• 한국미생물·생명공학회지
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• 제30권1호
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• pp.33-38
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• 2002

Lactobacillus plantarum 용균 효소를 생산하는 균주를 배양하여 생산된 효소를 정제한 결과 비활성도가 5.8 units/mg protein 이었고 정제도 8.3배, 수율은 30%이었다. 정제효소의 분자량은 gel filtration과 SDS-polyacrylamide gel eletrophoresis를 이용하여 측정한 결과 60,000 kDa 이었다. 용균 효소의 최적 반응 시간은 20분이었으며 최적 온도는 4$0^{\circ}C$, 최적 pH는 3.0이었다. 온도 안정성은 각 온도에서 30분간 처리하였을 때 $30^{\circ}C$까지는 안정하였으나 4$0^{\circ}C$에서는 80% 활성을 나타내었다. 효소의 pH 안정성은 실온에서 1시간 처리하였을 때 pH 4~7에서 안정성을 나타내었다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제56권3호
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• pp.171-177
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• 2013

Efficient extraction of total proteins from soil microorganisms is tedious because of small quantity. In this regard, an improved method for extraction of whole cell proteins is developed from soil microorganisms, Saccharomyces cerevisiae and Pichia pastoris. of which the cell wall are very strong. Pretreatment with NH4OH prior to the final extraction using NaOH/SDS was tried under the basis that ammonium ion was possible to enhance the permeability and/or to weaken the yeast cell walls. The pre-treatment of yeast cells with NH4OH drastically enhanced the protein extraction when it was compared with control (without NH4OH pre-treatment). At the pre-treatment of 0.04 N NH4OH at pH 9.0, about 3 fold of proteins was obtained from p. pastoris. Ammonium hydroxide appears to penetrate into the yeast cell walls more readily at basic pH. The effect of NH4OH pretreatment was pH dependent. The methods developed in this experiment might be applicable for an effective extraction of yeast proteins for the purpose of biochemical studies, especially proteomic analysis.

• 한국식품영양과학회지
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• 제14권4호
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• pp.401-408
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• 1985

효모세포벽 용해효소의 일종인 Zymolyase$(endo-{\beta}-1\;,3-glucanase)$와 더불어 Arthrobacter luteus로 부터 생산되었고, 또한 Zymolyase의 조효소중에서 발견된 바 있는 염기성 AL-protease의 효모세포벽 용해작용을 S. sake의 생세포와 그 세포벽 표품(標品)을 사용하여 조사하였다. AL-protease의 효모 생세포에 대한 용해활성은 그 단독작용만으로는 지극히 미약하였으나, Zymolyase와의 복합작용에 의해서 용해활성은 고도로 상승하였다. 효모생세포를 AL-protease와 Zymolyase로써 단계적인 처리를 할 경우, 효모세포는 AL-protease로 전처리된 뒤에 Zymolyase로 처리되는 처리 순서에 한하여 효과적으로 용해되었다. 이러한 AL-protease의 촉진적 작용은 AL-protease처럼 염기성이고 serine protease로 알려진 몇가지 시판의 효소들 중에서는 발견되지 않았으며, 또한 AL-protease의 이러한 작용은 실험에 사용된 효모들의 배양조건 및 균종에 따라서 커다란 영향을 받는 것으로 밝혀졌다. AL-protease는 효모세포벽 표품(標品)으로부터 일정량의 peptide와 상당량의 당을 유리시키고 있으나, 그 세포벽을 66% 이상은 용해시키지 못하였다. 반면에, Zymolyase는 그 단독작용으로도 효모세포벽을 거의 완전히 용해시킬 수 있었다. 이상의 실험결과를 기초로 하여, S. sake 세포벽의 용해에 있어서 AL-protease의 효소적 작용은, 먼저 AL-protease가 mannan과 단백질로 구성되는 세포벽 표층부에 결합하고, 이어서 그들의 구조를 변화시킴으로써, Zymolyase를 세포벽의 외부로 부터 알카리 불용성 glucan으로 구축되고 있는 세포벽 내부의 골격구조로까지의 침투를 촉진시키는 것으로 추론되었다.

• Applied Microscopy
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• 제14권2호
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• pp.15-28
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• 1984

The endosperm cells and the umbiliform layer of ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer) seed are studied with light and electron microscope. Differentiated mitochondria, ER cisternae, proplastids and ribosomes are characteristically observed in the endosperm cells of matured seed. The cell inclusions contain the protein bodies and the spherosomes. Protein body contains, in proteinaceous matrix, globoids and crystalloids. Particularly the crystalloids have the lattice structure, and the formation of globoids is closely related with ER. Umbiliform layer has the positive reaction on alcian blue (pH 2.5) and the metachromasis on the toluidine blue. The umbiliform layer is formed by autolysis of endosperm cells, and composed of the deformated cell wall and the lipoprotein bodies. Particularly a part of the lipoprotein body and the fibrilar network structure have the positive reaction on acid phosphatase.

• 미생물학회지
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• 제50권1호
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• pp.73-83
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• 2014

단백질이 풍부한 식품을 고온 하에서 조리하는 과정 중에 주로 발생되는 돌연변이원 heterocyclic amines (HCAs)에 대한 유산균의 결합력 및 제거능을 조사하였다. 당 발효능 및 16S rRNA 염기서열 분석을 통해 동정된 19종의 유산균 중 Lactobacillus acidophilus D11, Enterococcus faecium D12, Pediococcus acidilactici D19, L. acidophilus D38, Lactobacillus sakei D44, Enterococcus faecalis D66 및 Lactobacillus plantarum D70의 세포이나 배양 상등액은 3-amino-1,4-dimethyl-5H-pyrido[4,3-b]indole (Trp-P-1)과 3-amino-1-methyl-5Hpyrido[4,3-b] indole (Trp-P-2)에 의한 Salmonella typhimurium TA98 및 TA100의 돌연변이 유발을 억제할 수 있었다. HCAs에 대한 유산균 세포의 결합력은 cell wall, exopolysaccharide 및 peptidoglycan 보다 높게 나타났다. 한편, 이들의 결합력은 단백질 분해효소, 가열, sodium metaperiodate 및 산 처리에 의해 유의하게 감소되었으므로 세포벽에 존재하는 당이나 단백질 성분이 이들 HCAs을 결합시키는데 중요한 역할을 하는 것으로 확인되었다. 또한 E. faecium D12, L. acidophilus D38 및 E. faecalis D66의 결합력은 SDS나 금속이온에 의해 감소되었으므로 이들세포와 돌연변이원 사이에는 이온 결합이나 소수성 결합이 작용하는 것으로 추정되었다. 한편, HCAs 결합력이 높은 L. acidophilus D38과 L. plantarum D70은 장관 상피세포에 대한 부착력이 낮으므로 돌연변이원을 세포에 결합시켜 체외로 배출함으로써 독성물질을 제거하는데 효과적인 것으로 확인되었다.

• Animal Bioscience
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• 제35권9호
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• pp.1400-1407
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• 2022

Objective: This research determined the chemical composition and the apparent and standardized ileal digestibility (AID and SID) of crude protein (CP) and amino acids (AA) in whole yeast and autolyzed yeast derived from sugarcane ethanol production fed to growing pigs. Methods: Six growing pigs were randomly allocated in a replicated 3×3 Latin square design with 3 diets and 3 periods of 7 days each, resulting in a total of 6 experimental replications. Three assay diets were formulated using whole yeast, autolyzed yeast, or soybean meal as the sole sources of dietary CP and AA. Pigs were allowed to adapt to the assay diets for 5 days. Thereafter, ileal digesta samples were collected continuously for 8 hours on days 6 and 7. Results: There was no difference in the chemical composition between whole yeast and autolyzed yeast, but whole yeast had low digestibility of CP and AA due to the presence of a rigid cell wall. As conducting autolysis can induce cell wall damage, the AID and SID of CP and AA were greater in autolyzed yeast than in whole yeast. Conclusion: The information obtained on the SID of CP and AA in both yeast products can be used for the accurate estimation of the bioavailability of CP and AA in feed formulations. The yeast products derived from sugarcane ethanol production are an alternative protein source in pig diets.

• Applied Biological Chemistry
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• 제39권5호
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• pp.379-383
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• 1996

조생종 쌀인 오대벼 품종을 대상으로 종자의 배유세포에 있는 전분복합체와 단백질체의 외부형태 및 미세 구조의 특징을 광학현미경과 전자현미경으로 관찰하였다. 배유세포는 긴 막대모양으로 세로 단면이 장방형 또는 마름모형을 하고 있고, 세포벽은 $0.5\;{\mu}m$의 두께로 균질한 막상 구조물로 이루어져 있다. 또한, 세포내에는 구형 또는 타원형의 전분복합체가 치밀하게 채워져 있으며, 직경이 $18{\sim}25\;{\mu}m$로 다양한 크기로 존재하였다. 전분복합체는 12면체 또는 14면체의 중앙 전분과립을 중심으로 약 $5\;{\mu}m$ 크기의 전분과립들이 동심원상으로 2 내지 3층으로 형성되어 있다. 배유세포에서 단백질체는 호분층에서 보다 아주 드물게 관찰되었지만, 전분복합체의 주변에 인립하여 산재하고 있다. 단백질체는 직경이 약 $3\;{\mu}m$로 구형 또는 난원형의 형태를 하고 있으며 미세구조적으로 중심부는 전자밀도가 높게, 한계막의 주변부는 비교적 전자밀도가 낮게 관찰되었다.

• 대한화학회지
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• 제47권4호
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• pp.363-369
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• 2003

효모를 최적 배양조건에서 키운후 $1.14{\times}10_-3 M$의 셀레늄을 배양액에 가하여 24시간 배양한 후 효모를 얻는다. 효모의 건조중량에 대하여 약 $0.1{\%}$(w/w)이상의 셀레늄을 함유하는 고농도의 셀레늄-효모를 얻었고 세포벽에 부착된 무기셀레늄은 세척후 MBRT과정으로 확인하였다. MBRT에서 15분 이상 푸른색이 지속되는 결과로 무기이온의 세포벽 흡착이 거의 없음을 확인하였다. 셀레늄이 함유된 효모를 초음파로 분해한 후 $80{\%}(NH_4)_2SO_4$ 용액을 이용하여 단백질을 부분 정제하였고 ICP-AES로 측정된 효모내의 셀레늄 농도와 비교하였을 때 약 $60.6{\%}$의 셀레늄이 단백질 내에 존재함을 확인하였다. 전기이동으로 단백질을 분리하여 확인한 결과 많은 양이 발현된 단백질 띠에서는 상대적으로 셀레늄의 농도가 높았다. 그중 47 kDa 단백질의 경우 69.5 ${\mu}$g Se/g의 농도로 가장 많은 함량을 보였다. 이 단백질을 PVDF 막에 electroblotting하여 분리하였고 이를 산으로 가수분해하여 얻어진 아미노산들을 PITC와 반응시켜 유도체를 얻었다. 아미노산유도체들을 HPLC로 분리 확인한 결과 셀레노메티오닌의 상대적인 비율이 총아미노산의 $2{\%}$로 얻어졌다. 이러한 셀레늄은 단백질과 킬레이트의 형태로 존재하는 것이 아니고 대부분이 셀레늄의 유기체인 셀레노메티오닌으로 효모 내에서 생합성 된다고 볼 수 있다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제26권3호
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• pp.610-617
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• 2016

Candidiasis has posed a serious health risk to immunocompromised patients owing to the increase in resistant yeasts, and Candida albicans is the prominent pathogen of fungal infections. Therefore, there is a critical need for the discovery and characterization of novel antifungals to treat infections caused by C. albicans. In the present study, we report on the antifungal activity of the ethanol extract from Salvia miltiorrhiza against C. albicans and the possible mode of action against C. albicans. The increase in the membrane permeability was evidenced by changes in diphenylhexatriene binding and release of both 260-nm-absorbing intracellular materials and protein. In addition, inhibition of cell wall synthesis was demonstrated by the enhanced minimal inhibitory concentration in the presence of sorbitol and reduced (1,3)-β-D-glucan synthase activity. The above evidence supports the notion that S. miltiorrhiza has antifungal activity against C. albicans by the synergistic activity of targeting the cell membrane and cell wall. These findings indicate that S. miltiorrhiza displays effective activity against C. albicans in vitro and merits further investigation to treat C. albicans-associated infections.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제10권6호
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• pp.576-581
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• 2005

Phytase improves the bioavailability of phytate phosphorus in plant foods to humans and animals, and reduces the phosphorus pollution of animal waste. We have engineered the cell surface of the yeast. Saccharomyces cerevisiae, by anchoring active fungal phytase on its cell wall, in order to apply it as a dietary supplement containing bioconversional functions in animal foods and a whole cell bio-catalyst for the treatment of waste. The phytase gene (phyA) of Aspergillus niger with a signal peptide of rice amylase 1A (Ramy1A) was fused with the gene encoding the C-terminal half (320 amino acid residues from the C-terminus) of yeast ${\alpha}-agglutinin$, a protein which is involved in mating and is covalently anchored to the cell wall. The resulting fusion construct was introduced into S. cerevisiae and expressed under the control of the constitutive glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase (GPD) promoter. Phytase plate assay revealed that the surface-engineered cell exhibited a catalytically active opaque zone which was restricted to the margin of the colony. Additionally, the phytase activity was detected in the cell fraction, but was not detected in the culture medium when it was grown in liquid. These results indicate that the phytase was successfully anchored to the cell surface of yeast and was displayed as its active form. The amount of recombinant phytase on the surface of yeast cells was estimated to be 16,000 molecules per cell.