Dryfilm method by using 3M Petrifilm$^{TM}$ has been examined to replace conventional agar method for isolation of microorganisms from foods. The objectives of the present study were to evaluate suitability of dryfilm method as a microbial isolation method and to determine the effect of antimicrobial agent on dryfilm for isolation of microorganisms from foods. Five different foods, milk, ground beef, fishery surimi, Takju and wheat flour were used to isolate the natural microflora in foods and the inoculated Escheri chia coli. Standard method agar (SMA, Difco) and Petrifilm$^{TM}$ aerobic count (PAC, 3M) were used to isolate total microorganisms from foods. Violet red bile agar (VRBA), brilliant green lactose bile (BGLB) broth and Petrifilm$^{TM}$ coliform count (PCC, 3M) were used to isolate coliforms from foods. E. coli broth (EC broth) and Petrifilm$^{TM}$ E. coli count (PEC, 3M) were used to isolate E. coli from foods. Acidified potato dextrose agar (APDA) and Petrifilm$^{TM}$ yeast & mold count (PYMC, 3M) were used to isolate yeasts and molds from foods. Total aerobic plate counts isolated from five different foods by SMA and PAC (3M) were riot significantly different each other at P<0.05 level and were highly correlated each other ($\geq$0.96). Mugwort extract as an antimicrobial agent did not affect microbial enumeratiion of Dryfilm. Significantly higher number of coliform colonies were formed on VRBA than PCC (3M) from ground beef, but they were not significantly different in coliform colonies from milk samples. PCC (3M) and BGLB were not significantly different for enumeration of coliforms in milk and beef samples. Significantly higher number of E. coli were isolated by EC broth than PEC from ground beef, but these were not significontly different for enumeration of E. coli from milk. Yeast and mold counts isolated from Takju and wheat flour by APDA and PYMC (3M) were not significantly different at P<0.05 level. These data indicate that dryfilm method by using 3M Petrifilm$^{TM}$ can be successively used as an alternative to conventional agar method for enumeration of microorganisms in various foods.
A method for inoculum production of Botryosphaerisa dothidea was developed using cucumber disks and cereal media. Disks of cucumber fruits, and cereal media of barley, wheat, and rice seeds were inoculated with mycelial plugs of B. dothidea and incubated at 27$^{\circ}C$. Pycnidia were produced on the surface of cucumber disks and seeds after 5 days of inoculation. When the inoculated barley seeds were immersed in sterilized distilled water for 5 minutes, abundant conidia of B. dothidea were exuded from mature pycnidia. Conidia were held together by mucilage as they were released from an ostiole. Compared with the conventional method for inoculum preparation using agar media, such as potato-dextrose agar and oatmeal agar, this method could minimize the tedious work required for inoculum preparation within a shorter period of time.
Kim Kwan-Sik;Bae Eun-Kyung;Ha Sang Do;Park Young Seo;Mok Chul Kyoon;Hong Kwan Pyo;Kim Sang Phil;Park Jiyong
Journal of Food Hygiene and Safety
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v.19
no.4
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pp.209-216
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2004
Dry rehydratable film methods were compared to conventional methods for the enumeration of microorganisms in Korean traditional foods. Kimchi, doenjang, kochujang, kanjang, takju, sujeongkwa and sikhe were used as Korean traditional foods. $Petrifilm^{TM}$ aerobic count plate, $Petrifilm^{TM}$ coliform count plate, $Petrifilm^{TM}$ E. coli/coliform count plate, $Petrifilm^{TM}$ yeast and mold count plate and $Petrifilm^{TM}$ staph express count plate were compared to plate count agar, most probable number (MPN) for coliform, MPN for E. coli, potato dextrose agar and coagulase test, respectively. Regression analysis indicated that correlation coefficient values were 0.974-0.998, 0.913-0.995, 0.955-0.978, 0.968-0.986 and 0.998-0.999 for total aerobic bacteria, yeast and mold, coliform, E. coli and S. aureus, respectively. There were no significant differences between two methods, suggesting that $Petrifilm^{TM}$ plates can be used as an alternative to conventional method for the determination of microorganisms in Korean traditional foods.
The susceptibilities of 45 clinical isolates of bacteroides frogilis to cefaclor, ciproflxacin and imipenem were determined by new method, E-test (AB Bidisk, Solna, Sweden) and were compared with those from conventional agar dilution method by using brain heart infusion, Mueller-Hinton and Wilkins Chalgren agar plates. And the susceptibility of 60 clinical isolates of Bacteroides fragilis group (B. fragilis 45 strains, B. distasonis 6 strains, B. ovatus 5 strains, B. thetaiotaomicron 4 strains) to 5 quinolones (ciprofloxacin, enoxacin, norfloxacin, ofloxacin, pefloxacin) were determined by in vitro agar dilution method. Compared with agar dilution MICs for B. fragilis 45 strains, 90.3% of E-test MICs were within ${\pm}$1 dilution of the agar dilutions, and 98.4% were within 2 dilutions. And there were little effect of different medium bases to determine MICs except Mueller-Hinton agar. On Mueller-Hinton agar, B. fragilis showed have or no growth activity. In vitro susceptibility of B. fragjlis group to quinolones, most of the test strains showed resistant patterns to quinolones except ofloxacin and there was little difference of susceptibility patterns between species of B. fragilis group.
Infection of surgical wounds is a severe problem. Conventional tissue reattachment methods have limits of incomplete sealing and high susceptibility to infection. Medical adhesives have several advantages over traditional tissue reattachment techniques, but still have drawbacks, such as the probability of infection, low adhesive strength, and high cytotoxicity. Recently, a new medical adhesive (new-adhesive) with high adhesive strength and low cytotoxicity, composed of aldehyded dextran and ${\varepsilon}$-poly(L-lysine), was developed. The antimicrobial activity of the new-adhesive was assayed using agar media and porcine skin. In the agar diffusion method, inoculated microorganisms that contacted the new-adhesive were inactivated, but this was not dependent on the amount of new-adhesive. Similar to the agar media results, the topical antimicrobial effect of new-adhesive was confirmed using a porcine skin antimicrobial assay, and the effect was not due to physical blocking based on comparison with the group whose wounds were wrapped.
We compared the efficacy and applicability of a modified formalin-ether concentration technique (M-FECT) to the conventional FECT (C-FECT) and the agar plate culture (APC) method for the detection of Strongyloides stercoralis larvae. For this purpose, we used 600 human fecal specimens collected in an endemic area of southern Thailand. In the M-FECT, we used 2 layers of wire meshes, instead of gauze, to avoid the loss by absorption/adhesion of larvae to the gauze during filtration, and we reduced the exposure time of S. stercoralis larvae in stool samples to formalin. By such simple modifications, the efficacy of M-FECT has become comparable to APC and was much better than that of C-FECT for the diagnosis of strongyloidiasis.
In the present study, the performance of culture methods using two selective agars and real-time PCR were compared for selective isolation of Cronobacter in powdered infant formula and dried pumpkin. Two food samples were spiked with the pathogen and then preenriched in distilled water. A small portion of preenrichment (10 mL) was incubated in Enterobacteriaceae enrichment both, followed by inoculation onto Druggan-Forsythe-Iversen agar (DFI agar) and Cronobacter sakazakii chromogenic plating agar (R&F agar). The preenrichment and enrichment (1 mL each) was used in real-time PCR assay. In powdered infant formula (PIF), no statistical difference was observed between both culture methods and real-time PCR with preenrichemt (p > 0.05). However, the number of positives obtained by R&F agar and real-time PCR was much higher than that of culture method using DFI agar in dried pumpkin (p < 0.05). In particular, R&F agar yielded a significantly greater selectivity than DFI agar in dried pumpkin (p < 0.05). Real-time PCR and R&F agar, which are currently recommended by US FDA, could be used as an alternative detection tools for the isolation of Cronobacter in PIF and ingredient of child foods such as dried pumpkin that has high number of competing natural microflora.
Acinetobacter baumannii is an aerobic, gram-negative and glucose-non-fermenting bacterium, which has emerged as a serious opportunistic pathogen. Many clinical microbiology laboratories use the Vitek 2 system for the routine antimicrobial susceptibility testing process, including testing on A. baumannii isolates. However, in case of amikacin, it is now recommended to perform additional antimicrobial susceptibility testing for A. baumannii strains due to the relatively lower minimum inhibitory concentration (MIC) in the Vitek 2 system compared to conventional reference methods. In our study, we assessed MIC for amikacin susceptibility testing of A. baumannii isolates in the Vitek 2 system, the agar dilution, Etest, and disk diffusion method. We collected 40 gentamicin-resistant, A. baumannii strains (amikacin MIC by Vitek 2:${\leq}2{\mu}g/mL$, 2 isolates; $4{\mu}g/mL$, 34 isolates; $8{\mu}g/mL$, 4 isolates) from a University hospital and compared the Vitek 2 system to other reference methods for testing susceptibility to amikacin. The Vitek 2 system showed major errors in all of the 40 isolates, yielding a low MIC. The results of our study strongly suggested that the Vitek 2 system was not a reliable method to test the MICs of gentamicin; ranging from ${\geq}16{\mu}g/mL$ for amikacin susceptibility. Other tests, such as agar dilution, Etest, or disk diffusion methods, should be paralleled to determine the MIC of amikacin in A. baumannii.
Contents of total aerobic bacteria, coliform, Escherichia coli, yeast, mold, and Staphylococcus aureus in meat, dairy, and fishery products were analyzed by dry rehydratable film method using 3M $Petrifilm^{TM}$ and compared against those obtained through conventional method. Two methods showed high correlations of 0.990-0.999, 0.975-0.999, 0.979-0.987, 0.978-0.984, and 0.999 for total aerobic bacteria, yeast and mold, coliform, E. coli, and S. aureus, respectively; therefore, dry rehydratable film method using 3M $Petrifilm^{TM}$ offers acceptable alternative to conventional method for enumeration of microorganisms in meat, dairy, and fishery products.
The aim of this study was to evaluate endodontic irrigation methods with $EndoVac^{(R)}$ and $EndoActivator^{(R)}$ in the elimination of Enterococcus faecalis from the root canals. Extracted 70 human single-rooted teeth were used. The canals were instrumented by a crown-down technique with .04 taper ProFile to ISO size 40. After the teeth were autoclaved, the canals were inoculated with E. faecalis and incubated for 48 h. The teeth were randomly divided into three experimental groups of 20 teeth each according to canal irrigation methods and two control groups as follows: group 1 - $EndoVac^{(R)}$; group 2 - $EndoActivator^{(R)}$; group 3-Conventional needle irrigation method. After canal irrigation using 2.5% NaOCl. first samples (S1) were taken using sterile paper point. And the canals were filled with sterile brain heart infusion (BHI) broth and incubated for 24 h, then second samples (S2) were taken. The samples were cultured on BHI agar plate to determine the numbers of colony forming units (CFU). In first sampling (S1), only one canal of conventional method among the all experimental groups was positive cultured. In second sampling (S2), $EndoVac^{(R)}$ group showed the least positive culture numbers of E. faecalis. There was statistically significant difference between the $EndoVac^{(R)}$ and conventional needle irrigation methods in the mean value of Log CFU. According to the results of this study, $EndoVac^{(R)}$ showed better efficacy than conventional needle irrigation method in the elimination of E. faecalis from the root canal.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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