40.2% on HGF-1 cells respectively. 3. The number of Gl-stage cells was abruptly decreased after 2Gy irradiation on KB cells and 10Gy irradiation on RPMI 2650 cells, But there was a slight decrease without regard to irradiation dose on HGF-1 cells. 4. There was no significantly different absorbance in extracellular LDH assay along the experimental cell lines.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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