섬모충은 윤충류보다 다양한 크기를 가지고 있으며, 얇은 세포벽, 느린 운동성, 빠른 번식률로 새로운 동물성 먹이생물로써 개발가능성을 가지고 있다. 한국 연안 수역인 수영만, 광양만 및 경기만 소래 염전지역에서 식물성 플랑크톤 네트를 이용하여 6종의 섬모충을 채집하였으며, capillary pipette로 분리 $\cdot$배양하였다. 먹이생물로써의 개발가능성을 파악하기 위하여 크기, 운동성, 배양밀도 및 부유능력을 평가하였으며, 채집된 섬모충류 가운데 광양만에서 채집된 Euplotes sp. (K-1)가 가장 적합한 것으로 평가되었다. MErds 기본배지에 glycine, glucose, yeast extract을 각 0.1 g씩 첨가하여 변형한 MErds-2 배지는 기본배지보다도 약 6배의 번식률을 보여, Euplotes sp.를 비롯한 기타 섬모충 배양배지로도 유용하였다. Euplotes sp. (K-1)은 수온 $22.5^{\circ}C$, pH 8,조도 2,000 lux에서 각각 최고의 번식률을 보였으며, 이들 환경조건에 대해 비교적 폭넓은 환경적응력을 나타내었다. 한편, 빵효모 1.0 g/L의 첨가에 의해서도 대량배양이 가능하였다. 본 연구에서의 섬모충은 종보관이 용이하며 폭넓은 환경 적응력과 간단한 방법의 대량배양이 가능하여 초기 동물성 먹이생물로써의 높은 잠재력을 가지고 있는 것으로 평가되었다.
결구상추 밑둥썩음병원균인 Rhizoctonia. solani에 대한 길항세균으로 보고된 Stenotrophomonas maltophilia BW-l3 균주의 배양적 특성과 항균물질의 생산능을 조사하고 대량배지를 선발하였다. BW-13 균주의 초기 pH와 배양적온을 조사한 결과, pH는 $6.0\~8.0$에서 , 온도는 $35^{\circ}C$에서 세균의 생육이 가장 높았다. 대량배양을 위한 효율적인 탄소원을 선발하기 위하여 glucose, sucrose, lactose, maltose, manose 등의 저분자 탄소원과 개량제, 미강, 옥수수전분, 고구마전분 등의 고분자 탄소원을 사용하여 BW-13균주의 생장과 항균활성에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과, 기초배지에 $3\%$개량제를 첨가했을 때 BW-13 균주의 세균 증식과 항균활성에 가장 효과적이었다. 따라서 기초배지($1.25\%\;K_{2}HPO_4,\;0.38\%\;KH_{2}PO_4,\;0.01\%\;MgSO_4{\cdot}7H_{2}O,\;0.5\%\;Yeast extract$)에 개량제 $3\%$ 첨가한 배지(dough conditioner media)를 BW-13 균주의 대량배양용 배지로 선발하였다.
연령증가에 따라(노안) 최대 조절력은 감소된다는 것은 잘 알려져 있다. 노안 단 시력(single vision)은 단지 멀리 보는 것을 교정할 수 있다. 노안 누진렌즈 도수는 확실한 시야를 교정할 수 있다. 그러나 연령과 함께 시각계 내의 다른 변화는 안경만으로 교정할 수는 없다. 동공직경은 감소하고 양안 매체의 빛 투과가 감소한다. 그러므로 노인은 더 많은 빛을 필요로 하고 더 밝은 조명을 필요로 한다. 이것은 단지 망막내 추체의 밀도가 감소하는 등 감각계 변화의 한 예로, 이러한 변화는 시각계 내의 시기능 변화를 유발한다. 즉 80세의 시력은 반으로 감소한다. 주로 높은 공간주파수내 회절격자의 대비감도 감소는 양안 매개체내 비스듬한 빛을 증가시킴으로 인하여 눈부심이 증가된다. 베일휘도는 대략 4배 증가한다. 암순응은 느려지게되고 눈이 완전히 암순응에 적응되었을 때 빛감도는 대략 2(log unit) 보다 적다. 또한 특히 낮은 조명에서 칼라 비젼이 더 나빠지게 된다. 연령이 높은 사람은 황반부와 주변부 시력간의 분리를 요하는 시각적 작업에 문제가 있다. 유용시야 측정이 한 예이다. 이러한 유용시야는 시기능 훈련에 의해 개선되어질 수 있다.
본 시험은 최근 소비트렌드의 변화에 따라 소비자들이 쉽고 편하게 먹을 수 있는 씨 없는 감 개발의 선결조건인 배수체(12x) 교배 모본을 선발하기 위해 수행되었다. 염색체가 배가된 배수체 개체를 얻기 위해 교배 종자의 배배양을 통해 얻은 유묘의 생장점에 콜히친을 처리하였다. 콜히친을 0.03, 0.05%, 0.1% 등 3수준으로 처리한 결과, 0.05%에서 염색체가 배가된 개체의 발생률이 가장 높았다. 콜히친 처리 후 우리는 신초와 뿌리의 발생을 유도하기 위한 배지 조건을 구명하는 시험을 수행하였다. 신초는 $10{\mu}M$, 30 zeatin이 각각 첨가된 1/2MS배지에서 생장이 잘 되었으며, 뿌리는 10 mM NAA+5% DMSO에 5초 동안 침지 후 1/2MS배지에 배양하였을 때 생장이 잘 되었다. 또한 콜히친 처리에 의해 염색체가 배가된 개체(12x)의 기공 특성을 조사한 결과 염색체가 배가된 개체(12x)는 염색체 배가가 되지 않은 개체(6x)와 교배친(6x) 보다 잎의 공변세포 밀도는 더 적고, 크기는 더 큰 경향이었다.
충남 논산시의 천적생산업체인 세실의 점박이응애 사육장에서 발견된 곰팡이를 조사한 결과 Neozygites floridana 1종이 동정되었다. 종 동정은 형태학적 현미경적 특징과 DNA 염기서열 분석을 통해 이루어졌다. 곤충조직배양용 전용배지(Grace's insect tissue culture medium + 5% fetal bovine serum)에서 이 균의 생존을 확인할 수 있었다. 강낭콩 군락 내에서의 감염률은 36.1%이었다. 점박이응애는 잎의 윗면보다 뒷면에 상대적으로 높게 밀집되어 있었다. 곰팡이의 감염률은 윗면보다 뒷면에서 매우 높게 나타나, 균 발생 진단을 위해서는 잎 윗면보다는 뒷면을 확인하는 것이 요구된다. 이 균에 대하여 천적 생산을 위한 방제방법과 더불어 작물을 가해하는 점박이응애 방제를 위한 생물적 조절인자로서의 가능성에 대한 연구가 필요하다.
곤충으로부터 유용 효소생산 미생물의 탐색 과정에서 우수한 lipase 생산균주 9종을 분리하고 lipase 생산능을 조사하였다 16S rDNA 분석 결과 분리된 균주는 주로 Serratia 속, Pseudomonas 속, Burkholderia 속에 속하는 그람음성균들로 분석되었다. 그 중 lipase 생산능이 가장 우수한 균주를 선별하고 16S rDNA 서열분석 및 생리 생화학적 분석 결과를 바탕으로 Burkholderia sp. HY-10으로 동정하였으며 균주의 lipase생산특성을 조사하였다. 이 균주는 톱하늘소의 장으로부터 분리되었으며 olive oil을 탄소원으로 포함하는 배지에서 배양하였을 때 세포밀도에 의존하여 lipase의 생산이 유도되는 특성을 나타내었고 0.5%의 yeast extract와 0.5%의 olive oil이 포함된 M9배지에서 $30^{\circ}C$, 36-42시간의 배양에 의해 lipase의 생산이 최대치에 도달하였다.
Objective: We are aimed to identify anti-tumor effects of Curcuma longa L. on the stomach cancer cells through molecular biologic methods. Material & Methods: We used AGS as human stomach cancer cells obtained from American Type Culture Collection. The boiled extract of Curcuma longa L. $5{\mu}l$ (Sample I), $10{\mu}l$ (Sample II) was treated to cultural media(ml) for 0, 6, 12, 24, 48 hours. We measured the killing effect on stomach cancer cells through Trypan blue exclusion test and the suppressive effect on viability of stomach cancer cells via MTT assay. For identification of its anticancer mechanism, the revelation of Bcl-2, Bcl-XL, and Bax which are genes related to apoptosis using the quantitative RT-PCR, change of mitochondria membrane permeability and membrane potential via flow cytometry, the cycle of cell mitosis, caspase cleavage and annexin V staining were examined. Results: 1. showed significant killing effect on stomach cancer cell than the control group with a time(6 hours later) and density dependent manner, which was statistical significance. 2. Extract of Curcuma longa L. showed suppressive effect on viability of stomach cancer cells that each test groups had more suppressive effects on viability of stomach cancer cells than the control group with a time(6 hours later), which was statistical significance.(p<0.05) 3. In the test about the revelation of genes related to apoptosis, the revelation of Bcl-2 and Bcl-XL decreased with a density manner which was statistical significance. but the revelation of Bax was not changed with statistical significance. 4. Extract of Curcuma longa L. caused apoptosis by decreasing the absorbance of mitochondria with statistical significance, and also induced apoptosis by decreasing the membrane potential of mitochondria. 5. Extract of Curcuma longa L. destructed the cell cycle of cell mitosos. 6. Cell apoptosis was induced by extract of Curcuma longa L. certificated by method of caspase cleavage and annexin V staining. Conclusion: This experiment showed that Curcuma longa L. has anti-tumor effect with statistical significance. This is in vitro experiment and basic experiment on Curcuma longa L.. We hope more progressive research on Curcuma longa L. will go on and its anti-tumor effects will be more practically identified.
Objectives: We are aimed to identify anti-tumor effects of Curcuma aromatics on some kinds of cancer cells through molecular biologic methods. Materials & Methods: We used 4 kinds of cancer cell lines such as lung cancer cells(AS49), cervical cancer cells(HeLa), glioma cancer cells(A172) and prostate cancer cells(PC3). We treated the boiled extract of Curcuma aromatica $5{\mu}g,\;10{\mu}g$ to cultural media(ml) for 24 hours. We measured the cytotoxicitv on 4 kinds of cancer cells through tryphan blue exclusion test and the suppressive effect on viability of 4 kinds of cancer cells via MTT assay. We measured change of mitochondria membrane potential via flow cytometry. The quantitative RT-PCR was used to examine the effect on the revelation of Bcl-2 and Bax which are genes related to apoptosis. We examined the effect on the revelation of Bcl-2 Protein and Bar protein by western blot analysis. Results : In the experiment of tryphan blue exclusion test, the extract of Curcuma aromatica showed more significant killing effect on AS49, HeLa than the control group with density dependent manner, which was statistically significant. In the experiment of MTT assay the extract of Curcuma aromatica showed more suppressive effect on viability of A549, HeLa than the control group with density dependent manner, which was statistically significant. Curcuma aromatica induced apoptosis by decreasing the membrane potential of mitochondria in A549, HeLa. In the experiment of the revelation of genes related to apoptosis, the revelation of Bcl-2 decreased and the revelation of Bax increased in A549, HeLa treated with Curcuma aromatica with dose dependent manner. In the experiment of the revelation of protein related to apoptosis, the protein levels of Bcl-2 decreased and the protein levels of Bax increased in AS49, HeLa treated with Curcuma aromatica with dose dependent manner. Conclusions: From this study, we can infer that Curcuma aromatica has anti-tumor effect on lung cancer cells and uterine carcinoma cells but not on glioma cells and prostate cancer cells.
고부가가치의 천연 astaxanthin의 생산을 위한 Haematococcus pluvialis의 고농도 배양을 수립하기 위하여 세포 농도를 증가시키는 방법과 세포 내 색소를 증가시키는 방법 두 가지에 초점을 맞춰 본 연구를 수행하였다 Hongkong Medium (HKM) Modifed Bolds Basal Medium (MBBM) Modified Bristols Medium(MBM) Proteose-petone Medium (PPM) BG-11 Medium의 여러 배지를 사용하여 비교함으로서 배지 내 탄소원 질소원과 미량원소 등이 세포의 생장과 astaxan-tin 생산에 미치는 영향을 보면 HKM 은 $2.0$\times$10^{6}$ cells /mL의 세포 농도와 최고 6.14 mg/g cell의 astaxanthin content per cell 로 다른 배지 중 가장 높게 나타나므로 세포 농도를 높이기위해서 질소우너이 220 mg/L 인 HKM이 적당하고 색소 형성을 촉진시키기 위해서는 aggregation이 일어나 단위 세포당 astaxanthin 함량이 9.7 mg/g cell 로 높게 나타나는 MBBM이 월등함을 알수 있었다. H. pluvialis의 최적 배양 온도와 pH를 선정하깅 nl하여 $20^{\circ}C$$25^{\circ}C$, 3$0^{\circ}C$ 온도와 pH 4.5 6.0 7.5 의 배양조건을 수립한 결가 pH $7.5 20^{\circ}C$와 $25^{\circ}C$에서는 세포생장과 색소 형성이 우수함을 관찰 할 수 있었고 배양에 적당한 20 $^{\circ}C$ 에서 배양하다가 $30^{\circ}C$로 24시간 배양항 heating 효과를 주면 astaxanthin 축적을 촉진시키는데 효과적임을 알수있었다. PPMso의 질소원과 proteose-peptone의 고갈시세포의 생장의특성과 astaxanthin 생산에 미치는 영향은 control 배지에서 세포 농도와 세포의 건조질량이 각각 $0.98$\times$10^{6}$ / cell /mL 와 0.2 g/L astaxanthin의 농도는 1.92 mg/L 단위 세포당 astaxanthin 농도는 9.6 mg/g cell 로 관찰되었다결론적으로 질소원과 peptone이 고갈되면 세포의 생장은 억제되나 astaxanthin의 생산은 촉진됨을 알수 있었으며 세포 생장을 촉진하는 광도 60$\mu$E/($\m^2$s)와 HKM 배지 이용의 1단계와 높은 광도와 MBBM배지를 이용한 색소 생산의 2단계 배양을 최적조건으로 수립하였다.
In order to protect the spermatozoa against cold shock, hen egg yolk is widely used as a cryoprotective agent in semen freezing extenders for domestic animals. The protective action of yolk is largely presumed to be due to low density lipoproteins (LDL). The effects of LDL on sperm quality of bull and northern pike (Esox lucius) after freezing-thawing have been reported, but no study has been made to evaluate the effect of LDL on boar sperm motility and other characteristics. The experiment was carried out to investigate the effect of LDL on the freezing of boar sperm in 0.25 ml straws. The aim was to evaluate the quality of boar spermatozoa cryopreserved in the presence of LDL. Motility of semen cryopreserved in LDL was analyzed and compared to semen cryopreserved with Tris-citric acid-glucose (TCG) and Tris-citric acid-fructose (TCF), two basic freezing extenders containing egg yolk. Similarly, acrosome and plasma membrane integrity were also evaluated and compared to semen cryopreserved with TCG and TCF. Analysis of sperm quality after freeze-thaw showed that the motility, acrosome and plasma membrane integrity were improved with LDL in the extender, as compared to the TCG and TCF. The highest post-thaw integrity of acrosome and plasma membrane and motility were obtained with 9% LDL (w/v). Consequently, the optimum LDL concentration in the extender was 9%. It is also suggested that the concentration of LDL addition is important for the effect on boar sperm protection during freezing and thawing. The percentage of motile spermatozoa was significantly higher after freezing in 9% LDL than in TCG and TCF 54.4% versus 30.4% and 30.1% (p<0.05), respectively. The integrity of acrosome and plasma membrane were also significantly higher at 70.3% and 50.5% respectively with semen frozen in 9% LDL extender compared to TCG at 37.8% and 30.3% and TCF at 36.4% and 29.9%, respectively (p<0.05),. In conclusion, we propose that extender containing LDL extracted from hen egg yolk could be used as a cryoprotective media with a better efficiency than TCG and TCF. LDL improved boar semen quality, allowing better spermatozoa motility, acrosome and plasma membrane integrity after the freeze-thaw process. Furthermore, we found out that the extender with 9% LDL concentration significantly enhanced motility, acrosome and plasma membrane integrity of boar sperm after freezing and thawing.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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