An appropriate amount of nitrogen fertilizer input during rice cultivation is essential for rice growth, quality control, and reduction of greenhouse gases in paddy fields. Therefore, it is necessary to develop a technology that can check whether an appropriate amount of fertilizer is applied in paddy fields. In this study, we tried to derive a method for diagnosing nitrogen fertilization level using spectroscopic diagnosis, physiological analysis, and molecular indicator genes. Nitrogen fertilization treatment was performed in a greenhouse by dividing into five treatment conditions: no fertilization (N0), low fertilization (N0.5), standard fertilization (N1.0), excessive fertilization (N1.5), and double fertilization (N2.0), respectively. Growth characteristics analysis was investigated by nitrogen fertilization conditions and growth stages, and the height of the canopy was analyzed using a laser scanner. Physiological and spectroscopic analyses were performed by analyzing chlorophyll and sugar contents and measuring SPAD and leaf spectrometer on rice leaves. In addition, real-time PCR experiment was performed to check the relative expression levels of several known nitrogen metabolism related genes. These results suggest that spectroscopic techniques can be helpful in diagnosing the level of nitrogen fertilization in rice paddy fields.
Objective: The impact of early mechanical removal of cumulus cells on fertilization and embryonic development is not yet precisely known. This study aimed to investigate the effects of early and late cumulus cell removal on fertilization, polyspermy, embryonic development potential, blastocyst development, and clinical outcomes. Methods: A prospective study was conducted of patients who underwent in vitro fertilization between September 2019 and October 2020. Sibling oocytes were randomly allocated after insemination to early cumulus cell removal at 6 hours (group I) and late cumulus cell removal at 16-18 hours (group II). If total fertilization failure (TFF) was determined to have occurred at early cumulus cell removal, rescue intracytoplasmic sperm injection (ICSI) was performed. Fertilization, embryonic development, and pregnancy outcomes were compared. Results: A total of 912 oocytes were assigned to group I (458 oocytes) and group II (454 oocytes). Fertilization, polyspermy, embryo quality, and pregnancy outcomes were not significantly different between both groups. Rescue ICSI enabled fertilization of 79.2% of the TFF oocytes. Conclusion: Early cumulus cell removal at 6 hours had no significant difference in fertilization, polyspermy, embryo development, or obstetric and perinatal outcomes compared to late removal. Early cumulus cell removal combined with early rescue ICSI may have the potential to help couples with TFF.
Kim, Bo-Hyun;Kim, Chang-Hong;Jung, Kyu-Young;Jeon, Byung-Hun;Ju, Eun-Jin;Choo, Young-Kug
Archives of Pharmacal Research
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제27권1호
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pp.86-93
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2004
Nitric oxide (NO) has emerged as an important intracellular and intercellular messenger, controlling many physiological processes and participating in the fertilization process via the autocrine and paracrine mechanisms. This study investigated whether nitric oxide synthase (NOS) inhibitior (L-NAME) and L-arginine could regulate in vitro fertilization and early embryonic development in mice. Mouse epididymal spermatozoa, oocytes, and embryos were incubated in mediums of variable conditions with and without L-NAME or L-arginine (0.5, 1, 5 and 10mM). Fertilization rate and early embryonic development were significantly inhibited by treating sperms or oocytes with L-NAME (93.8% vs 66.3%,92.1% vs 60.3%), but not with L-arginine. In contrast, fertilization rate and early embryonic development were conspicuously reduced when L-NAME or L-arginine was added to the culture media for embryos. Early embryonic development was inhibited by microinjection of L-NAME into the fertilized embryosin a dose-dependent manner, but only by high concentrations of L-arginine. These results suggest that a moderate amount of NO production is essential for fertilization and early embryo development in mice.
Effects of salinity and standard toxic metals on fertilization and embryo development rates were investigated in the sea urchin, Hemicentrotus pulcherrimus. Spawning was induced by injecting $1{\sim}2$ mL of 0.5 M KCl into the coelomic cavity. Males released white or cream-colored sperms and females released yellow or orange-colored eggs. The fertilization rate was below 30% when salinity was 20 psu and lower, but was almost above 90% when salinity was 25 psu and higher. The embryo development rate was below 60% when salinity was 25 psu and lower, but was above 80% when salinity was between 30 and 35 psu. The fertilization and embryo development rates in the control condition(not including Cu and Cd) were greater than 90%, but decreased a high negative correlation with the increasing of Cu(r=-0.80, r=-0.78) and Cd(r=-0.90, r=-0.82) concentrations, respectively. The fertilization and embryo development rates were significantly inhibited in the addition of Cu($EC_{50}$=17.30 ppb, $EC_{50}$=10.32 ppb) and Cd($EC_{50}$=364.57 ppb, $EC_{50}$=244.04 ppb), respectively. These results suggest that salinity concentrations for successful fertilization and normal embryogenesis of H. pulcherrimus are above 25 psu and 30 psu, respectively, and the biological assays of fertilization and embryo development rates using H. pulcherrimus are useful methods for the ecological toxicity test of marine pollution elements.
Toxicity of ocean dumping wastes(dye waste, urban sewage, food waste) were examined by observing fertilization and embryo development rates of the Sea Urchin, Strongylocentrotus nudus. Spawning was induced by injecting 1 mL of 0.5 M KCl into coelomic cavity. Males released white or cream-colored sperms and females released yellow or orange-colored eggs. Experiments were began within 30 min after the collection of both gametes. The fertilization and embryo development rates tests were performed for 10 min and 48 h after fertilization, respectively. The fertilization and embryo development rates in the control condition(not including ocean dumping wastes sludge elutriate) were greater than 90%, but markedly decreased with increasing concentrations of ocean dumping waste sludge elutriate. The fertilization and normal embryogenesis rates were significantly inhibited in all waste sludge elutriate from dye waste($EC_{50}$=5.76; $EC_{50}$=4.53), urban sewage($EC_{50}$=9.82; $EC_{50}$=9.67) and food waste($EC_{50}$=3.90; $EC_{50}$=3.27), respectively. The NOEC(>3.13%) and LOEC(3.13%) of fertiliztion and normal embryogenesis rates very similar in all waste sludge elutriate. These results suggest biological assay using the fertilization and embryo development rates of S. nudus are very useful test method for the ecological toxicity assessment of ocean dumping wastes.
In vitro embryo production (IVP) is affected by various factors during in vitro maturation, fertilization, and development. In this experiment, the effect of ovary type, quality of follicular oocyte, medium used for fertilization, presence of hormone in medium, sperm concentration on in vitro maturation and fertilization were examined for effective IVP. In vitro maturation was carried out using TCM-199 supplemented with 15% FCS and hormones in 5% $CO_2$ incubator for 24h. In vitro fertilization was performed with frozen-thawed sperm in modified mTALP medium containing 0.3% BSA, $10{\mu}g/ml$ heparin, and 5mM/ml caffeine for 24h. The fertilized embryos were co-cultured on monolayer of cumulus cells in TCM-199. When oocytes were collected from functionally active and inactive ovaries, maturation rate was 76.9 and 7.7%, respectively. When oocytes were classified morphologically to good and poor grades, maturation rate was 75 and 58.8%, respectively. FSH + LH + $E_2$ (86.4%) showed higher maturation rate than control (53.0%) and FSH (73%). The fertilization rate was 28.2, 100 and 91.7% in $1.6{\times}10^5$, $5.0{\times}10^5$ and $10.0{\times}10^5$ sperm concentration per ml. When oocytes were fertilized in mTALP and BO media, fertilization and cleavage rates of oocytes in mTALP were higher (84.3 and 56.9%) than those (67.4 and 23.3%) in BO medium. In this experiment, in vitro maturation, fertilization and development of oocytes were affected by type of ovary, grade of oocyte, hormones, sperm concentration and fertilization medium.
To obtain the basic information on culture conditions for the larvae of Saxidomus purpuratus, experiments were conducted on the population from southern coast for (1) the success in fertilization and development from artificial fertilization among different months of a year, (2) the viability of sperms after exposure to seawater, (3) and the effects of temperature, salinity, and food organism on the survival and growth of larvae. Gametes obtained from dissection showed high rate of fertilization at all months. But the rate of development was higher only May-July. Developmental success seemed to be related with the quality of eggs at the time of fertilization. Developmental times for 2-cell, 4-cell, 8-cell, blastula, trochophore larva, and veliger larva at 20$^{\circ}C$ were 1.5, 2, 4, 18, 24, and 32 hr, respectively. Sperms could survive for more than 8 hr, however, actively swimming sperms could be found within 1 hr after exposure to seawater. It is recommended that sperms should be used for fertilization as soon as possible when they are exposed to seawater. At temperature of 35$^{\circ}C$, all the larvae died during 48 hr. Larval survival decreased when salinity was either lower than 20 psu or higher than 40 psu, and was 0% when salinity was 10 psu. Optimal range of temperature and salinity for rearing larvae of S. purpuratus were 20-25$^{\circ}C$ and 20-40 psu, respectively. Larvae grew from 111.5 to 235.3 ${\mu}$m during 21 days. Larvae fed mixed diets grew faster than unialgal diets. The fastest growth was observed when larvae were fed on the mixture of Isochrysis galbana and Nannochloris oculata.
Effects of salinity and standard toxic metals on fertilization and embryo development rates were investigated in the sea urchin, Strongylocentrotus nudus. Spawning was induced by injecting 1ml of 0.5 M KCl into the coelomic cavity. The fertilization and embryo development rates were below 20% when salinity was 25 psu or lower, but were above 90% when salinity was between 30 and 35 psu. The fertilization and embryo development rates in the control condition (not including Cu and Cd) were greater than 90%, but decreased with a high negative correlation (r) of 0.89 and 0.91 with the increasing of Cu and Cd concentrations, respectively. These results suggest that salinity concentrations for successful fertilization and normal embryogenesis of S. nudus are between 30 and 35 psu, and the biological assays of fertilization and embryo development rates using S. nudus are useful methods for the ecological toxicity test of marine pollution elements.
Purine metabolism is known factor for nuclear maturation of oocytes through both follicle cells and oocyte itself. However, it is largely unknown the roles of purine metabolism in the oocyte competence for fertilization and early development. In this study, the effects of adenosine in oocyte competence for development were examined using adenosine and its synthetic inhibitors. Adenosine treatment from GV intact stage for 18 hr (fGV) caused of decrease the fertilization rate but of increase the cleavage rate compared from the other stage treatment groups. Hadacidin did not effect on fertilization rate but increased cleavage rate without stage specificity. Adenosine did not block the effects of hadacidin with the exception of fGV group. Inhibition of purine synthetic pathways the fertilization rate was decreased in the fGV and fGVB groups but increased in the fMII group. Exogenous adenosine caused of decrease fertilization rate in the fGVB group but increase in the fMII group. Cleavage rate was dramatically increased in the adenosine treatment with synthetic inhibitors. It means that the metabolism of purine has stage specific effects on fertilization and cleavage. Exogenous adenosine had only can improve oocyte developmental competence when it treated at GV intact stage. On the other hand, endogenous synthesis in all maturation stage cause of increase the cleavage rate without effects on fertilization. These data suggest that adenosine at GV stage as a paracrine fashion and inhibitions of endogenous adenosine in all stage improve oocyte developmental competence.
Toxicity assessment of ocean dumping wastes (dye waste, urban sewage, food waste) were examined in the fertilization and embryo development rates of the Sea Urchin, Hemicentrotus pulcherrimus. Spawning was induced by injecting 1 mL of 0.5 M KCl into coelomic cavity. Males released white or cream-colored sperms and females released yellow or orange-colored eggs. Experiments were began within 30 min the collection of both gametes. The fertilization and embryo development rates test were performed for 10 min and 64 h after fertilization, respectively. The fertilization and embryo development rates in the control condition (not including ocean dumping wastes sludge elutriate) were greater than 90%, but suddenly decreased with increasing of ocean dumping waste sludge elutriate concentrations. The fertilization and normal embryogenesis rates were significantly inhibited in all waste sludge elutriate from dye waste ($EC_{50}$=4.37; $EC_{50}$=1.76), urban sewage ($EC_{50}$=5.79; $EC_{50}$=2.00) and food waste ($EC_{50}$=7.68; $EC_{50}$=2.16), respectively. The NOEC (<3.13) and LOEC (3.13) of fertiliztion and normal embryogenesis rates very similar in all waste sludge elutriate. These results suggest that biological assay using the fertilization and embryo development rates of H. pulcherrimus are very useful test method for the ecological toxicity assessment of ocean dumping wastes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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