• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제18권1호
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• pp.35-40
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• 1991

To find out the suitable method for blastomeres fusion of mouse 2-cell embryo using electric stimuli, these studies were carried out with various voltages (1.0 KV, 1.2 KV, 1.5 KV, 1.7 KV and 2.0KV), pulse duration times($50{\mu}\;sec$, $75/{\mu}\;sec$, $100{\mu}\;sec$) and different fusion solutions. In addition, the fused embryos were cultured for 72-80hr to observe their subsequent development. These results were summarized as follows: 1. The proportion of the fused embryos were 50.8%(34/67), 60.7%(34/56), 70.6%(48/68), 66.7% (48/72) and 85.3% (58/68) after stimuli of 1.0KV, 1.2KV, 1.5KV, 1.7KV and 2.0KV for $100{\mu}\;sec$ with 2 times, and the electric stimulation at 2.0KV(85.3%) was the most effective voltage on the blastomere fusion. 2. For in vitro development, blastocysts of the fused embryos were cultured for 72-80hrs in $M_{16}$ medium. The group(52.1%) treated with 1.5KV for $100{\mu}\;sec$ with 2 times showd higher development rates than those any other group. However, these results were not corresponded to those of the rates of blastomere fusion. 3. There were no significant differences among the rates of blastomeres fusion to 50(70.6%), 75(71.9%), and 100(78.0%) ${\mu}sec$ stimulation at 1.5KV with two times. However, the development rates of the fused embryo in vitro were 52.1%(25/48), 28.3%(13/46) and 9.4%(3/32) at the above conditions, and the development rates of fused embryo increased as the pulse duration times increased. 4. The rates of the blastomeres fusion were 38.9% (28/72) or 70.6% (48/68) in electrolyte (PBS) or non-electrolyte(0.3M mannitol) solution. The development rates of the fused embryo were 32.1% (9/28) or 52.1%(25/48) in the above fusion solutions, and non-electrolyte-treated group showed higher development rates of embryo than that of electrolyte-treated group.

• 생명과학회지
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• 제29권3호
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• pp.376-381
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• 2019

본 연구는 에탄올내성, 내열성, ${\beta}-glucanase$ 활성 및 xylose 대사가 가능한 새로운 생물시스템을 육종하기 위해 원형질체융합(protoplast fusion)이라는 방법을 사용하여 S. cerevisiae BYK-F11 균주와 P. $stipitis{\Delta}ura$ 균주와의 genome shuffling을 시도하였다. P. $stipitis{\Delta}ura$ 균주는 URA3 유전자를 결실시켜 uracil 영양요구주로 구축되었다. Protoplast fusion을 통해 몇몇의 융합체가 선별되었고, 두 모균주인 BYK-F11 균주와 P. $stipitis{\Delta}ura$ 균주의 핵형(karyotype)를 모두 가지는 BYKPS-F8 균주가 22개의 융합체중에서 최종 선정되었다. 이어 ${\beta}-glucanase$ 활성, xylose 이용능, 에탄올내성, 내열성 및 에탄올생산성에 대한 다양한 표현형이 조사되었다. BYKPS-F8 균주는 모균주인 BYK-F11 균주가 가지는 ${\beta}-glucanase$ 활성을 가지게 되었고, P. $stipitis{\Delta}ura$ 균주가 가지는 xylose 이용능도 모균주보다 1.2배 증가되었음을 확인할 수 있었다. BYKPS-F8 균주는 $40^{\circ}C$에서 내열성을 보였으며, 8% 에탄올이 첨가된 배지에서 모균주에 비해 에탄올 내성이 증가되었음을 확인 할 수 있었다. 20 g/l의 xylose가 함유된 배지에서 72시간 배양에 의해 약 7.5 g/l의 에탄올을 생산할 수 있었으며, 260시간의 장기간의 배양에도 BYKPS-F8균주에 도입한 다형질이 안정적으로 유지됨을 확인하였다. 따라서, 본 연구에서 사용된 균주 육종방법을 통해 다형질을 가진 다른 속간의 균주 융합 및 산업적으로 유용한 생물시스템의 육종이 가능함을 확인하였다.

• 미생물과산업
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• 제19권4호
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• pp.14-26
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• 1993

Optimizing protein production in recombinant E. coli strains involves manipulation of genetic and environmental factors. In designing a production system, attention must be paid to gene expression efficiency, culture conditions and bioreactor configuration. Although not much emphasis was given to the physiology of host strains in this review, an understanding of the relationship between the physiology of host cell growth and the overproduction of a cloned gene protein is of primary importance to the improvement of the recombinant fermentation processes. Sometimes it is desirable to make use of gene fusion systems, e.g. protein A, polypeptide, gutathione-S-transferase, or pneumococcal murein hydrolase fusion, to facilitate protein purification.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제3권2호
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• pp.82-86
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• 1998

The maltose binding protein (MBP) fusion protein system is a versatile tool to express and isolate recombinant proteins in E. coli. In this system, MBP fusion proteins are efficiently isolated from whole cell lysate using amylose conjugated agarose beads and then eluted by competition with free maltose. Since MBP is a rather large molecule (∼42 kDa), for further experiments, the MBP part is usually proteolytically cleaved from the fusion protein and subsequently removed by ion-exchange chromatography or rebinding to amylose columns after washing out excess and MBP-bound maltose. In the present study, we have developed an improved method for the removal of cleaved MBP, which is advantageous over conventional methods. In this method, factor Xa cleaved MBP fusion proteins were incubated with Sepharose beads conjugated with MBP specific monoclonal antibodies and then precipitated buy centrifugation, resulting in highly purified proteins in the supernatant.

• KSBB Journal
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• 제5권3호
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• pp.255-261
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• 1990

Astaxanthin을 생산하는 효모 Phaffia rhodozyma로부터 제조된 상보적 돌연변이 균주간의 세포융합을 통하여 astaxanthin을 대량 생산하는 균주를 얻고자 시도하였다. 이들의 원형질체 융합빈도는 $1.3$\times$10^-^5-6.0$\times$10^-^5$이었고 DNA함량, 핵염색, UV조사에 대한 생존력 비교 그리고 형질분리분석등으로 핵융합을 확인하였다. 융합체 중 F1은 야생형의 모 균주와 비교했을때 astaxanthin생성량이 약 3배 증가하였다.

• 미생물학회지
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• 제22권3호
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• pp.175-181
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• 1984

In order to develope a protoplast fusion system for industrial coryneform bacteria, the optimum conditions for the formation and regeneration of progoplast were examined for Brevibacterium flavum and Corynebacterium glutamicum and the protoplast fusion was performed. For the formation of the protoplast of B. flavum and C. glutamicum, the optimum time for penicillin G. treatment to obtain protoplast was mid-exponential growth phase ($O.D_{580}=0.6-0.8,\;8.0{\times}10^7-1.0{\times}10^8cell/ml$). At the optimum conditions (0.3units/ml penicillin G and $400{\mu}g/ml$ lysoyme for treatement), frequencies of protoplast formation and protoplast regeneration were 99% and 25%, respectively. Protoplast regeneration frequency was highest under the optimum conditions for the protoplast formation. Addition of 25mM $Mg^{2+}\;and\;50mM\;Ca^{2+}$ to the regeneration medium further increased the regeneration frequencies. The protoplast fusion frequencies of B. flavum and C. glutamicum in intraspecies fusion were $1.0{\times}10^{-8}\;and\;7.8{\times}10^{-4}$, of the regenerated protoplast respectively, when 33% of PEG (polythylene glycol) 6,000 was used as the fusing agent.

• 한국동물학회지
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• 제36권3호
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• pp.433-438
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• 1993

본 연구를 통해서 근세포 융합과정에서 신호 전달물질의 가능성이 제기되고 있는 세포내 cGMP peak가 guanylate cyclase activity의 변화와 관련이 있으며, guanylate cyclase는 L-arginine: NO synthase에 의해서 촉진될 것임을 입증할 수 있는 간접적 증거를 제시한다. 즉, SNP는 근세포의 융합과 guanylate cyclase activity를 아울러 증가시키며, L-arginine: NO synthase inhibitor인 L-NG-monomethyl arginine은 biochemical differentiation에는 영향을 주지 않고 근세포 융합만을 억제한다. 이러한 결과들과 muthylene blue가 근세포의 융합만을 억제하면서도 biochemical differentiation에는 영향을 주지 않으며 guanylate cyclase activity를 억제하는 사실들을 종합해서 생각할 때, 근세포 융합에서 cGMP peak가 guanylate cyclase activity의 활성화와 관련이 있으며, L-arginine: NO synthase가 $Ca^2$+ influx와 guanylate cyclase 사이를 매개할 가능성을 암시한다.

• 한국동물학회지
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• 제38권4호
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• pp.483-489
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• 1995

많은 세포와 조직에서 분화 조절물질로 알려져 있는 비타민 A의 대사산물인 rectinoic acid(RA)가 배양 계배 근원세포의 성장과 분화에 미치는 영향을 조사하였다. RA가 처리된 세포는 그 농도가 증가함에 따라 융합 억제 효과도 증가함을 보였고, 배양액으로부터 RA를 제거해 주면 근원세포의 융합이 재개되는 것으로 보아, RA는 근원세포의 융합을 가역적으로 억제함을 알 수 있었다. 그러나 이미 최종 분화 단계에 들어선 세포에서는 융합 억제 효과를 보이지 않아, RA의 효과는 분화 단계에 따라 특이적으로 작용함을 보여준다. 융합 억제 효과에도 불구하고, RA는 근원세포의 융합 전단계인 방추형으로 신장하는 것과 그들이 가상의 축을 따라 배열하는 데는 영향을 주지 않았다. 또한 세포의 증식과 creatine kimase, tropomyosin과 같은 근특이 단백질의 축적에도 큰 영향을 주지 않았다. 한편, 근원세포는 융합하기 전에 필수적으로 fibronectin의 감소를 억제함을 알 수 있었다. 이상의 결과로 RA는 배양 근원세포의 융합만을 특이하게 억제하는 물질이며, 그 작용은 fibronectin의 감소를 방해하는 것과 밀접한 관계가 있는 것으로 사료된다.

• KSBB Journal
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• 제19권6호
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• pp.415-420
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• 2004

전 세계적으로 암의 발병률의 증가하고 있고 또한 그 수는 해마다 증가하는 실정이다. 암은 성장양상에 따라 악성종양과 양성종양으로 나뉘는데 암으로 구분되는 악성종양을 치료하기 위한 여러 가지 치료법들이 시행되고 또 개발되고 있다. 그중에서 dendritic cells (DCs)는 인체 내 면역반응을 이용하여 암을 치료하는 방법으로 적응면역에 관여하는 cytotoxic T cell (CTL)에 항원을 제시하여 CTL로 하여금 종양세포를 직접적으로 공격하도록 도움을 주는 역할을 한다. 그러나 여기에는 여러 가지 단점이 있다. 이 단점을 보완하기 위한 새로운 방법으로 artificial antigen-presenting cell (aAPC)을 이용한 치료법이 개발되고 있다. 가용성의 human leukocyte antigen-immunoglobulin fusion protein (HLA-Ig)를 기초한 aAPC은 DCs의 단점을 보완한 항원제시세포로써 DCs보다 더욱 효과적으로 CTL반응을 유도해 낼 것으로 기대한다. 본 총설에서는 이 DCs의 역할과 이들을 이용한 암 치료법에 대해서 논하고 그 개발 가능성에 대해서 알아보도록 하겠다.

• Animal cells and systems
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• 제1권3호
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• pp.491-496
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• 1997

When olfactory placodes are transplanted at stages 23/24 from Xenopus laevis to Xenopus borealis hosts of the same age, it is possible to distinguish the cell populations of the host and donor due to the peculiar nuclear Q bands specific to X. borealis. I have replaced the eye anlage in each of a number of X. borealis with the transplanted olfactory placode of an individual X. laevis, or vice versa. In most instances, the placode of the donor fuses with that of the host. When fusion occurs, but not when the host and donor orqans grow separately, the cells of the donor were replaced gradually and according to a characteristic pattern by cells of the host. The basal cells of the donor were the first to be replaced, followed by the more matured cells of the sensory epithelium. This cellular substitution, proceeding in an orderly fashion from bottom to upper layers of the epithelium, depends on the fusion of the two organs. This observation suggests intercellular contacts in the mitotic zone of the two organs favor the host's cells over those of the donor.