• 미생물학회지
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• 제32권1호
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• pp.47-52
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• 1994

Campylobacter jejuni에 48${\circ}C$의 열충격을 30분간 주었을 때, HSP90, HSP66, HSP60의 열충격 단백질들이 합성되었고, 이 단백질들은 각각 E. coli의 hsp87, HSP66 (DnaK), HSP58(GroEL)에 상응하는 단백질들이었다. 여러가지의 제한효소로 처리한 C. jejuni의 chromosomal DNA에 E. coli의 groEL(4.0kb)을 probe로 사용하여 Southern hybridization한 결과, 이들과 상동성을 가지는 유전자들이 있음을 확인하였다. C. jejuni의 groEL 유전자를 pWE15 cosmid를 이용하여 recombinant plasmid pLC1을 만들고, 이를 E. coli B178 groEL44 ts mutant에 형질전환시켜 E. coli LC1을 얻었다. 이 pLC1에는 groEL 유전자가 존재하는 5.7kb인 insert DNA가 포함되어 있었고, 그로부터 subcloning한 pLC101에는 groEL을 포함하는 4.0kb의 DNA가 삽입되어 있었다. 이 recombinant plasmid들이 형질전환된 E. coli LC1과 LC101 균주에서는 C. jejuni의 GroEL 단백질이 과다 생산되었다. C. jejuni의 groEL이 cloning된 E. coli LC1은 42${\circ}C$에서의 생장능력이 회복되었고, ${\lambda}$ vir phage에 대한 감수성도 회복되는 등의 chaperon 효과가 입증되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권3호
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• pp.280-288
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• 1992

Serratia marcescens ATCC 21074 균주가 세포밖으로 분비하는 metalloprotease 유전자를 대장균으로 클로닝하고 그 발현을 살펴보았다 Serratia marcescens ATCC 21074 균주의 염색체 DNA를 제한효소 HindIII로 절단하고 아가로스 전기영동 후 32P로 표지된 합성 oligonucleotide를 사용하여 southern hybridization한 결과 4.0Kb의 DNA 절편에 metalloprotease가 존재함을 알 수 있었다. 4.0Kb 염색체 DNA 절ㅊ편을 분리하여 pUC19에 연결한 후 대장균으로 transformation하였다.

• BMB Reports
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• 제35권3호
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• pp.320-329
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• 2002

A gene, coined tay, for a thermostable DNA polymerase from the novel, extremely thermophilic bacterium Thermoanaerobacter yonseiensis was cloned and expressed in E. coli. Using a DNA polymerase homologous PCR product as a hybridization probe, tay was isolated and sequenced to consist of 2621 nucleotides that encode 872 amino acids. A database analysis showed that DNA polymerase, coined Tay, from T. yonseiensis shared a 39% to 47% identity in the amino acid sequence with those from other DNA polymerases. Tay was overexpressed in E. coli as a fusion protein with a poly-histidine tag at the C-terminus. It was purified by heat treatment, followed by a $Ni^{2+}$-chelate column. The molecular weight of purified Tay was approximately 97 kDa, as shown by SDS PAGE, and it showed high DNA polymerase activity and thermostability. However, it had no 3'$\rightarrow$5' exonuclease activity.

• 생명과학회지
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• 제20권12호
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• pp.1896-1901
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• 2010

본 연구는 가축생균제용 유산균을 Real-time PCR정량분석법을 이용하여 분석하였다. SYBR Green1 방법과 Probe 방법을 이용하여 표준곡선을 제작한 결과, SYBR Green1 방법에서는 Slope 값이 -3.346이었고, Y절편은 33.18, $R^2$ 값은 0.993으로 나타났으며, Probe 방법에서는 Slope값이 -3.321이었고, Y절편은 39.10, $R^2$ 값은 0.995로 나타나, 이를 이용한 표준곡선 제작이 가능함을 알 수 있었다. SYBR Green1 방법을 이용한 생균제의 Lactobacilli 정성 정량 분석결과 Real-time PCR값은 4.46~6.56 log copies로 나타났고, 생균수 측정 결과 값은 5.63~7.59 log CFU/g로 나타났으며, Probe 방법을 이용한 생균제의 Lactobacilli 정성 정량 분석결과에서는 Real-time PCR 값은 5.51~7.00 log copies로 나타났으며, 생균수 측정 결과 값은 5.63~7.59 log CFU/g로 나타났다. 본 연구에서 실시한 RT PCR법은 3~4일이 소요되는 기존의 배지법과 비교하여 24시간 이내에 신속하게 검출이 가능하다고 여겨지며, 또한 RT PCR을 이용한 분석방법에서도 dye 사용과 primer 사용에 따라 결과값이 차이가 나타났음을 확인할 수 있었으며, Probe 방법을 이용하여 실험 한 결과가 민감한 결과를 나타내었음을 확인 할 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권6호
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• pp.640-646
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• 1990

E.coli의 cytidine deaminase(cytidine/2'-deoxy-cytidine aminohydrolas` EC 3.5.4.5)를 코딩하는 cdd 유전자를 E.coli cdd- pyr- 결손 변이주를 cloning host로 하여 southern blotting과 colony hybridization을 통하여 클로닝하였다. cdd 유전자가 단편인, cdd 유전자의 transcription initiation 부위의 23개 nucleotide를 합성한 후 probe로 사용하여 Southern hybridization에 의해 회수된 cdd 유전자를 함유한 단편을 얻었으며, 이를 pBR322에 삽입한 후 형질전환하여 colony hybridization한 결과 cdd+ cell을 얻었다. 삽입된 DNA 단편의 size는 27kb이었으며 이를 결실 및 subcloning을 연속 수행한 결과 2.1kb의 SalI/ DraI fragment(pTK605)에 cdd 유전자가 location 되어 있음을 알게 되었다. Mini cell 실험결과 합성된 cytidine deaminase의 활성이 pBR322에서 증폭시킴으로서 37배 정도 배가되었으며, pBR322에 비해 pUC vector계에서 다시 활성이 7배 정도 증가됨을 알 수 있었다.

• Journal of Plant Biology
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• 제35권2호
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• pp.165-171
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• 1992

rbcL 유전자 발현조절에 관한 연구의 일환으로 Cp DNA로부터 분리한 rbcL 유전자를 클로닝하였다. 옥수수의 엽록체로부터 DNA를 분리한 후 제한효소 BamHI으로 절단하여 rbcL 유전자가 포함된 BamHI 9 절편을 pUC19에 클로닝하여 재조합 플라스미드 pRLYS1을 만들었다. 쌀의 rbcL 유전자 일부를 probe로 사용하여 pRLYS1과 Southern hybridization한 결과와 제한효소 BamHI, HindIII, 그리고 PstI으로 절단된 pRLYS1 절편의 전기영동 결과로부터 재조합 플라스미드의 내부에 완전한 rbcL 유전자의 존재를 확인하였고 삽입방향을 결정하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제5권5호
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• pp.305-308
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• 1995

From the plasmid library made from Sstl and San-digested genomic DNA of Streptomyces fradiae NRRL 2702, four positive clones were selected using an oligodeoxynucleotide probe from the N-terminal amino acid sequence of purified threonine dehydratase. The cloned gene for threonine dehydratase was a 2.0 kilo-base pair DNA fragment. The deduced amino acid sequence of PCR product (PCR245) was matched to that of the N-terminal part of threonine dehydratase from S. fradiae and this showed a high similarity to the threonine dehydratases of other organisms. This indicated that amino acid sequences of threonine dehydratases were highly conserved and the polypeptide product of the PCR245 was likely to be involved in the deamination of threonine.

• Journal of Ginseng Research
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• 제19권1호
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• pp.51-55
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• 1995

The DNA fragment containing ginseng ribulose-1,5-bisphosphate carboxytase/oxygenase large subunit(rbcL) gene was cloned from the ginseng chloroplast EcoRl library by colony lift hybridization with tobacco rbcL gene probe. From the screened clone, the DNA fragment containing ginseng rbcL gene was digested with several restriction enzyme and analyzed by Southern blot hybridization for the construction of restriction map. The ginseng rbcL gene fragment was subcloned in pBluescript II SK + vector and sequence analysis was performed. The nucleotide sequence of ginseng rbcL gene was compared with those of petunia, tobacco, alfalfa, rice and barley, which showed a homology of 93.1%, 95.2%, 90.5%, 85.5% and 84.3%, respectively.

• 농약과학회지
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• 제10권1호
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• pp.56-65
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• 2006

작물 근권 토양으로부터 분리한 5,000여 길항 균주로부터 Erwinia 및 Pseudomonas등의 세균과 Trichoderma, Colletotrichum 등 곰팡이의 성장을 동시에 억제하는 Bacillus sp. N 32 균주를 선발 동정 하였다. 특히 Bacillus sp. N32 균주는 고추 탄저병균인 Colletotrichum gloeosporioides에 대하여 열에 저항성이 있는 단백질과 열에 민감한 단백질의 2종류의 항균 단백질을 동시에 생산함을 단백질 침전과 활성 검정을 통하여 확인하였다. 이 항균 단백질들을 FPLC를 이용한 gel filtration chromatography방법으로 분리한 후 SDS-PAGE와 bioautography로 항균력을 확인하였다. 또한 이 항균 단백질의 유전자들을 선발하기 위하여 기존의 알려진 그람양성 세균의 대표적인 열 저항성 항균 펩타이드 생합성 유전자 서열을 primer로 이용한 PCR 방법으로 fengycin의 생합성 유전자 단편을 분리하고 이 PCR 산물을 이용하여 Bacillus sp. N32 균주의 cosmid library로부터 fengycin의 생합성 유전자 cluster중 일부를 분리하여 염기서열을 분석하였다. 또한 열에 민감한 항균 단백질 생산 유전자는 이 항균 단백질을 SDS-PAGE 및 electroblotting으로 분리한 뒤 N-terminal 부위의 15개의 아미노산 서열을 분석하고 이를 DNA 염기배열로 치환한 다음 probe로 이용하여 ${\lambda}-ZAP$ library로부터 항균 단백질 생산 유전자가 포함된 다수의 clone을 선발하였다.

• 미생물학회지
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• 제22권4호
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• pp.235-242
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• 1984

세포분열에 관여하는 유전자중의 하나인 유천자 sep-Penciillin binding protein 3의 유전자를 ${\lambda}607sep^{+2}$로 부터 Plasmid pBR 322에 재조합시켰다. 또한 sep유전자의 발현을 최대화하기 위해서 lac UV 5와 같은 강한 promoter룹 갖고 있는 plasmid pLJ 3에 sep유전자를 재조합시켰으며, sep유전자는 lactose promotor발현에 적절한 방향으로 위치함을 확인하였다. 새로 재조합된 plasmid들의 sep유전자 발현도를 조사하기 위해서 이판 plasmids를 포함하고 있는 세포내에서의 sep mRNA의 합성량이 측정되었다. sep mRNA의 합성량은 sep유전자가 pBR 322내에 있을때, plasmid가 없는 wild type E. coli C 600에 비해 약 25배가 증가하였고, Sep 유전자가 pLJ 3에 있을때, pBR 322내에 있을때 보다 약 50배 가 증가하였다.