Saccharomyces cerevisiae를 배양하여 ceramide를 생산하였다. 각기 다른 growth phase에서의 ceramide 생산량을 비교 실험하였다. Ceramide는 ELSD가 장착된 HPLC를 통하여 분석하였으며 stationary phase에 접어든 후 12시간 후에 회수, 추출된 양(2.01 mg ceramide/g cell)이 최대인 것으로 나타났다.
SUC2 유전자를 가진 재조합 Saccharomyces cerevisiae의 invertase 생산성을 향상시키기 위하여 균체 생육과 유전자 발현에 미치는 아미노산과 용존산소 농도의 영향을 연구하였다. 균체 생육과 invertase 발현에 적합한 leucine과 histidine의 최적 첨가량은 탄소원인 포도당에 대한 비율로서 나타내어 0.03g/g glucose와 0.04g/g glucose였다. 회분배양에서는 통기량이 적을수록 invertase 비활성이 증가하였다. 희석율 0.09h에서 용존산소농도를 조절한 연속배양에서는 요존산소농도가 감소함에 따라 유전자 발현이 잘되어 5 포화 이하일때 invertase 비활성이 급격히 증가하여 통기를 하지 않은 조건에서 125.54KU/g cell의 최고 비활성을 얻었다.
Formic acid is a representative carboxylic acid that inhibits bacterial cell growth, and thus it is generally considered to constitute an obstacle to the reuse of renewable biomass. In this study, Saccharomyces cerevisiae was used to elucidate changes in protein levels in response to formic acid. Fifty-seven differentially expressed proteins in response to formic acid toxicity in S. cerevisiae were identified by 1D-PAGE and nano-liquid chromatography-tandem mass spectrometry (nano-LC-MS/MS) analyses. Among the 28 proteins increased in expression, four were involved in the MAP kinase signal transduction pathway and one in the oxidative stress-induced pathway. A dramatic increase was observed in the number of ion transporters related to maintenance of acid-base balance. Regarding the 29 proteins decreased in expression, they were found to participate in transcription during cell division. Heat shock protein 70, glutathione reductase, and cytochrome c oxidase were measured by LC-MS/MS analysis. Taken together, the inhibitory action of formic acid on S. cerevisiae cells might disrupt the acidbase balance across the cell membrane and generate oxidative stress, leading to repressed cell division and death. S. cerevisiae also induced expression of ion transporters, which may be required to maintain the acid-base balance when yeast cells are exposed to high concentrations of formic acid in growth medium.
Inulinase of Kluyveromyces marxianus origin was produced by recombinant yeast Saccharomyces cerevisiae under the control of GAL1 promoter, to examine the expression and localization of inulinase in a repressed(galactose-free) or derepressed(galactose-containinga) medium. The inulinase gene(INU1A) was constitutively expressed at 6.7 units/ml in a repressed medium. When the cell started to utilize galactose in a derepressed medium, the INU1A gene began to be expressed, and the final expression level reached about 45 units/ml. According to be the nondenaturingPAGE analysis, inulinase produced by S. cerevisiae was found to be less glycosylated than the bakers yeast invertase. In addition, its glycosylation pattern was less heterogeneous than the K. marxianus inulinase. The supplementation of inulin or raffinose into the derepressed medium increased the cell growth rate, while the expression of INU1A was repressed. Regardless of the carbon sources examined, most of inulinase activity (more than 98%) was found in the extracellular medium, indicating excellent secretion efficiency.
Twenty crossbred calves of $88{\pm}5.5kg$ initial live weight and 3-4 month of age were divided into two groups and fed wheat straw and concentrate to support a 500 g daily gain in body weight. Calves in the experimental group (YC) were given a daily dose of 10 ml yeast cell suspension (YC) containing live cells $(5{\times}10^9 cells/ml)$ of Saccharomyces cerevisiae ITCCF 2094. After a growth study of 122 days metabolism trials were conducted. The calves in the YC group recorded a daily weigt gain of $492{\pm}27.8g$ as compared to $476{\pm}20.1g$ in control group. There were no significant differences in feed intake, nutrient digestibility, feed/gain ratio and nitrogen retention between the YC supplemented and control groups.
The extracts from Agastache rugosa O. Kuntze, their chloroform and hexane fractions, and estragole identified from hexane fraction were tested to investigate the effects on the growth and metabolic activities of several true fungi. The fungi used were: Aspergillus oryzae KFCC 890, Aspergillus niger KCCM 11240, Saccharomyces cerevisiae IAM 4597, Saccharomyces ellipsoideus PNU 2215. The growth of S. Cerevisiae by treatment of water extract(1%), hexane fraction (0.05%), and estragole (0.05%) were inhibited 93%, 50%, and 33% respectively, and S. ellipsoideus was also inhibited markedly with delaying the alg phase maximum 12 hrs. The growth of A. oryzae was inhibited by treatment of extracts and fractions. The echanol production by S. cerevisiae was increased more than two times in the highest value around 42 hrs incubation by water extract, but chloroform fraction inhibited its production. The glucoamylase actibities by A. niger were strongly inhibited by hexane and chloroform fractions (0.05%). The invertase activity by S. cerevisiae using estragole (0.05%) reached to 57.5% of control group. S. cerevisiae treated with the estragole was damaged the cell wall and cell membrane, leaked the protoplasm, and observed broken pieces of cell.
KGD1 유전자는 비허용온도에서 세포벽에 결함을 보이는 Saccharomyces cerevisiae LP0353 균주의 베타-1,3-글루칸 합성 효소의 활성을 회복시키는 유전자로 분리되었다. $\alpha$-ketoglutarate dehydrogenase를 암호화하는 KGD1 유전자의 효모의 세포벽 합성과 연관된 기능을 분석하기 위하여 유전자 파괴를 시도하였다. KGD1돌연변이는 생장속도가 감소하고, 키틴 합성 효소들의 활성이 증가하였으며, 세포벽 구성 당류의 함량에 변화를 보였다. 또한 Calcofluor white과 Nikkomycin Z 등과 같은 세포벽 합성 저해물질에 대해 감수성 변화를 나타냈다. 이러한 결과들은 KGD1이 효모의 세포벽 특히 베타-1,6-글루칸과 키틴의 생합성에 영향을 주고 있음을 시사한다.
Saccharomyces cerevisiae STV89와 Kluyveromyces fragilis CBS397의 에탄올 내성에 대한 산소와 불포화 지방산의 첨가 영향을 연구하기 위한 알콜발효를 수행하였다. 실험결과 통기에 의하여 세포성장과 에탄올 생성속도가 촉진되어으며, 세포와 에탄올 생성량도 크게 증가되었다. 특히 균주의 비교에서 cell의 최대 비성장 속도와 에탄올 생성 속도가 S.cerevisiae의 경우 1.7배와 2.3배 증가하였지만, K. fragilis인 경우 6.4배와 4.4배가 증가하여 K. FRAGILIS가 에탄올 생성 및 cellgrowth를 위하여 S. cerevisiae보다 산소가 더 필수적인 요인으로 작용한다. 또한 S. cerevisiae와 K. fragilis 모두 ergosterol, linoleic acid 및 oleic acid의 첨가에 의하여 cell growth와 에탄올 형성이 향상되었다. 따라서 산소와 불포화 지방산은 효모의 에탄올 내성 증가에 중요한 요인으로 작용함을 알 수 있었다.
Bioconversion of timosaponin A-III (TA-III), one of the major steroidal saponins isolated from the rhizomes of Anemarrhenae asphodeloides Bunge (Liliaceae), was investigated in Saccharomyces cerevisiae. Five bioconversion products, denoted compounds 2-6, were obtained. Biotransformation metabolite 2 was a stereoisomer of TAIII with a specific isotype F-ring and ${\beta}$-ranged $CH_3$-21, which rarely occurs in nature. The structure of 2 was elucidated by extensive spectroscopic analysis (H-H COSY, HSQC, HMBC), as well as by high-resolution mass spectral analysis. The growth inhibitory activity of compounds 1-6 was assayed against four human cancer cell lines, HepG2, H-1299, HT-29, and HCT-116. Compounds 1 and 2 obviously inhibited the growth of the four types of cancer cells with $IC_{50}$ values being less than 19${\mu}M$. A structure-activity relationship is discussed, and the spirostane-ring F in compounds 1 and 2 appears to be the critical bioactive moiety for the cell growth inhibitory property.
중금속 결합 단백질인 metallothionein (MT)를 발현하는 CUP1 유전자를 다중으로 함유하는 재조합 Saccharomyces cerevisiae의 균체성장과 중금속 제거특성을 조사하였다. CUP1 유전자를 다중으로 함유하는 재조합 효모는 중금속을 포함한 배지에서의 균체성장과 중금속 흡착능이 중금속에 대하여 내성을 가지고 있는 야생효모나 숙주세포에 비하여 우수하였다. 서로 다른 플라스미드를 함유하는 중금속을 함유하는 배지에서의 균체성장과 중금속 흡착능의 차이는 중금속에 대한 내성과 중금속 흡착에 MT 단백질의 발현 수준이 중요한 영향을 미치는 것으로 추정되었다. 구리를 함유하지 않고 고농도의 아연과 망간을 함유하는 배지에서 재조합 효모는 높은 균체 농도와 중금속 제거능을 나타내었는데, 이는 MT 단백질을 발현하는 CUP1 promoter가 아연과 망간에 의해서도 발현이 유도된다는 것을 알 수 있었다. MT 단백질을 효율적으로 발현하여 재조합 효모에 의한 중금속 흡착을 최대화 할 수 있는 최적의 구리농도는 0.31 mM로 결정되었으며, 비이온계 계면활성제인 Triton X-100은 재조합 효모의 균체성장과 중금속 흡착을 증가시켰지만, 대사 저해제는 균체성장과 중금속 흡착을 모두 저해하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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