Lee, Sue Nyoung;Hong, Kyeong-Man;Seong, Yeon Sun;Kwak, Sahng-June
한국발생생물학회지:발생과생식
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제24권2호
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pp.101-111
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2020
Coiled-coil domain containing 110 (CCDC110, KM-HN-1) is a protein containing C-terminal coiled-coil domain (CCD) which was previously discovered as a member of the human cancer/testis antigen (CTA). In addition, CCDC110 has both nuclear localization signal sequence and the leucine zipper motif. Although the functional role of CCDC110 has yet to be fully identified, the mRNA expression levels of CCDC110 are known to be highly elevated in various cancer types including testis, implying its relevance to cancer pathogenesis. In this study, we first developed several monoclonal antibody (mAb) hybridoma clones targeting CCDC110 and further isolated clone by characterizing for its specificity using immunoblotting and immunoprecipitation approaches with basal parenchymal sperm cells in testis tissue. Next, using these mAbs, we showed that the Tet-inducible overexpression of CCDC110 protein delayed the entry of G2/M phase in U2-OS osteosarcoma cells. Based on these results, we propose that CCDC110 plays a crucial role in cell cycle progression.
지금까지 심방세동을 검출하는 방법은 P파의 형태, 시간 주파수 영역 분석법이 주를 이루었다. 하지만 P파는 잡음의 영향을 많이 받는 환경에서는 검출의 정확도가 떨어지며, 시간 주파수 영역 분석법은 RR 간격에 따라 변화하는 불규칙적 리듬에 관한 정보를 정확하게 얻지 못하는 단점이 있다. 본 연구에서는, P파의 형태는 고려하지 않고, 불규칙 RR 간격 리듬의 비선형적 특성 분석을 통한 심방세동 검출 알고리즘을 제안한다. 이를 위해 불규칙 RR 간격 리듬을 다양성, 무작위성, 복잡성으로 각각 정의하고 제곱평균제곱근(RMSSD), 전환점비(TPR), 표본 엔트로비(SpEn)의 3가지 비선형적 특성 분석을 통하여 심방세동을 분류하였다. 제안된 알고리즘의 검출 성능을 평가하기 위해 3가지 통계치의 최적값을 설정하고 MIT-BIH 심방세동 데이터베이스와 부정맥 데이터베이스를 이용하여 실험하였다. 성능 평가 결과, MIT-BIH 심방세동 데이터베이스에 대해서는 민감도(sensitivity:94.5%), 특이도(specificity:96.2%)를 각각 나타내었으며, 부정맥 데이터베이스에 대해서는 민감도(89.8%), 특이도(89.62%)를 각각 나타내었다.
5차 교육과정에서 2009 개정 교육과정에 이르기까지 교육의 주요 목표로 강조되고 있는 창의성 계발을 위한 교육과정과 내용, 교재, 교수 학습 방법 등을 개발하는 데에는 창의성의 개념과 구성 요인, 교육 방향에 대한 학문적 합의가 선행되어야 한다. 이에 본 연구에서는 학문 영역마다 고유의 창의성이 존재하며 다른 영역으로 전이되지 않는다는 영역특수성과 일반적인 창의적 사고 기술에 더불어 영역 특수적 기술, 환경의 촉진이나 방해 등이 창의성 발현에 모두 요구된다는 합류 이론에 기반하여 정보과학 교과에 적합한 창의성의 구성 요소를 델파이 방법으로 탐색해 보았다. 개방형 문항으로 구성된 1차 델파이 조사 결과를 내용 분석하여 항목화한 2차 델파이 조사에서는 항목의 중요도를 리커트 5점 척도로 표시하도록 하였다. 3차 델파이 조사 결과 정보과학 창의성의 인지적, 정의적, 환경적 영역에서 전체 32개의 중요 항목들이 선정되었다.
The cDNA encoding human NeuAc ${\alpha}$2,3Gal$\beta$ 1,3GalNAc GalNac ${\alpha}$2,6-Sialyltransferase (hST6GalNac IV) was isolated by screening of human fetal liver cDNA library with a DNA probe generated from the cDNA sequence of mouse ST6Gal NAc IV (mkST6GalNAc IV). The cDNA sequence included an open reading frame coding for 302 amino acids, and comparative analysis of this cDNA with mST6GalNAc IV showed that each sequence of the predicted coding region contains 88% and 85% identifies in nucleotide and amino acid levels, respecively. The primary structure of this enzyme suggested a putative domain structure, like that in other glycosyltransferases, consisting of a short N-terminal cytoplamic domain, a transmembrane domain and a large C-terminal active domain. This enzyme expressed in COS-7 cells echibited transferase activity toward NeuAc ${\alpha}$2,3Gal$\beta$ 1,3GalNAc, fetuin and GM1b, although the activity toward the later is very low, no significant activity being detected toward Gal${\beta}$ 1,3Gal NAc or asialofetuin, the other glycoprotein substrates tested. The $^{14}$ C-sialylated residue of fetuin sialylated by this enzyem with CMP-[$^{14}$C]NeuAc was sensitive to treatment with ${\alpha}$2,8-specific sialidase of Vibrio cholerae but resistant to treatment with ${\alpha}$2,3-specific sialidase (NaNase I), and ${\alpha}$2,3- and ${\alpha}$2,8-specific sialidase of Newcastle disease virus. These results clearly indicated that the expressed enzyme is a type of GalNAc ${\alpha}$2,6-sialyltransferase like mST6GalNAc IV, which requires sialic acid residues linked to Gal${\beta}$1,3GalNAc-residues for its activity.
Background: Peste des petits ruminants (PPR) is an infectious disease caused by the peste des petits ruminants virus (PPRV) that mainly produces respiratory symptoms in affected animals, resulting in great losses in the world's agriculture industry every year. Single-domain variable heavy chain (VHH) antibody fragments, also referred to as nanobodies, have high expression yields and other advantages including ease of purification and high solubility. Objectives: The purpose of this study is to obtain a single-domain antibody with good reactivity and high specificity against PPRV. Methods: A VHH cDNA library was established by immunizing camels with PPRV vaccine, and the capacity and diversity of the library were examined. Four PPRV VHHs were selected, and the biological activity and antigen-binding capacity of the four VHHs were identified by western blot, indirect immunofluorescence, and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) analyses. ELISA was used to identify whether the four VHHs were specific for PPRV, and VHH neutralization tests were carried out. ELISA and western blot analyses were used to identify which PPRV protein was targeted by VHH2. Results: The PPRV cDNA library was constructed successfully. The library capacity was greater than 2.0 × 106 cfu/mL, and the inserted fragment size was approximately 400 bp to 2000 bp. The average length of the cDNA library fragment was about 1000 bp, and the recombination rate was approximately 100%. Four single-domain antibody sequences were selected, and proteins expressed in the supernatant were obtained. The four VHHs were shown to have biological activity, close affinity to PPRV, and no cross-reaction with common sheep diseases. All four VHHs had neutralization activity, and VHH2 was specific to the PPRV M protein. Conclusions: The results of this preliminary research of PPRV VHHs showed that four screened VHH antibodies could be useful in future applications. This study provided new materials for inclusion in PPRV research.
The purpose of this study is to examine whether suppliers are able to benefit by means of constructing a relationship-specific intangible asset and participating in collaboration with purchasers to actively maintain value created while mutually using inter-organizational information systems. To achieve the purpose of this study. 82 questionnaires have been analyzed from suppliers which are using electronic transactions through inter-organizational information systems. As a result, business process specificity and domain knowledge specificity, which are relationship-specific intangible assets, affect operational collaboration and strategic collaboration, which are classified by level of decision-making. Although both types of collaboration are needed to achieve both strategic and operational benefits, we find each collaboration to be uniquely promoted by a specific types of relationship-specific intangible asset. Operational collaboration is found to be an antecedent to operational benefit and strategic collaboration is found to be an antecedent to strategic benefits. No crossover between collaboration and supplier's benefits is found. Consequently, the result of this study shows collaboration is needed for domestic suppliers, which have relatively low levels of collaboration, to keep maintain relationship-specific intangible assets and to prevent the relationship termination cost when transactions have been stopped between supplier and purchaser. Also the results imply the supplier can have advantages by participating in collaboration.
A kinetic profile of the catalytic domain of stromelysin-1 (SCD) using the fluorescent peptide substrate has been determined by the stopped-flow technique. The pH profile has a pH optimum of about 5.5 with an extended shoulder above pH 7. Three pKa values, 5.0, 5.7, and 9.8 are found for the free enzyme state and two pH independent Kcat/Km values of 4.1$\times$104 M-1 s-1 and 1.4$\times$104 M-1 s-1 at low and high pH, respectively. The profile is quite different in shape with other MMP family which has been reported, having broad pH optimum with two pKa values. The substrate specificity of SCD towards fluorescent heptapeptide substrates has been also examined by thin layer chromatography. The cleavage sites of the substrates have been identified using reverse-phase HPLC method.SCD cleaves Dns-PLA↓L↓WAR and Dns-PLA↓L↓FAR at two positions. However, the Dns-PLA↓LRAR, Dns-PLE↓LFAR, adn Dns-PLSar↓LFAR are cleaved exclusively at one bond. The double cleavages of Dns-PLALWAR and Dns-PLALFAR by SCD are in marked contrast to the close structurally related matrilysin. A notable feature of SCD catalysis agrees with the structural data that the S1' pocket of SCD is deeper than that of matriysin. The differences observed between SCD and matrilysin may form the basis of understanding the structural relationships and substrate specificities of the MMP family in vivo.
The mature domain of a cysteine protease of Spirometra erinacei plerocercoid larva (i.e., sparganum) was expressed in Escherichia coli, and its value as an antigen for the serodiagnosis of sparganosis was investigated. The recombinant protein (rSepCp-1) has the molecular weight of 23.4 kDa, and strongly reacted with the sparganum positive human or mice sera but not with negative sera by immunoblotting. ELISA with rSepCp-1 protein or sparganum crude antigen (SeC) was evaluated for the serodiagnosis of sparganosis using patient's sera. The sensitivity and specificity of ELISA using rSepCp-1 protein were 95.0% (19/20) and 99.1% (111/112), respectively. In contrast, the sensitivity and specificity of ELISA with SeC were 100% (20/20) and 96.4% (108/112), respectively. Moreover, in experimentally infected mice, the sensitivity and specificity of both ELISA assays were 100% for the detection of anti-sparganum IgG. It is suggested that the rSepCp-1 protein-based ELISA could provide a highly sensitive and specific assay for the diagnosis of sparganosis.
Since cancer is the leading cause of death worldwide, there is an urgent need to understand the mechanisms underlying cancer progression and the development of cancer inhibitors. Signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3) is a major transcription factor that regulates the proliferation and survival of various cancer cells. Here, dual-specificity phosphatase 3 (DUSP3) was identified as a regulator of STAT3 based on an interaction screening performed using the protein tyrosine phosphatase library. DUSP3 interacted with the C-terminal domain of STAT3 and dephosphorylated p-Y705 of STAT3. In vitro dephosphorylation assay revealed that DUSP3 directly dephosphorylated p-STAT3. The suppressive effects of DUSP3 on STAT3 were evaluated by a decreased STAT3-specific promoter activity, which in turn reduced the expression of the downstream target genes of STAT3. In summary, DUSP3 downregulated the transcriptional activity of STAT3 via dephosphorylation at Y705 and also suppressed the migratory activity of cancer cells. This study demonstrated that DUSP3 inhibits interleukin 6 (IL-6)/STAT3 signaling and is expected to regulate cancer development. Novel functions of DUSP3 discovered in IL-6/STAT3 signaling regulation would help expand the understanding of cancer development mechanisms.
다양한 유전체 프로젝트로 말미암아 엄청난 서열 데이타들이 쏟아지고, 이에 따라 핵산 및 단백질 수준의 서열 데이타 분석이 매우 중요하게 인식되고 있다. 특히 최근에는 단백질이 단순하게 개별적인 기능을 가진 독립적인 요소가 아닌 전체 단백질 상호작용 네트워크 상에서 다른 객체들과 유기적인 관계를 갖으며 나름대로의 중요한 역할을 수행하고 있다는 점에 초점을 맞추어 연구가 진행되고 있다. 특히 단백질 상호작용 관계 분석을 위해서는 실제로 상호작용이 일어나는 도메인 모듈 정보가 아주 중요하게 작용하는데, 본 논문에서는 이러한 점을 고려하여 우리가 개발한 단백질 기능 및 상호작용 분석을 위한 PIVS(Protein-protein interaction Inference and Visualization System)에 대해 소개하고 있다 PIVS는 기존의 단백질 상호작용 데이타베이스들을 합쳐서 통합 데이타베이스를 생성하고, 다양한 전처리 과정으로 통합 데이타베이스 서열의 기능 및 주석 정보를 추출하여 로컬 데이타베이스화 하였다. 그리고 특히 단백질 상호작용 관계 분석을 위해 중요하게 작용하는 도메인 모듈 정보들을 추출하여 로컬 데이터베이스를 구축하였고, 기존의 단백질 상호작용 관계 데이타를 이용하석 도메인 사이의 상호작용 관계 정보도 수집하여 분석하였다. PIVS는 단백질의 종합적인 분석 정보, 즉, 기능 및 주석, 도메인, 상호작용 관계 정보 등을 손쉽고 편리하게 얻고자 하는 사용자에게 매우 유용하게 사용될 수 있을 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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