This study was performed to confirm the optimal extraction method for antimicrobial peptides from the Hard-shelled mussel. Extractions were performed with two processes including 1% HAc/boiling and 1% HAc/non-boiling methods and used extracts for the comparison of the antimicrobial activity, protease stability, action mechanism, AU-PAGE (acid-urea PAGE), and HPLC chromatograms. 1% HAc/boiling extract showed potent antibacterial activities both against Gram-positive and negative bacterium but 1% HAc/non-boiling extract showed antibacterial activity only against Gram-positive bacteria. Treatment of 1% HAc/boiling extract with proteases retained almost antibacterial activity against B. subtilis, but abolished significant antibacterial activity against E. coli D31. Only 1% HAc/boiling extract showed two discrete clearing antibacterial zones including slow migrating and rapid migrating zones. Both extracts showed strong DNA-binding ability but did not show bacterial membrane permeabilizing ability. In comparison of the chromatogram obtained from C18 or cation-exchange HPLC, the eluted peaks from 1% HAc/boiling extract showed high hydrophobic property or absorbance compared to 1% HAc/non-boiling extract, respectively. The concentration of the purified antimicrobial peptide was also higher in 1% HAc/boiling extract than in 1% HAc/non-boiling extract. Our results suggest that the effective extraction condition for antimicrobial peptides from marine invertebrate is boiling process in a weak acetic acid solution (1%).
이온 농도 분극 현상은 전기투석, 전기화학 전지에서 일어나는 기초 이동 현상일 뿐만 아니라, 생체 물질 전처리용 농축 장치의 핵심 기작으로 활용된다. 외부 인가 전압에 의해 발생한 이온 농도 분극 현상은 분석 물질의 농축에 필요한 국소적으로 증폭된 전기장을 통해 물질의 농축을 가능케 한다. 그러나 기존의 농축 기작은 농축의 평형 지점이 불분명하며, 농축 플러그의 유체역학적 불안정성의 두가지 문제점을 가지고 있다. 본 연구에서는, 이온 농도 분극 기반의 농축 기작의 한계점을 해결하기 위해 막다른 미세유로와 양이온 교환막을 사용한 농축 방법을 연구하였다. 막다른 미세유로의 공간 제약적 구조를 통해 유체역학적 안정성을 확보할 수 있으며, 분석 물질의 농축 지점이 이온 공핍 영역의 충격 전단과 일치함을 수치적으로 확인하였다. 또한 농축 공정의 핵심 인자로써 인가 전압과 미세유로의 체적 전하 농도를 변화시켜가며, 농축 물질의 전기동역학적 거동을 연구하였다. 본 연구의 결과는 현장 진단 검사(point-of-care)와 같은 초단시간의 농축을 필요로 하는 미세유체역학 장치에 유효한 기작으로 사용될 수 있을 것이다.
The purpose of this study was to develop paclitaxel-loaded poly(lactide-co-glycolide) (PLGA) nanoparticles coated with cationic SM5-1 single-chain antibody (scFv) containing a polylysine (SMFv-polylys). SM5-1 scFv (SMFv) is derived from SM5-1 monoclonal antibody, which binds to a 230 kDa membrane protein specifically expressed on melanoma, hepatocellular carcinoma and breast cancer cells. SMFv-polylys was expressed in Escherichia coli and purified by cation-exchange chromatography. Purified SMFv-polylys was fixed to paclitaxel-loaded PLGA nanoparticles to form paclitaxel-loaded PLGA nanoparticles coated with SMFv-polylys (Ptx-NP-S). Ptx-NP-S was shown to retain the specific antigen-binding affinity of SMFv-polylys to SM5-1 binding protein-positive Ch-hep-3 cells. Finally, the cytotoxicity of Ptx-NP-S was evaluated by a non-radioactive cell proliferation assay. It was demonstrated that Ptx-NP-S had significantly enhanced in vitro cytotoxicity against Ch-hep-3 cells as compared with non-targeted paclitaxel-loaded PLGA nanoparticles. In conclusion, our results suggest that cationic SMFv-polylys has been successfully generated and may be used as targeted ligand for preparing cancer-targeted nanoparticles.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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