Shin, Hye Young;Kim, Gi Hoon;Kang, Sang Jae;Han, Jeung-Sul;Choi, Cheol
Journal of Plant Biotechnology
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제44권4호
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pp.388-393
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2017
We report an Agrobacterium-mediated transformation procedure optimized for 'Kyoho' that is a major table grapevine cultivar in Korea, and its transgenic plants with antifreeze protein gene of carrot (DcAFP). The full length of DcAFP coding region in accordance with the previous report was isolated from young leaves of carrot and recombined into a plant transformation vector. Ethylene inhibitors such as silver nitrate and aminoethoxyvinylglycin (AVG) supplemented in a co-cultivation medium distinctly increased frequency of shoot regeneration when explants were sub-cultured in a selection medium: particularly ten-fold higher in treatment with 0.1 mg/L AVG than one without ethylene inhibitor. Among various antibiotics and their concentrations, the combination of 150 mg/L cefotaxime plus 150 mg/L $Clavamox^{TM}$ was selected for elimination of Agrobacterium cells in addition to minimization of adverse effect on shoot regeneration, while 50 mg/L kanamycin monosulfate effectively suppressed regeneration of non-transgenic shoots. Applying the elucidated culture condition, we finally obtained a total of 5 transgenic 'Kyoho' plantlets with DcAFP, of which integration with the grapevine genome and transcription was confirmed by nucleic acid analyses.
전분박을 첨가한 왕겨및 볏짚의 산당화액을 이용하여 효모생육조건을 검토하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 왕겨와 볏짚에 전분박을 첨가하여 당화시킴으로써 당화액의 당농도가 각각 9.12%, 7.98%까지 증가되었다. 2. 산당화액을 중화할 때 사용한 중화제로서는 CaCO$_3$, Ca(OH)$_2$, NH$_4$OH순으로 효모생육이 좋았다. 3. 당화액을 기질로 하여 무기영양요구성을 검토한 결과 (NH$_4$)$_2$SO$_4$0.3%, $K_2$HPO$_4$0.4%, MgSO$_4$ㆍ7$H_2O$0.02%, NaCl 0.02%, CaCl$_2$0.02%를 가하였을 때 효모의 생육도가 가장 좋았다. 4. 전분박을 첨가한 왕겨와 볏짚의 당화액을 기질로 하여 효모를 배양하였을 때 48시간 이내에 각각 91.2% 90.8%의 당을 소화하였고 당에 대한 수율은 각각 46.5 %, 45.4%이었다.
피복자재별로 전광선투과율은 차이가 거의 없었으나, 물방울과 먼지의 부착량이 적은 J-2에서 시설 내 광투과율은 78.2%로 가장 높았다. 자외선 투과율이 완전히 차단된 필름은 J-2이었고, 나머지의 자외선 투과율은 $62{\sim}76%$ 정도이었다. 무가온 참외재배시기에 터널 안이 노지보다 기온은 $15{\sim}21^{\circ}C$, 지온은 $20{\sim}25^{\circ}C$ 정도 높았다. 피복자재별로 기온은 $6^{\circ}C$, 지온이 $5^{\circ}C$ 정도 차이가 나타났으며 기온과 지온 모두 J-2 에서 가장 높았다.
Due to recent interest of the consumers on safe farm products and the government's political support for eco-friendly agriculture, organic fruit production has been growing continuously. This research was conducted in order to study the effect of cover plants on soil microbial community on cover plants and establish an organic fruit cultivation method through choosing optimal cover plant. As a result of investigating soil microbial population density, the bacterial density in soil showed an increasing trend in June compared to April, and there was a decreasing trend in bacterial density of the soil in August compared to June. The density of actinomycetes in soil increased around 1.6 times in June compared to April when the soil was covered with hairy vetch. The increase of filamentous fungus in crimson clover group was 6.1 times higher in June compared to April and in hairy vetch group, the increase was 4.9 times higher in June compared to April. As a result of analyzing DNA extracted from the soil categorized by different types of cover plants using DGGE method, soil collected from April had higher number of bands detected from different locations according to different types of cover plants. Diversity of the bands from the soil collected from August showed higher range of reduction. As a result of analyzing soil microbial community by different period and the types of cover plants using Pyrosequencing method, microbes were detected in the order of Proteobacteria, Acidobacteria, Actinobacteria, Bacteroidetes, Chloroflexi, and Firmicutes. Distribution rate of Firmicutes increased in the soil collected in August compared to June and this was shown in all types of cover plants by twice the amount.
절간고구마 당화액을 탄소원으로하여 RNA를 다량 축적하는 효모를 선정한 결과 Cryptococcus laurentii가 가장 높은 균체량 및 RNA량을 나타내었다. 이 선정 균주에 대한 배양조건을 검사한 결과 최적 PH 6.0, 3$0^{\circ}C$, 48시간 통기 진탕배양하였을 때 가장 좋은 결과를 얻었다. 이러한 조건 하에서 배지조성을 변화시켜 RNA 함량과 균체증식량을 검토한 결과 (N $H_4$)$_2$S $O_4$ 0.4%, Peptone 0.6%. yeast extract 0.4%가 질소원으로 좋은 결과를 보였으며 K $H_2$P $O_4$의 최적농도는 0.5 %, M $n^{++}$ 은 0.1 %, $Co^{++}$은 0.001 %를 나타내었다. 또 비타민 요구성 실험에서 Ca-pantothenate를 400$\mu\textrm{g}$/$\ell$ 첨가하였을 때 가장 좋은 효과를 얻었으며 기본배지의 배양조건을 검토하여 얻은 최종배지를 비교해 본 결과 효모 균체당 RNA 함량이 12.9%~16.8%로 증가하였다.
Phenylalanine 생산시 tyrosine이 부생되지 않도록 tyrA유전자 발현이 낮은 여러 가지 온도조절형 plasmid를 제작하였으며, phenylalanine 생산균주인 대장균 AT2471$[tyrA^-,\;thi^-]$은 tyrosine 영양요구 변이균주이므로 생산배지에 tyro-sine 첨가없이 phenylalanine을 생산할 수 있도록 하기 위하여 tyrosine 복귀변이균주를 분리하여 phenylalanine 생산을 검토하였다. 2.5 l jar fermenter를 사용하여 tyrosine 첨가없이 phenylalanine 생산을 검토하여 대장균 AT2471/pSY146A, 대장균 AT2471 tyrosine 복귀변이균주 5/pSY111-14를 $39^{\circ}C$에서 55시간 배양한 결과 각각 12 g/l, 15 g/l를 생산하였다.
The cultivation of biomass crops is now global demand for decreasing emissions of carbon dioxide ($CO_2$) from fossil fuel. Miscanthus species have been studied as a suitable crop for biomass production, due to its characteristics of fast growth and high biomass. In Korea, Miscanthus species have gained wide attention as an option for biomass production alternative to fossil fuels, recently. New strain of giant Miscanthus has been developed and two large trial sites for the giant Miscanthus production were built in the lower reaches of the Geum River. To evaluate the ecological influence of the giant Miscanthus as an bioenergy crop for the future, we investigated the impact of the construction of the giant Miscanthus production fields on the biota and also compared it with biota in paddy fields near the study sites. The biota including plants, amphibians, reptiles, mammals, avifauna, insects, and bugs was investigated. The plant diversity of the giant Miscanthus production fields was poorer than the paddy fields because the high height of the giant Miscanthus might hinder the growth of other plants. However, the giant Miscanthus production fields serves habitat to animals, leading to rich diversity of animals including avifauna, insects, and bugs. The rich diversity of the animals in the giant Miscanthus production fields coincides with the fact that the giant Miscanthus was grown without any pesticide, herbicide, and fertilizer. This study showed that the giant Miscanthus can influence on biota and further long term study is needed to elucidate the interaction between the diversity of biota and the giant Miscanthus.
Agrobacterum tumefaciens-mediated transformation (ATMT) is becoming an effective system as an insertional mutagenesis tool in filamentous fungi. We developed and optimized ATMT for two Colletotrichum species, C. falcatum and C. acutatum, which are the causal agents of sugarcane red rot and pepper anthracnose, respectively. A. tumefaciens strain SK1044, carrying a hygromycin phosphotransferase gene (hph) and a green fluorescent protein (GFP) gene, was used to transform the conidia of these two Colletotrichum species. Transformation efficiency was correlated with co-cultivation time and bacterial cell concentration and was higher in C. falcatum than in C. acutatum. Southern blot analysis indicated that about 65% of the transformants had a single copy of the T-DNA in both C. falcatum and C. acutatum and that T-DNA integrated randomly in both fungal genomes. T-DNA insertions were identified in transformants through thermal asymmetrical interlaced PCR (TAIL-PCR) followed by sequencing. Our results suggested that ATMT can be used as a molecular tool to identify and characterize pathogenicity-related genes in these two economically important Colletotrichum species.
The use of polyethylene film has a problem such as increasing rural environmental contamination, collection costs and farmers' workload. The objective of this study was to evaluate bio-degradable films in terms of yield of maize and soil environment. Treatments were bio-degradable film A (BDF A), bio-degradable film B (BDF B), high density polyethylene (HDPE), and non-mulched (NM) soil. Daily mean values of soil temperature (10 cm depth) under BDF A, BDF B, and HDPE were higher than in NM soil by 2.2, 2.8, $3.1^{\circ}C$ respectively. In the mulching cultivation of maize, bio-degradable film began to degrade from 50~60days after the planting. The degradation was much progressed in the harvest time and almost decomposed in the following spring. The weight of ear of maize was not shown significantly by mulching treatments. There were little changes of soil chemical properties for the bio-degradable film mulching. After using bio-degradable films, the contents of biomass-C and dehydrogenase activity increased from 92 to $137{\sim}147mg\;kg^{-1}$, and from 87 to $123{\sim}168mg\;kg^{-1}$ respectively.
당근 진탕배양세포로부터 분리한 원형질체에 A.rhi-zogenes를 처리하여 bacteriad의 부착과 부착과정에 영향을 주는 여러 요인들을 조사하였다. 또한 당근뿌리 절편에 strain이 다른 bacteria와 heat-inactivated bacteria를 전처리한 후 A.rhizogenes strain A4를 접종하여 식물세포 표면에 있어서 bacterial specific receptor sites존재 유무를 살펴보았다. Bacteria의 부착은 pH 6.0, 24-35$^{\circ}C$ 조건하에서 120분동안 원형질체막에 유의적인 증가를 나타내었으며, 또한 세포벽합성에 따르는 bacteriaqnckr의 영향은 볼 수 없었다. Strain이 다른 bacteria나 heat-inactivated bacteria의 전처리에 의한 A..rhizogenes의 당근조직에서 hairy root형성 억제 현상은 식물세포 표면에 specific receptor sites가 존재 한다기보다는 부착에 있어서 전처리한 bacteria의 경쟁적 저해작용으로 형질전환이 다소 억제되는 것으로 사료되어졌다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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