Insulin-like growth factors (IGFs) are mitogenic peptide hormones that regulate embryonic development, postnatal growth and cellular differentiation in vertebrates IGFs are initially translated as pre-pro-peptides and then proteolytically processed to yield the mature IGFs and E-peptides. Like the C-peptide of pro-insulin, the E-peptides of pro-IGFs are generally believed to possess little or no biological activity other than their potential roles in the biosynthesis of the mature IGFs. Like human IGF-1, previous studies in our laboratory showed that the recombinant trout Ea4-peptide of pro-IGF-1 exhibited a dose-dependent mitegenic activity in cultured BALB/3T3 fibroblasts and other non-oncogenic transformed cells (Tian et al., 1999) We have also shown by in vitro and in vivo studies that Ea4-peptide possessed novel anti-tumor activities (Chen et al., 2002, Kuo and Chen, 2002; Kuo and Chen 2003). Recent results of studies conducted in chorionicallantoic membrane of developing chicken embryos revealed that Ea4-peptide of trout pro-IGF-1 also possesses a dose-dependent antiangiogenic activity. Together these results raised the question whether Ea4-peptide of trout pro-IGF-1 may affect heart and blood vessel development and hematopoiesis in fish embryos. (중략)
The experiments reported here take advantage of the large number of in vitro matured and in vitro fertilized(IVM /IVF) bovine oocytes which can be produced, permitting the design of controlled experiments to establish a simple defined medium for the study of early embryo requirements. A total of 1,386 IVM /IVF oocytes were used to compare a simple defined medium(KSOM) with more complex culture conditions used successfully for culture of bovine embryos but do not permit study of specific requirements. All experiments were extensively replicated factorials. In Experiment 1, KSOM was superior to Menezo B$_2$ medium in producing morulae plus blastocysts from IVM /IVF oocytes(33 vs 20%, P<0.()5). The yield of morulae plus blastocysts with KSOM was 22% and with BRLC added was 30%. In Experiment 2, (a 2x2 factorial of KSOM with or without BRLC and 0, 1 ng /ml of platelet derived growth factor, PDGF) more morulae plus blastocysts (40%) were produced in KSOM-BRLC co-culture containing 1 ng /ml PDGF than in the control KSOM(12%). In Experiment 3, there was no dose response when 0, 1 and 5 ng /ml of PDGF were added. The results with simple defined KSOM medium are sufficiently promising to indicate that specific requirements of the embryo may be examined in future studies with KSOM as a base.
A flux determination methodology has been built which enables to develop constrained stoichiometric relationships and metabolic balances. The analysis differs from those developed for anaerobic growth conditions in that cell mass formation is a significant sink for carbon. When combined with experimental measurements, a determined system of equations results yielded tricarboxylic acid (TCA) cycle and glycolytic fluxes. The methodology was implemented to determine the fluxes of E. coli B/r and K12, and it was found that as the growth rate in a glucose minimal medium increased, the cells became increasing glycolytic and the TCA fluxes either leveled off or declined. The pattern identified for the TCA fluxes corresponded to ${\alpha}$-ketoglutarate dehydrogenase's induction-repression pattern, thereby suggesting that the induction-repression of the enzyme could result in significant flux changes. When the minimum flux solution was contrasted to the glycolytic and TCA fluxes determined, two observations were made. First, the minimum flux could provide the cell's biosynthetic ATP requirements. Second, at a high growth rate in a glucose medium, the excess glycolytic flux exceeded that of the TCA cycle, which appeared to more closely match the biosynthetic needs.
알콜 발효 증진을 위해 5L 배양조에서 혐기적으로 회분 배양 시 건지황 착즙액을 농도별로 첨가하며 알콜 발효 및 균체 생육을 측정한 결과 균체 생육 및 알콜 생산 수율 모두 착즙액 첨가량이 증가함에 따라 일반 발효에 비해 증가했으며, 30% (v/v) 첨가 시 11.8 (g/L)의 최대 균체양, 0.092 (%/hr)의 최대 알콜 생산성과 같은 최대치를 나타냈다. 하지만 40% 이상 첨가 시는 균체 생육 및 알콜 생산 두 경우 다 감소하는 경향을 보였으며 50% 에서는 심각한 생육 저해 현상이 나타났다. 또한 알콜 생산성 증진을 위해 30% 착즙액을 첨가해 유가식 배양을 실시 한 결과 회분 배양보다 월등히 높은 균체 생육 및 알콜 생산성을 보였다. 이 같은 생산성은 일반 알콜 발효에서 얻을 수 있는 수율보다 약 30-40% 이상 높은 것으로 건지황 착즙액이 알콜 발효에 직접적인 영향을 주는 것이 입증되었다. 이는 알콜 발효 시 건지황의 유용 성분의 활용과 함께 알콜 생산 수율 증진에도 이용이 가능한 지황의 이중적 활용도가 있음을 입증한 것으로 평가된다.
본 연구에서는 강제성 에탄자화균인 M. trichas P parium OB3b를 메탄융기질에서 배양하면서 여러 환 경요인 벚 배지요인의 영향을 조사하고 최적 배양조 건을 구하였다. 또한 배양특성을 메탄기질 성장의 경우와 비교하였다. 본 연구에서 얻어진 결과를 요 약하면 다음과 같다. 1. 최대비성장속도는 메탄 기질 성장시 ${\mu}=$0.08hr^{-1}$ 인데 반해 메탄올 기질 성장시에는 ${\mu}=$0.20hr^{-1}$로 2배 이상의 증가를 보였다. 메탄융 최 척농도는 0.5% (v/v)이였다. 2. 질소원으로는 메탄올 기질에서는 암모니아가 질산염보다 우수한 반면 에탄 기질에서는 질산염이 우수하였다. 3. 질소원에 대한 균체수율 $(Y_{X/N})$ 은 탄소원의 종 류와 관계없이 모두 7.14g dry cells/g N으로 통일 하게 냐타났다. 탄소원(MeOH)에 대한 균체수율 $(Y_{X/S})$은 질소원으로 암모니아를 사용한 경우 0 0.8g dry cells/g MeOH이고 질산염을 사용한 경우 는 0.64g dry cells/g MeOH로 암모니아의 경우가 약 20% 가량 높았다. 4. 배양옹도는 최적옹도가 $30^{\circ}C$ 인데 메탄올의 농 도가 높은 경우 고온에셔 에탄융의 독성 증가에 따 른 비성장속도의 큰 감소를 관찰할 수 있었다. 5. pH는 6.5~8.0 범위에 완만한 최척값을 보여 주었다. 6. 인산염의 농도가 증가함에 따라 메탄올탈수소 효소(MDH)의 활성은 급격히 감소하였으나 에탄융 기질에서 균체의 비성장속도는 인산염농도 60mM까 지 거의 일정하였다. 이 결과는 MDH의 활성이 균 체의 최척성장에 필요한 활성의 거의 2배 이상 수준 으로 유지되고 있음을 보여준다. 7. 생물반응기 배양에 서는 pH조절과 메탄올의 첨 가로 최종 균체농도는 2.10mg dry cells/ml까지 볼 수있었다.
부피질호르몬의 제조의 중요한 전구체인 11alpha-hydroxyprogesterone을 Rhizopus nigricans를 이용하여 고농도의 progesterone으로부터 고수율로 생산하기 위한 연구를 수행하였다. 생물전환수율을 최대로 하는 배지조성은 포도당과 casamino acid의 비율이 2:1인 것으로 관찰되었다. Progesterone은 Tween 80 용액에 분산시켜서 종균배양 후 12 시간 정도 지나서 첨가하였을 때 전환수율이 높았다. Progesterone의 농도가 증가함에 따라 생산성이 증가하였고 Progesterone이 20g/$\ell$일 경우 전환수율은 약 70정도 였다.
For the analysis of fermentation characteristics and productivity of plasmid coded product, car-boxymethylcellulase in a recombinant DNA cell fermentation system, batch and continuous fermentations were carried out using a Bacillus megaterium ATCC 14945 transformed with a plasmid, pCK 108 haboring carboxymethyl cellulase gene. The effects of carbon and nitrogen sources and of temperature and pH on cell growth, product yield, plasmid stability, specific plasmid contents of cell, and gene expression efficiency were carefully studied. These experimental results will be discussed in some details.
A simple, but effective on-line method for estimating the mycelial cell mass concentration from agitation speed data, a most readily-available process variable, has been developed for DO-stat cultures of Agaricus blazei. The dynamic change of dissolved oxygen concentration (DOC) in the initial transient period and the change in yield were considered in the development of the estimation algorithm or estimator. Parameters in the estimation algorithm were calculated from the agitation speed data at 20% of DOC. The proposed estimator could accurately predict the cell mass concentration regardless of DOC levels in the tested range of $10{\sim}40%$, showing a good extrapolation capability.
Thalicrtrum rugosum 식물세포 현탁배양에 의한 berberine 생산에 미치는 여러 가지 종류의 elicitor들의 영향에 관해 연구 하였다. 효모 유래의 elicitor, 15가지의 서로 다른 종류의 무생물 종류 elicitor, 3가지 곰팡이로부터 얻은 elicitor 들을 처리하여 세포의 생장 및 berberine 생산에 미치는 영향을 비교 분석해 본 결과, 이들 elicitor들은 T. rugosum에 의한 berberine 생산을 크게 증대시키지 못함을 확인하였다.
The effect of culture medium copper availability on the specific growth rate(${\mu}$) and carbon conversion efficiency (CCE) was sutided for an obligatory methanotroph Methylosinus trichosporium OB3b under various combinations of carbon and nitrogen sources. Methane or methanol was used as a carbon source, and nitrate or ammonium was used as a nitrogen source. Medium copper availability determined the intracellular location or kind of methane monooxygenase (MMO), cell-membrane (particulate or pMMO) when copper was present and cytoplasm (soluble or sMMO) when copper was deficient. When methane was used as a carbon source, copper-containing medium exhibited higher ${\mu}$ and CCE than copper-free medium regardless of the kind of nitrogen source. When methanol was used as a carbon source, however, the effect of copper disappeared. Ammonium gave the higher ${\mu}$ and CCE than nitrate for both methane and methanol. Those observation suggest that there exist an important difference in energy utilization efficiency for methane assimilation between sMMO and pMMO.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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