Methyl methacrlate와 cyclopentadiene을 반응하여 Methyl 5-methylbicyclo(2.2.1)hept-2-ene-5-carboxylate(MMBHC)를 합성코자 하였다. 합성된 MMBHC의 온도, solvent 변화와 촉매($AlCl_3$)의 사용 유무에 따른 endo, exe의 비율을 관찰하였다. 온도가 낮은 경우 온도가 높은 쪽 보다 endo 비율이 높았고 촉매($AlCl_3$)를 사용하였을 때(약 endo : exo = 63 : 37) 촉매를 사용하지 않은 반응(endo : exe = 34 : 66)보다 endo의 비율이 높았다. methyl acrylate를 사용한 경우 같은 조건에서 endo : exe의 비율이 93.5 : 6.5로 MMA를 사용한 경우보다 endo의 비율은 좋았다. 온도가 높은 경우 수율은 좋았지만 exe의 비율이 높았고 solvent에 따라 endo, exe의 선택도는 큰 차이를 보이지 않음을 알 수 있었다.
사과푸른곰팡이병균 Penicillium expansum의 benomyl 저항성균주(抵抗性菌株) 중(中) 병원성이 약화된 균주를 선발하여 pectin질(質) 분해효소(分解酵素)의 활성과 병원성(病原性)간의 관계를 알아보았다. 인공배지에서는 병원성이 높은 $S_2$균주와 병원성이 낮은 $R_2$균주가 endo-polymethylgalacturonase, endo-polygalacturonase, pectin methyl-trans-eliminase, polygalacturonate-trans-eliminase를 생산하였으며 두균주간의 효소활성에 있어서 현저한 차이는 없었다. 사과배지에서는 위의 4개의 효소가 모두 생산되었으나 endo-polymethylgalacturonsae, endo-polygalacturonase의 활성은 병원성이 높은 $S_1$균주가 병원성이 낮은 $R_2$균주보다 6배 이상 높은 활성을 보였으나 pectin methyl-trans-eliminase와 polygalacturonate-trans-eliminase의 활성은 큰 차이가 없었다. Ammonium sulfate로 염석시켜 얻어진 조효소액(粗酵素液) 중(中) $80{\sim}90%$ fraction에서 endo-PMG와 endo-PG의 활성이 가장 높았으며 이 조효소액(粗酵素液)의 첨가(添加)에 따른 저항성균주(抵抗性菌株)의 병원성이 대조구에 비하여 증가하였다.
이 실험의 목적은 근관 내에 충전된 수산화칼슘의 제거 시 치근단 1/3에서 기존의 근관세정법과 $EndoActivator^{(R)}$, $EndoVac^{(R)}$ system의 세정 효율을 비교하고, 근관 세정 중 치근단공 개방 확인의 영향에 대해 평가하고자 함이다. 60개의 단근치를 사용하였고 ISO #35까지 근관성형 후 수산화칼슘을 충전하였다. 근관 세정법과 치근단공 개방 확인 유무에 따라 6개 실험군으로 나누어 세정하였다. 실험 치아를 양분하여 치근단 3 mm에서 근관 면적에 대한 잔존 수산화칼슘 면적의 백분율을 측정하였다. 실험결과 $EndoActivator^{(R)}$, $EndoVac^{(R)}$군이 기존의 근관 세정법 군에 비해 유의하게 높은 제거효율을 나타냈으며 (p<0.05), 치근단공 개방 확인 유무에 따른 유의한 차이는 나타나지 않았다. 이 실험 결과에 따르면 기존의 근관세정법으로 효과적인 세정이 불가능했던 근관의 치근단 1/3부위에서 $EndoActivator^{(R)}$, $EndoVac^{(R)}$ system과 같은 근관 세정법이 효과적인 대안이 될 수 있다는 결론을 얻었다.
Ganoderma lucidum이 생산하는 polygalacturonase의 유용활용 방안을 위한 효소의 특성을 연구하기 위하여 버섯배양물로부터 효소를 생산하고 정제하여 그 특성을 검토한 결과는 다음과 같다. Endo-polygalacturonase는 배양여액으로부터 ammonium sulfate 침전, Biogel P-100, DEAE-cellulose, Sehpadex G-150 column chromatography에 의하여 순차적으로 정제되었고, Sehpadex G-150 column chromatography에서 re-gel filtration까지 실시한 결과 specific activity가 892unit/mg protein로 배양여액보다도 약 56배의 정제도를 나타냈으며, exo-polygalacturonase는 ammonium sulfate침전, Biogel P-100, DEAE-cellulose column chromatography까지 부분정제한 결과 9.2배의 정제도를 나타냈다. SDS polyacrylamide gel에서 전기영동을 실시한 결과 단일 band를 나타냈으며, 분자량은 54,000 dalton이었다. Endo-polygalacturonase와 exo-polygalacturonase는 citrus pectin이나 pectic acid보다 apple pectin에 친화도가 높았으며, Lineweaver-Burk plot로부터 계산된 apple pectin에 대한 Km 치는 각각 1.44와 10.6 mg/ml이었다. 이 두 효소의 작용 최적 pH는 4.0이었으나 pH 안정성에서는 endo-polygalacturonase는 $pH\;4.0{\sim}6.0$에서, exo-polygalacturonase는 $pH\;3.5{\sim}5.5$ 범위에서 안정하였다. 효소반응 최적 온도는 endo-polygalacturonase는 $40^{\circ}C$ 이었으나 exo-polygalacturonase는 $60^{\circ}C$에서 최대의 활성을 나타냈고 열안정성도 exo-polygalacturonase가 endo-polygalacturonase보다 더 높은 온도에서도 안정하였다. 또한 endo-polygalacturonase는 $Ca^{++}$ 과 $Mn^{++}\;ion$에, exo-polygalacturonase에는 $Ca^{++}\;ion$에 의해 효소반응이 촉진되었다.
이 실험의 목적은 $EndoVac^{(R)}$과 $EndoActivator^{(R)}$를 이용한 근관세척시 근관 내 접종된 Enterococcus faecalis의 제거 효율을 기존의 irrigation needle을 이용한 방법과 비교 평가하고자 함이다. 발거된 70개의 단근치를 사용하였으며 .04 taper ProFile #40까지 근관형성 후 치아를 멸균하고 근관에 E. faecalis를 접종하고 배양하였다. 치아는 근관세척 방법에 따라 20개씩 3개의 실험군과 2개의 대조군으로 나누었다. 2.5% 치아염소산나트륨을 사용하여 근관세척 시행 후 일차 표본을 채취하였고, 다시 근관 내에 배양액을 채우고 24시간 동안 배양 후 이차 표본을 채취하였다. 표본은 colony forming units (CFU) 값을 얻기 위해 BHI agar plate에 배양하였다. 일차 표본 결과에서는 모든 실험치아 중 기존의 근관세척 방법을 이용한 하나의 근관에서 양성 배양을 보였다. 이차 표본 결과에서는 $EndoVac^{(R)}$ 실험군에서 가장 적은 양성 배양을 보였으며, 기존의 근관세척 방법과 비교시 통계적으로 유의한 차이를 보였다. 실험 결과에 따르면 $EndoVac^{(R)}$은 근관 내 접종된 E. faecalis의 제거에 있어 기존의 근관세척 방법보다 더 좋은 효율을 보였다.
인삼뿌리썩음병균, Cylindrocarpon destructans(Zins.) Scholten을 접종한 인삼절편으로 부터 얻은 섬유소분해효소 및 펙틴질분해광소의 역가는 그 농도, 시간에 비례하였다. Cellulase (Cx), endo-polygalacturonase(endo-PG), endo-poiymethylgalacturonase (endo-PMG), exo-polygalacturonase (exe-PG)와 exo-polymeth-ylgalacturonase(exo-PMG)의 역가는 접종후 4 일째 최대였으며 endo-PG와 endo-PMG는 1일 및 2일째는 전혀 검출되지 않았으나 exo-PG와 exo-PMG는 검출되었다. 접종후 6 일째에는 모든 펙틴질분해효소는 활성을 완전히 잃었으나 섬유소분해효소는 높은 역가을 유지하였다. Cx, endo-PG, endo-PMG, exo-PG 및 exo-PMG의 최적 pH는 각각 6.0, 5.5, 8.0, 7.0-7.5, 8.5이였다. Cx, endo-PG, endo-PMG, 및 exo-PG의 최적온도는 각각 exo-PMG $66^{\circ}C\;53^{\circ}C\;41^{\circ}C\;37^{\circ}C\;and\;40^{\circ}C$였다. 섬유소분해효소는 공시한 16개 이온중에서 0.05M $Hg^{++}$만이 억제하였다. 펙틴질분해효소는 이온에 따라 상이하였으나 $0.05M\; Fe^{+++}$과 $0.05M\;Al^{+++}$이 가장 현저히 억제하였다. 공시한 8개 농약중에서 어느 것도 $0.1\%$ 유효성분으로는 모든 효소작용을 억제하지 못했으며 exo-PG만은 모든 농약의 의하여 상당히 억제되었다. 그 중에서 Difolatan은 모든 펙틴질분해효소를 가장 잘 억제시켰다. $0.2M\;Ca^{++}$과 $0.02M\;Fe^{+++}$은 펙틴질분해효소를 거의 억제시켰으나 섬유소분해효소는 같은 농도에서 각각 $30\%,\;70\%$에 이르렀다. Formalin은 exo-PG와 endo-PMG를 완전 억제시켰으나 다른 효소 특히 Cx는 그렇지 못했다. $0.8\%$ Difolatan은 모든 효소를 $0.8\%$이상 억제하였으나 Cx는 그 이하였다. C. destructans가 분필하는 섬유소분해효소 및 펙틴질분해효소는 인삼뿌리썩음병과 밀접한 관계를 가지고 있으며 이 병을 효과적으로 방제하기 위하여 억제되어야 하겠다.
KIM, HYUNJIN;JI-YOUNG YANG;HYEON-GYU LEE;JAEHO, CHA
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제11권4호
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pp.685-692
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2001
A gene, Egl, from Paenibacillus sp. KCTC 8848P encoding endo-${\circ}$-1,4-glucanase was cloned and expressed in Escherichia coli. It consisted of an open reading frame of 1,191 bp for a protein that consisted of 397 amino acids with a molecular weight of 44,539 Da. The deduced amino acid sequence of the endo-${\circ}$-1,4-glucanase gene had a 94% similarity to the endo-$\beta$-1,4-glucanase of Bacillus polymyxa. The Egl gene was also expressed in Saccharomyces cerevisiae secreting Endomyces fibuliger $\beta$-glucosidase (BGL1) under the control of the alcohol dehydrogenase (ADC1) gene promoter, S. cerevisiae transformant producing both endo-${\circ}$-1,4-glucanase and ${\circ}$-glucosidase grew on carboxymethyl cellulose as the sole carbon source.
Objectives: This study used micro-computed tomography (µCT) to compare voids and interfaces in single-cone obturation among AH Plus, EndoSequence BC, and prototype surface pre-reacted glass ionomer (S-PRG) sealers and to determine the percentage of sealer contact at the dentin and gutta-percha (GP) interfaces. Materials and Methods: Fifteen single-rooted human teeth were shaped using ProTaper NEXT size X5 rotary files using 2.5% NaOCl irrigation. Roots were obturated with a single-cone ProTaper NEXT GP point X5 with AH Plus, EndoSequence BC, or prototype S-PRG sealer (n = 5/group). Results: The volumes of GP, sealer, and voids were measured in the region of 0-2, 2-4, 4-6, and 6-8 mm from the apex, using image analysis of sagittal µCT scans. GP volume percentages were: AH Plus (75.5%), EndoSequence BC (87.3%), and prototype S-PRG (94.4%). Sealer volume percentages were less: AH Plus (14.3%), EndoSequence BC (6.8%), and prototype S-PRG (4.6%). Void percentages were AH Plus (10.1%), EndoSequence BC (5.9%), and prototype S-PRG (1.0%). Dentin-sealer contact ratios of AH Plus, EndoSequence BC, and prototype S-PRG groups were 82.4% ± 6.8%, 71.6% ± 25.3%, and 70.2% ± 9.4%, respectively. GP-sealer contact ratios of AH Plus, EndoSequence BC, and prototype S-PRG groups were 65.6% ± 29.1%, 80.7% ± 25.8%, and 87.0% ± 8.6%, respectively. Conclusions: Prototype S-PRG sealer created a low-void obturation, similar to EndoSequence BC sealer with similar dentin-sealer contact (> 70%) and GP-sealer contact (> 80%). Prototype S-PRG sealer presented comparable filling quality to EndoSequence BC sealer.
토양에서 분리한 endo-inulinase 생산 균주인 Xanthomonas oryzae #5로 부터 11.5kb의 endo-inulinase 유전자를 포함하는 재조합 plasmid를 함유한 형질 전환주를 분리하였다. 11.5kb의 단편으로부터 8.6kb, 4.1kb의 단편을 포함한 pDI 2, pDI4 재조합 plasmid를 제작하여 활성을 확인한 결과 endo-inuliase 활성을 나타내었으며, 재조합 plasmid pDI 2를 이용하여 DNA sequence를 한 결과 endo-inulinase 유전자는 1,333개의 아미노산으로 구성된 ORF를 가지고 있었다. 또한 B. circulans MCI-2554의 CFTase와 아미노산 배열에 있어은 약 72%의 높은 homology를 나타냈었으며, 다른 fructan hydrolases, inulinase, levanase와의 아미노산 비교로부터 ${\beta}-fructouranosidase$ motif를 포함한 6개의 유사부위를 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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