Two forms of extracellular inulinase, designated as PI and PII were detected in the crude enzyme preparation from n species of Pseudomonas isolated from soil. PI and PII were purified to homogeneity by ammonium sulfate fractionation, DEAE Sephadex A-50 chromatography, Sephadex G-100 and Sephadex G-200 gel filteration. Both isoenzymes catalyzed specifically and endowise the cleavage of the $\beta$-2,1-fructofranoside linkage of inulin, and displayed no action upon sucrose, raffinose and levan. The optimal pH values for the PI and PII enzyme were pH 5.5 and 6.0, respectively and the highest activity of the two enzymes was observed at 55$^{\circ}C$. The Km values of PI and PII were calculated to be 2$\times$10$^{-3}$M and 5$\times$10$^{-3}$M, respectively.
Termites play an important role in the degradation of dead plant materials and have acquired endogenous and symbiotic cellulose digestion capabilities. The feruloyl esterase enzyme (FAE) gene amplified from the metagenomic DNA of Coptotermes formosanus gut was cloned in the TA cloning vector and subcloned into a pET32a expression vector. The Ft3-7 gene has 84% sequence identity with Clostridium saccharolyticum and shows amino acid sequence identity with predicted xylanase/chitin deacetylase and endo-1,4-beta-xylanase. The sequence analysis reveals that probably Ft3-7 could be a new gene and that its molecular mass was 18.5 kDa. The activity of the recombinant enzyme (Ft3-7) produced in Escherichia coli (E.coli) was 21.4 U with substrate ethyl ferulate and its specific activity was 24.6 U/mg protein. The optimum pH and temperature for enzyme activity were 7.0 and $37^{\circ}C$, respectively. The substrate utilization preferences and sequence similarity of the Ft3-7 place it in the type-D sub-class of FAE.
The purpose of this study is to investigate the effect of constant direct current electrical stimulation in healing the bone defects and surrounding tissues of the endo-oseous(TPS-IMZ) implants. Implants were inserted in the femur of adult dogs. Then a constrant direct current of approximately $10{\mu}A$ was applied. Artificial bone defects were prepared on one side of the implant site. Experimental groups were divided into 4 : control group : bone defect without treatment group I : bone defect filled with hydroxyapatite powders group II : bone defect, in which a negative and positive electrodes were inserted 5mm apart from both sides of the implant group III : bone defect, in which negative current was directly connected to the IMZ implant and a positive electrode was placed 10mm apart from the implant The animals were sacrificed in the 1st, 2nd, 4th and 8th week after implantation for the light microscopic examination. The results obtained were as follows : 1. In electrically stimulated experimental groups, new bone formation and osseointegration around implants were accelerated. 2. Group III showed the greatest activity in new bone formation. Osteoconductivity around HA particles was observed in group 1. 3. The defect area of the control group was healed by forming new bone, which grew from the underlying cancellous bone. The defect areas of the electrically stimulated experimental groups were healed by newly formed bone, which grew upward from the cancellous bone and downward from the periosteum. 4. 8 weeks after implantation, all the groups showed good osseointegration between the surrounding bone and implants.
Kim, Kyoung-A;Chon, Seong-Min;Kwon, Su-Mi;Lee, Kwang-Won;Yu, Mi-Kyung
Journal of Dental Rehabilitation and Applied Science
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v.23
no.4
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pp.293-302
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2007
I. Objectives The purpose of this study was to compare the shaping ability between the single length technique performed with Mtwo instruments (VDW, Munich, Germany) and the crown-down technique using K3 (SybronEndo, West Collins, CA, USA) and RaCe (FKG, La Chaux-de-Fonds, Switzerland) instruments. II. Materials & Methods Forty five curved canals in resin blocks were equally divided in to three groups. Group 1 (Mtwo) was instrumented used the full length of canal according to the manufacturer's instructions. The simulated canals was prepared to an instrument size of 35, 0.04 taper canal terminus. In group 2 (Race) and group 3 (K3) was instrumented in a crown-down manner and prepared to an instrument size of 30, 0.06 taper canal terminus. Pre- and post-instrumentation images were scanned and assessment of canal shape was completed with a computer image analysis program. Material removal was measured at 7 measuring points, beginning 1mm from the end point of preparation. Differenced of centering ratio were statistically analyzed using One-way ANOVA followed by Duncan's test. II. Results & Conclusion There was no significant difference on 1, 2, 3 and 7mm measuring point. At 4 and 5 measuring point, significant difference showed between the Mtow instruments and other two instruments. (p<0.05)
Kim, Do-Man;Kim, Young-Min;Park, Mi-Ran;Ryu, Hwa-Ja;Park, Don-Hee;Robyt, John F.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.9
no.5
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pp.529-533
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1999
In addition to catalyzing the synthesis of dextran from sucrose as a primary reaction, dextransucrase also catalyzes the transfer of glucose from sucrose to other carbohydrates that are present or are added to the reaction digest. We have synthesized new glucans having new structures and new characteristics, by transferring D-glucose of sucrose to $\alpha$-cellulose and by using the constitutive dextransucrase obtained from Leuconostoc mesenteroides B-742CBM. The final reaction products were composed of soluble- and insoluble-glucans. The yields of soluble- and insoluble-glucans were theoretically 21% $\pm$ 2.2 and 68% $\pm$ 5.1, respectively. The remainder of the reaction products was recovered as a mixture of olgiosaccharides that could not be precipitated by 67%(v/v) ethanol. Treating the modified glucans with endo-dextranase and/or cellulase, oligosaccharides were produced that were not formed from the hydrolysis of native cellulose or B-742CBM dextran. The modification of the cellulose was confirmed by methylation and acid hydrolysis of the soluble-and insoluble-glucan. Both (1->4) and(1->6) glycosidic linkages were found in both of the glucans.
Elizabethkingia miricola BM10, a symbiotic bacterium, has been isolated from the hindgut of Reticulitermes speratus KMT001, a termite which occurs on Bukhan Mountain in Seoul, Korea. This strain demonstrated a symbiotic characteristic, in that it lacked endo-${\beta}$-1,4-glucanase activity, in a previous study. The major fatty acids of E. miricola BM10 were iso-$C_{15:0}$, iso-$C_{17:0}$ 3-OH, and summed feature 3 (iso-$C_{16:1}{\omega}7c/C_{16:1}{\omega}6c$). The content of iso-$C_{17:0}$ 3-OH was higher, while those of ECL 13.566, iso-$C_{17:11}{\omega}9c$, and summed feature 4 were lower than the other three type-strains of the Elizabethkingia genus. The 16S rRNA phylogenetic analysis confirmed that E. miricola BM10 is a new species. The whole genome of E. miricola BM10 was sequenced. The average nucleotide identity of strain BM10 as evaluated by pairwise comparison with E. anophelis R26, E. meningoseptica ATCC 13253, and E. miricola GTC 862 was shown to be 91.5%, 81.2%, and 94.29%, respectively. Based on our study results, E. miricola BM10 appears to represent a new strain of the genus Elizabethkingia.
Biodegradation is the key process involved in natural lignocellulose biotransformation and utilization. Microbial consortia represent promising candidates for applications in lignocellulose conversion strategies for biofuel production; however, cooperation among the enzymes and the labor division of microbes in the microbial consortia remains unclear. In this study, metagenomic analysis was performed to reveal the community structure and extremozyme systems of a lignocellulolytic microbial consortium, TMC7. The taxonomic affiliation of TMC7 metagenome included members of the genera Ruminiclostridium (42.85%), Thermoanaerobacterium (18.41%), Geobacillus (10.44%), unclassified_f__Bacillaceae (7.48%), Aeribacillus (2.65%), Symbiobacterium (2.47%), Desulfotomaculum (2.33%), Caldibacillus (1.56%), Clostridium (1.26%), and others (10.55%). The carbohydrate-active enzyme annotation revealed that TMC7 encoded a broad array of enzymes responsible for cellulose and hemicellulose degradation. Ten glycoside hydrolases (GHs) endoglucanase, 4 GHs exoglucanase, and 6 GHs β-glucosidase were identified for cellulose degradation; 6 GHs endo-β-1,4-xylanase, 9 GHs β-xylosidase, and 3 GHs β-mannanase were identified for degradation of the hemicellulose main chain; 6 GHs arabinofuranosidase, 2 GHs α-mannosidase, 11 GHs galactosidase, 3 GHs α-rhamnosidase, and 4 GHs α-fucosidase were identified as xylan debranching enzymes. Furthermore, by introducing a factor named as the contribution coefficient, we found that Ruminiclostridium and Thermoanaerobacterium may be the dominant contributors, whereas Symbiobacterium and Desulfotomaculum may serve as "sugar cheaters" in lignocellulose degradation by TMC7. Our findings provide mechanistic profiles of an array of enzymes that degrade complex lignocellulosic biomass in the microbial consortium TMC7 and provide a promising approach for studying the potential contribution of microbes in microbial consortia.
The approximate rates, stoichiometries and products of the reaction of potassium triethylborohydride $(KEt_3BH)$ with selected organic compounds containing representative functional groups under the standard condition $(0^{\circ}C,$ THF) were examined in order to explore the reducing characteristics of this reagent as a selective reducing agent. Primary alcohols, phenols and thiols evolve hydrogen rapidly whereas secondary and tertiary alcohols evolve very slowly. n-Hexylamine is inert to this reagent. Aldehydes and ketones are reduced rapidly and quantitatively to the corresponding alcohols. Reduction of noncamphor gives 3% exo- and 97% endo-norboneol. Anthraquinone is cleanly reduced to 9,10-dihydro-9,10-dihydroxyanthracene stage. Carboxylic acids liberate hydrogen rapidly and quantitatively but further reduction does not occur. Anhydrides utilize 2 equiv of hydride to give an equimolar mixture of acid and alcohol. Acid chlorides, esters and lactones are rapidly and quantitatively reduced to the corresponding alcohols. Epoxides are reduced at moderate rates with Markovnikov ring opening to give the more substituted alcohols. Primary amides liberate 1 equiv of hydrogen rapidly. Further reduction of caproamide is slow whereas benzamide is not reduced. Tertiary amides are reduced slowly. Benzonitrile utilizes 2 equiv of hydride in 3 h to go to the amine stage whereas capronitrile takes only 1 equiv. The reaction of nitro compounds undergo rapidly whereas azobenzene and azoxybenzene are reduced slowly. Cyclohexanone oxime rapidly evolves hydrogen without reduction. Phenyl isocyanate utilizes 1 equiv of hydride to proceed to formanilide stage. Pyridine N-oxide and pyridine is reduced rapidly. Disulfides are rapidly reduced to the thiol stage whereas sulfoxide, sulfonic acid are practically inert to this reagent. Sulfones and cyclohexyl tosylate are slowly reduced. Octyl bromide is reduced rapidly but octyl chloride and cyclohexyl bromide are reduced slowly.
Ricardo Machado;Daniel Comparin;Sergio Aparecido Ignacio;Ulisses Xavier da Silva Neto
Restorative Dentistry and Endodontics
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v.46
no.3
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pp.31.1-31.13
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2021
Objectives: To evaluate postoperative pain after endodontic treatment of necrotic teeth using large intentional foraminal enlargement (LIFE). Materials and Methods: The sample included 60 asymptomatic necrotic teeth (with or without chronic apical periodontitis), and a periodontal probing depth of 3 mm, previously accessed and referred to perform endodontic treatment. After previous procedures, the position and approximate size of the apical foramen (AF) were determined by using an apex locator and K flexo-files, respectively. The chemomechanical preparation was performed with Profile 04 files 2 mm beyond the AF to achieve the LIFE, using 2.5 mL of 2.5% NaOCl at each file change. The filling was performed by Tagger's hybrid technique and EndoFill sealer. Phone calls were made to all the patients at 24, 48 and 72 hours after treatment, to classify postoperative pain. Statistical analysis was performed by different tests with a significance level of 5%. Results: Age, gender, periradicular status and tooth type did not influence postoperative pain (p > 0.05). Only 1 patient (1.66%) reported severe pain after 72 hours. Moderate pain was reported by 7, 4 and 3 patients after 24, 48 and 72 hours, respectively (p = 0.0001). However, paired analyses showed a statistically significant difference only between 24 and 72 hours (p = 0.04). Sealer extrusion did not influence the postoperative pain (p > 0.05). Conclusions: Acute or moderate postoperative pain was uncommon after endodontic treatment of necrotic teeth with LIFE.
Kim, Yoon-Hee;Cho, Moon-Jung;Shin, Keum;Kim, Tae-Jong;Kim, Nam-Hun;Kim, Yeong-Suk
Journal of the Korean Wood Science and Technology
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v.38
no.3
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pp.262-273
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2010
In the enzymatic hydrolysis of rice straw and wood meals using extra-cellular enzymes from Fomitopsis palustris, key factors which enhanced the sugar conversion yield were investigated in this work, such as enzyme production and enzyme reaction conditions, surfactant effects, and the surface structure of substrates. F. palustris cultured with softwood mixture produced 12.0 U/$m{\ell}$ for endo-${\beta}$-1,4-gulcanase (EG), 116.68 U/$m{\ell}$ for ${\beta}$-glucosidase (BGL), 18.82 U/$m{\ell}$ for cellobiohydrolase (CBH), and 13.33 U/$m{\ell}$ for ${\beta}$-xylosidase (BXL). These levels of BGL, CBH, and BXL activities were two to four folds more than enzyme activities of F. palustris cultured with rice straw. The optimum reaction conditions of cellulase-RS which produced by F. palustris with rice straw and cellulase-SW which produced by F. palustris with softwood mixture were pH 5.0 at $45^{\circ}C$ and pH 5.0 at $50^{\circ}C$, respectively. The sugar conversion yield of cellulase-SW had the highest value of $40.6{\pm}0.6%$ within 72 h when rice straw was used as substrate. By adding 0.1% Tween 20 (w/w-substrate), the sugar conversion yield of rice straw was increased to 44%, which was about four fifths sugar conversion yield of commercial enzyme, Celluclast 1.5L (Novozyme A/S). A low crystallinity and an intensive fibril surface observed by the scanning electron microscope may explain the high sugar conversion yield of rice straw.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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