• 한국축산식품학회:학술대회논문집
• /
• 한국축산식품학회 1998년도 추계학술발표회
• /
• pp.41-57
• /
• 1998

Five hundreds of bifidobacteria were isolated from an healthy Korean and the inhibitory effects of these isolated bacteria on harmful enzymes of human intestinal microflora were examined by cocultivation of the isolated bifidobacteria with E. coli HGU-3 or total human intestinal microflora. In comparison with the results of E. coli or intestinal microflora cultivation, Bifidobacterium breave K-110, B. breve K-111 and B. infantis K-525 effectively inhibited harmful enzymes (${\beta}-glucuronidase$ and tryptophanase) of E. coli and lowered the pH of the culture media. Also they inhibited the harmful enzymes (${\beta}-glucosidase$, ${\beta}-glucuronidase$, tryptophanase and urease) and ammonia production of intestinal microflora, and lowered pH of the culture media by increasing the number of bifidobateria on intestinal microflora. The inhibitory effect of bifidobacteria on Growth of Helicobacter pylori and Rotavirus infection were exammed. Bifidobacterium K-110 and K-111 inhibited effectively them. When these isolated bifidobacteria were administered to mice, the activities of fecal harmful enzymes were inhibited and the AC and ACF formation were suppressed. Among tested bifidobacteria, B. breve K-110 had high inhibitory effect of fecal harmful enzymes and ACF formation.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제28권1호
• /
• pp.47-52
• /
• 2001

구기자나무의 효과적인 재분화조건을 바탕으로 염류내성유 전자인 Bet A와 Bet B유전자의 도입을 시도하였다. 구기자나무의 절편체를 재료로 kinetin 1 mg/L, IBA 0.05 mg/L가 첨가된 MS배지에 2일간 전배양한 후 Agrobacterium과 공조배양 및 선발배지에서의 배양으로 kanamycin에 내성을 갖는 잠정적인 형질전환체를 유도하였다. 형질전환체는 PCR 기법 및 Southern blot분석으로 Bet A와 Bet B 유전자 전이를 확인하였고, 도입된 유전자의 발현은 RT-PCR 방법을 사용하여 확인하였다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제27권6호
• /
• pp.491-496
• /
• 2000

더덕의 효과적인 재분화조건 (약 90%의 재분화율)을 바탕으로 개화시기 조절유전자인 RAG25 Codonopsis lanceolata유전자의 도입을 시도하였다. 더덕의 잎 절편을Agrobacterium과 3일 동안 공조배양 하였으며 NAA 2 mg/L, BA 2 mg/L (N2B2)와 NAA 2 mg/L, BA 4 mg/L (N2B4)가 첨가된 shoot inducing media (Km 20mg/L와 Cf 250 mg/L가 첨가됨)에서 배양하였을 때 형질전환 신초가 형성되었다. 획득된 신초에서 genomic DNA를 추출하고 npt II와 RAG25 primer를 이용한 PCR을 수행하여 각각 0.7 kb와 0.6 kb의 band를 확인하였다. RAG25 유전자에 대한 PCR산물을 이용하여 Southern hybridization을 수행한 결과 PCR과 동일한 위치에서 band 가 검출되어져 이 유전자의 도입을 재확인하였다.

• 원예과학기술지
• /
• 제18권6호
• /
• pp.797-801
• /
• 2000

본 연구는 고추에서 Agrobacterium tumefaciens를 이용한 형질 전환시 형질전환율을 높이기 위하여 A. tumefaciens와의 접종시간과 인위적인 상처처리에 따른 효과를 조사하였던 바 고추 형질전환시 자엽절편체의 재분화는 인위적 상처처리 및 A. tumefaciens 접종시간에 의해 영향을 받았다. 접종시간을 3600초로 한 경우의 재분화는 상처처리에 의해 급격히 감소하였으며 자엽 절편체에 대한 인위적인 상처처리가 20초 또는 120초간의 접종시간처리와 병행됨으로써 형질 전환율을 58-72% 이상으로 높이는 효과를 보였다. 형질전환여부의 확인을 ${\beta}$-glucuronidase 염색법과 npt II primer를 이용한 polymerase chain reaction 분석에 의해 수행 한 바 효과적인 것으로 판단되었다.

• Archives of Pharmacal Research
• /
• 제21권1호
• /
• pp.54-61
• /
• 1998

Five hundreds of bifidobacteria were isolated from a healthy Korean and the inhibitory effects of these isloated bacteria on harmful enzymes of human intestinal microflora were examined by cocultivation of the isolated bifidobacteria with E. coli or total human intestinal microflora. In comparison with the results of E. coli or intestinal microflora cultivation, Bifidobacterium breve K-110, B. breve K-111 and B. infantis K-525 effectively inhibited harmful enzymes ($\beta$-glucuronidase and tryptophanase) of E. coli and lowered the pH of the culture media. Also they inhibited the harmful enzymes ($\beta$-glucosidase, $\beta$-glucuronidase, tryptophanase and urease) and ammonia production of intestinal microflora, and lowered pH of the culture media by increasing lactic acid bacteria of intestinal microflora. When these isolated bifidobacteria were administered on mice, fecal harmful enzymes were also inhibited. Among tested bifidobacteria, B. breve K-110 had the highest inhibitory effect of fecal harmful enzymes.

• Plant Biotechnology Reports
• /
• 제5권2호
• /
• pp.147-156
• /
• 2011

Efficient Agrobacterium-mediated genetic transformation of Scoparia dulcis L. was developed using Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404 harboring the binary vector pCAMBIA1301 with ${\beta}$-glucuronidase (GUS) (uidA) and hygromycin phosphotransferase (hpt) genes. Two-day precultured leaf segments of in vitro shoot culture were found to be suitable for cocultivation with the Agrobacterium strain, and acetosyringone was able to promote the transformation process. After selection on shoot organogenesis medium with appropriate concentrations of hygromycin and carbenicillin, adventitious shoots were developed on elongation medium by twice subculturing under the same selection scheme. The elongated hygromycin-resistant shoots were subsequently rooted on the MS medium supplemented with $1mg\;l^{-1}$ indole-3-butyric acid and $15mg\;l^{-1}$ hygromycin. Successful transformation was confirmed by PCR analysis using uidA- and hpt-specific primers and monitored by histochemical assay for ${\beta}$-GUS activity during shoot organogenesis. Integration of hpt gene into the genome of transgenic plants was also verified by Southern blot analysis. High transformation efficiency at a rate of 54.6% with an average of $3.9{\pm}0.39$ transgenic plantlets per explant was achieved in the present transformation system. It took only 2-3 months from seed germination to positive transformants transplanted to soil. Therefore, an efficient and fast genetic transformation system was developed for S. dulcis using an Agrobacterium-mediated approach and plant regeneration via shoot organogenesis, which provides a useful platform for future genetic engineering studies in this medicinally important plant.

• Journal of Plant Biotechnology
• /
• 제31권1호
• /
• pp.13-17
• /
• 2004

형질전환 효율을 높이기 위하여, NPTII와 GUS유전자를 포함하고 있는 pIG121Hm을 미세 입자에 코팅하여 particle bombardment를 수행한 후 pIG121Hm가 도입된 Agrobacterium tumefaciens EHA101와 3일간 공동 배양하였다. 그 후 캘러스를 1mg/L 2,4-D, 0.1mg/L BAP, 100mg/L kanamycin, 그리고 200mg/L carbenicillin이 포함된 MS배지로 옮겨 4주간 성장시킨 후 kanamycin저항성 캘러스를 선발하여 GUS 발현을 관찰하였고, PCR 분석을 통하여 700 bp의 NPT II 유전자가 도입된 것을 확인하였다. Particle bombardment 후 Agrobacterium과 공동배양 한 처리구가 Agrobacterium과 공동배양만 한 처리구보다 GUS발현 분석에 의한 형질전환 효율이 3배정도 더 높았다 형질전환 된 재분화 식물체를 얻기위해 다시 선발된 kanamycin저항성 캘러스는 1mg/L NAA와 1mg/L BAP가 포함된 재분화 배지에 옮겨져 4주 후 형질전환 된 소인경을 형성하였다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제26권1호
• /
• pp.21-26
• /
• 1999

쌍떡잎식물체 형질전환에 널리 쓰이는 Agrobacterium의 binary vector를 이용하여 왜화성을 나타내는 pGA643-rolC gene을 엽절편 transformation방법으로 petunia에 도입하였다. Petunia hybrida의 재분화에 있어 엽조직으로부터 식물체 재분화에 미치는 생장조절물질의 효과는 0.1mg/L NAA와 1.0mg/L BA의 조합에서 높았고 재분화된 식물체도 양호하였다. 식물체 형질전환 선발배지에 에틸렌 억제제인 AgNO$_3$와 KMnO$_4$의 첨가시 형질전환체 재분화율이 높게 나타났으며, AgNO$_3$에 비해 KMnO$_4$처리구에서 보다 많은 식물체 재분화율을 나타내었으나 AgNO$_3$와 KMnO$_4$의 고농도 첨가시 다소의 유리화 현상이 발생하였으므로 3mg/L KMnO$_4$ 첨가가 식물체 재분화에 적합한 것으로 생각된다. 항생제 200mg/L kanamycin, 500mg/L carbenicylin 과 1.0 mg/L BA, 0.1mg/L NAA가 첨가된 형질전환 선발배지에서 엽절편으로 부터 형질전환 된 것으로 추정되는 식물체들을 일차 선발하였고 기외로 이식한 후 genomic DNA를 분리하여 Southern blot analysis법으로 분석한 결과 외래 유전자가 식물체의 genomic DNA내로 삽입된 것을 확인할 수 있었다.

• KSBB Journal
• /
• 제7권3호
• /
• pp.191-200
• /
• 1992

토양 시료로부터A. tumefaciens를 분리 동정하고 이를 옥수수의 형질전환에 이용하기 위하여 binary vector를 이용하여 형질전환시킨 후 옥수수의 중배축 조직과 공존배양을 실시하였다. Schroth의 선택배지에서 선별된 colony들은 단일 형태를 나타내었다. 분리 균주는 해바라기 유식물의 잎조직에 종양을 형성하였으며, 거대 plasmid를 가지고 있었는데 이는 대조균주인 C58이나 Ach5의 plasmid와는 다른 종류였다. 분리균주들에 의해 형성된 tumor의 형태 및 균주의 생리, 생화학적 특성들에 의하여 공시균주를 A. tumefaciens biovar 1으로 동정하였으며 nopaline 형으로 추정하였다. 분리 균주중 AK204를 사용하여 옥수수 조직을 형질전환시키기 위하여 선택maker를 가지고 있는 binary vector(pGA642)를 균주내로 전이 시켰다. 이로 인하여 형질전환된 AK204를 옥수수 중배축 조직과 공존배양하므로서 옥수수 조직세포를 형질전환 시킨 결과, 1차적으로 Km에 저항성을 띠는 형질전환체를 선발할 수 있었으며, 그들의 가용성 단백질의 PAGE pattern이 변화되었음을 확인하였다.

• Plant Biotechnology Reports
• /
• 제4권1호
• /
• pp.37-48
• /
• 2010

[ ${\Delta}^1$ ]pyrroline-5-carboxylate synthetase (P5CS) is a proline biosynthetic pathway enzyme and is known for conferring enhanced salt and drought stress in transgenics carrying this gene in a variety of plant species; however, the wild-type P5CS is subjected to feedback control. Therefore, in the present study, we used a mutagenized version of this osmoregulatory gene-P5CSF129A, which is not subjected to feedback control, for producing transgenic indica rice plants of cultivar Karjat-3 via Agrobacterium tumefaciens. We have used two types of explants for this purpose, namely mature embryo-derived callus and shoot apices. Various parameters for transformation were optimized including antibiotic concentration for selection, duration of cocultivation, addition of phenolic compound, and bacterial culture density. The resultant primary transgenic plants showed more enhanced proline accumulation than their non-transformed counterparts. This proline level was particularly enhanced in the transgenic plants of next generation ($T_1$) under 150 mM NaCl stress. The higher proline level shown by transgenic plants was associated with better biomass production and growth performance under salt stress and lower extent of lipid peroxidation, indicating that overproduction of proline may have a role in counteracting the negative effect of salt stress and higher maintenance of cellular integrity and basic physiological processes under stress.