Aleurone layers of normal and vp1 mutant maize kernels were extracted and centrifuged at 100,000g to yield a cytosol fraction. Binding of [3H]ABA cis, trans (+)ABA to a soluble macromolecular components present in the cytosol was demonstrated by Sephadex chromatography and non-denaturing PAGE. The binding component was of high molecular weight and seems to be an aggregate of proteins. A rapid DEAE-cellulose filter method for assaying bound [3H]ABA to a soluble protein was adapted. Binding assays were performed with cytosol that had been preheated or incubated with several enzymes, indicating that heat and protease treatments disrupted the binding. This suggested that binding occurred to proteins. Some properties of the ABA binding proteins were described. The [3H]ABA binding were reduced dramatically when unlabeled ABA was added as a competitor, suggesting a specific binding of [3H]ABA. Gel filtration profiles and autoradiogram of [3H]ABA binding showed no difference in the binding components of Vp1 and vp1/vp1 mutant cytosol, indicating that Vp1 protein is not a sole ABA binding protein.
흰쥐 간세포에 존재하는 비소결합물질의 특성을 조사하기 위하여 4 ppm의 비소를 포함하는 NaASO$_2$수용액의 식수로 15일간 흰쥐에 공급하였다. 비소처리군의 간 cytosol분획의 정상단백 질의 함량은 감소하였으나 8종류의 stress protein의 함량은 증가하였다. Cytosol에 존재하는 비소결합체물질은 한 종류이고,glycine, glutamic acid 및 cysteine의 3종류의 아미노산으로 구성되어있으며 분자량은 500D이었다.Glutathione은 비소와 5:1의 몰비로 결합하였으며 glutathione과 비소의 복합체는 gel filtration chromatography에서 비소결합물질과 같은 이동성을 나타내어 cytosol에 존재하는 미소결합물질은 glutathione으로 추정되었다. Glutathione에 결합한 비소는 미토콘드리아의 호흡, 형태전환 및 팽윤과 수축기능에 있어서 대조군과 별다른 차이를 나타내지 않았다. 이와 같은 결과들로써, 생체에 직접 처리한 비소에 의하여 stress protein합성이 촉진되며, 간 cytosol에 존재하는 비소결합물질은 glutathione으로 추정되고, 비소와 복합체를 형성함으로써 비소의 세포독성에 대한 방어기능을 나타내는 것으로 생각된다.
Concentration and distribution of Fe, Zn, Cu, Cd, Mn, Pb, Ni among subcellular fractions (cellular membrane structures and cytosol) and Zn, Cu, Cd among cytoplasmic proteins in the kidney and digestive gland of mussel Modiolus modiolus living along a polymetallic concentration gradient were studied. It was found in the kidney of M. modiolus from contaminated sites that the Fe percent increased in the "membrane" fraction, whereas Zn, Pb, Ni and Mn percent increased in the cytosol compared to the kidney of the control mussel. Note kidney cytosol of M. modiolus from clean and contaminated sites sequestered major parts of Cu and Cd. In the digestive gland of M. modiolus from contaminated sites Fe, Zn, Cd, Mn, Ni percent increased in the "membrane" fraction, whereas Cu, Pb percent increased in the cytosol compared to digestive gland of control mussel. Gel-filtration chromatography shows kidney of M. modiolus contains increased metallothionein-like protein levels irrespective of ambient dissolved metal concentrations. It was shown that the metal detoxification system in the kidney and digestive gland of M. modiolus was efficient under extremely high ambient metal levels. However, under complex environmental contamination in the kidney of M. modiolus, the metal detoxification capacity of metallothionein-like proteins was damaged.
The Present study has been carried out to elucidate the antiestrogenic effects of tamoxifen in uteri of immature rats. Immature female Sprague-Dawley rats were allocated into 4, groups and injected with $5{\mu}g$ of estradiol-$17{\beta}$, $50{\mu}g$ of tamoxifen, a combination of both or vehicle only subcutaneously three times after an interval of 24 hours respectively. The concentrations, of cytosol estradiol receptor in uterus were measured by DCC method before and 1, 3, 6, 12, 24, 48 and 72 hours after the above treatments and those of nuclear estradiol were measured by protamine exchange method 72 hours and those of nuclear estradiol were measured by protamine exchange method 72 hours after the above treatments. The results obtained were summarized as follows: 1. The binding affinity of tamoxifen to estradiol receptor in uterine cytosol was lower than that of estradiol-$17{\beta}$, accordingly the translocation of estradiol receptor into the nucleus was found to be delayed. 2. Tamoxifen caused the retention of estradiol receptor in nucleus over 24 hours and inhibited the replenishment of the receptor from nucleus to cytosol in uterus.
The ribosomal synthesis of proteins in the eukaryotic cytosol has always been thought to start from the unformylated N-terminal (Nt) methionine (Met). In contrast, in virtually all nascent proteins in bacteria and eukaryotic organelles, such as mitochondria and chloroplasts, Nt-formyl-methionine (fMet) is the first building block of ribosomal synthesis. Through extensive approaches, including mass spectrometric analyses of the N-termini of proteins and molecular genetic techniques with an affinity-purified antibody for Nt-formylation, we investigated whether Nt-formylated proteins could also be produced and have their own metabolic fate in the cytosol of a eukaryote, such as yeast Saccharomyces cerevisiae. We discovered that Nt-formylated proteins could be generated in the cytosol by yeast mitochondrial formyltransferase (Fmt1). These Nt-formylated proteins were massively upregulated in the stationary phase or upon starvation for specific amino acids and were crucial for the adaptation to specific stresses. The stress-activated kinase Gcn2 was strictly required for the upregulation of Nt-formylated proteins by regulating the activity of Fmt1 and its retention in the cytosol. We also found that the Nt-fMet residues of Nt-formylated proteins could be distinct N-terminal degradation signals, termed fMet/N-degrons, and that Psh1 E3 ubiquitin ligase mediated the selective destruction of Nt-formylated proteins as the recognition component of a novel eukaryotic fMet/N-end rule pathway, termed fMet/N-recognin.
The cttl+ gene in Schizosaccharomyces pombe encoeds a catalse responsible for H2O2-resistance of this organism as judged by the H2O2-sensitive phenotype of the ctt1Δ mutant. In this study, we investigated the subcellular localization of the Ctt1 gene product. In wild type cells catalase activity was detected in the organelle fraction as well as in the cytosol. The ctt1Δ mutant contained no catalase activity, indicating that both cytosolic and organellar catalases are the products of a single ctt1+ gene. Western bolt analysis revealed two catalase bands, both of which disappeared in the ctt1Δ mutant. The major, fastermigrating band existed in the cytosol whereas the monor, slower-migrating band appeared to be located in organelles, most likely in peroxisomes. These results suggest that the ctt1+ gene product targeted to the peroxisome is a modified form of the one in the cytosol.
This study was designed to investigate the effect of silkworm powder on oxygen radicals and their scavenger enzymes in brain membrances of SD rats. Hydroxyl radical (OH) levels resulted in a considerable decreases in brain mitochondria fraction. Superoxide radical (O$_2$) levels were a slightly decreased in brain cytosol fraction. Lipid peroxide (LPO) and Oxidized protein (OP) levels were significantly decreased in brain mitochondria and microsomes fraction. Mn-superoxide dismutase (SOD) activity was remarkably increased in the mitochondria fraction. Cu and Zn-SOD activities were effectively increased in brain cytosol fraction. GSHPx activity was considerably increased in brain cytosol fraction. These results suggest that anti-aging effect of silkworm plays an effective role in attenuating an oxidative stress and increasing a scravenger enzyme activity in brain membranes.
본 연구에서는 제2형 당뇨병를 가진 GK 흰쥐(Goto-Kakizaki) 간에서 추출한 cytosol과 심장에서 추출한 mitochondria를 이용한 모델계에서 당대사 관련 효소인 glucokinase glucokinase(GCK), pyruvate dehydrogenase(PDH), acetyl-CoA carboxylase(ACC) 및 glucosidase 활성에 대한 한약재의 물 추출물의 항당뇨 효과를 연구하였다. 그리고 역시 그들의 물 추출물의 free radical 소거활성을 DPPH 방법으로 알아보았다. Free radical 소거활성은 산수유(CF), 목단피(MDB), 천화분(CHB) 그리고 산약(SY)의 물 추출물이 강했고 반면에 백목령(BBR), 숙지황(SGH)과 택사(TS)는 낮은 소거작용을 나타내었다. 간 cytosol의 GCK 활성은 산수유(CF)와 천화분(CHB)에서 다른 추출물보다 더 강했다. 심장미토콘드리아의 PDH 활성은 택사(TS)를 제외하고 모든 추출물에서 대조군과 비교하여 높았다. 간 cytosol의 ACC 활성은 대조군보다 산수유(CF), 천화분(CHB), 숙지황(SGH), 택사(TS) 그리고 산약(SY) 추출물에서 높았다. 산수유(CF), 백복령(BBR) 및 목단피(MDB) 추출물은 ${\alpha}$-glucosidase 활성 감소를 유도했다. 따라서 모든 추출물은 혈당 상승을 억제할 수 있는 항당뇨 기능성식품이나 약품 개발을 위한 기능성 천연 소재로 이용될 수 있을 가능성을 제시하였다.
Objectives : This study was done to investigate the protective effects of Gagaminjakdowha-Tang on liver injury of rats induced by $CCl_4$ and d-galactosamine. Methods : All animals were divided into 5 groups, those were normal group(untreated), control group(treated with 0.9% Saline solution), sample I group(200mg/kg administrated), sample II group(400mg/kg administrated), Silymarin(200mg/kg administrated) group. Liver injury of rats were induced by $CCl_4$ and d-galactosamine, and then the serumtransaminase(ALT & AST) alkaline phosphatase(ALP), lactic dehydrogenase(LDH) for enzyme activities, Liver cytosol malondialdehyde(MDA), catalase, superoxide dismutase(SOD), glutathione S-transferase(GST) and glutathione-peroxidase(GPX) for enzyme activities were measured. Results : The inhibitory effects on the serum ALT activities were noted in both sample I and sample II group. The inhibitory effects on the serum AST activities were noted in only sample II group. The inhibitory effects on the serum ALP activities were noted in both sample I and sample II group. The inhibitory effects on the serum LDH activities were noted in only sample II group. The inhibitory effects on the liver cytosol malondialdehyde were noted in only sample II group. The decresed effects on the liver cytosol catalase activities were inhibited in only sample II group. The decresed effects on the liver cytosol superoxide dismutase activities were inhibited in only sample II group. The decresed effects on the liver cytosol GST activities were inhibited in only sample II group. The decresed effects on the liver cytosol GPX activities were inhibited in only sample II group. The inhibitory effects of the serum ALT activities were noted in both sample I and sample II. The inhibitory effects of the serum AST activities were noted in only sample II group. The inhibitory effects of the serum ALP activities were noted in only sample II group. The inhibitory effects of the serum LDH activities were noted in both sample I and sample II group. Conclusions : Gagaminjakdowha-Tang has protective effects against liver injury in rats induced by $CCl_4$ and d-galactosamine.
This study was designed to investigate the effects of mulberry (Morus alba L.) leaf extract (MLE) on oxygen radicals and their scavenger enzymes in liver membranes of rats. Sprague-Dawley (SD) male rats (160$\pm$10 g) were fed basic diet (control group), and experimental diets (MLE-100 and MLE-300 groups) added 100 and 300 mg/kg BW/day for 6 weeks. Hydroxyl radical (.OH) levels resulted in a significant decreases (15.2% and 18.1%, 5.6% and 8.0%, respectively) in liver mitochondria and microsomes could be not obtained. These are no significant differences in superoxide radical ($O_2$) levels of liver cytosol in MLE-100 and MLE-300 groups compared with control group. Lipid peroxide (LPO) levels were slightly decreased about 13.6% and 6.1% in liver mitochondria and microsomes of MLE-300 group compared with control group. Oxidized protein (OP) levels were remarkably decreased about 16.9% and 27.2% in liver microsomes only of MLE-100 and MLE-300 group compared with control group. Mn-SOD activities in liver mitochondria were remarkably increased (18.2% and 28.7%, respectively) in MLE-100 and MLE-300 groups, and Cu,Zn-SOD activities in liver cytosol were also significantly increased (11.3% and 20.2%, respectively) in MLE-100 and MLE-300 groups compared with control group. Mn-SOD activities in liver mitochondria were remarkably increased (18.2% and 28.7%, respectively) in MLE-100 and MLE-300 groups, and Cu,Zn-SOD activities in liver cytosol were also significantly increased (11.3% and 20.2%, respectively) in MLE-100 and MLE-300 groups compared with control group, but significant difference between GSHPx activities in liver cytosol could be not obtained. These results suggest that anti-aging effect of mulberry leaf extract (MLE) may play a pivotal role in attenuating a various age-related changes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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