This study was carried out to map Bphl and bph2 gene in Mudgo and Sangju13 (Oryza sativa L.) respectively conferring resistance to brown plan-thopper (BPH) and to establish the marker-assisted selection (MAS) system. Bulked seedling (grown for 20 days) test was conducted with the 73 F4 lines derived from a cross between Nagdongbyeo and Mudgo for Bphl and with 53 BC3F5 lines derived from the Milyang95/Sangju13 cross for bph2. Bph1 was mapped between RG413 and RG901 on chromo-some 12 at a distance of 7.5 cM from RG413 and 8.4 cM from RG90l. A recessive gene bph2 was located near RZ76 on chromosome 12 at a distance of 14.4 cM. Bphl and bph2 were linked to each other with a distance of about 30 cM. An RFLP marker, RG413 linked to Bphl, was converted to an STS marker to facilitate the marker-assisted selection. BPH resistant genotypes could be selected with 92% accuracy in a population derived from a line of NM47-B-B.
The brown planthopper (BPH) is a major insect pest in rice, and damages these plants by sucking phloem-sap and transmitting viral diseases. Many BPH resistance genes have been identified in indica varieties and wild rice accessions, but none has yet been cloned. In the present study we report fine mapping of the region containing the Bph1 locus, which enabled us to perform marker-aided selection (MAS). We used 273 F8 recombinant inbred lines (RILs) derived from a cross between Cheongcheongbyeo, an indica type variety harboring Bph1 from Mudgo, and Hwayeongbyeo, a BPH susceptible japonica variety. By random amplification of polymorphic DNA (RAPD) analysis using 656 random 10-mer primers, three RAPD markers (OPH09, OPA10 and OPA15) linked to Bph1 were identified and converted to SCAR (sequence characterized amplified region) markers. These markers were found to be contained in two BAC clones derived from chromosome 12: OPH09 on OSJNBa0011B18, and both OPA10 and OPA15 on OSJNBa0040E10. By sequence analysis of ten additional BAC clones evenly distributed between OSJNBa0011B18 and OSJNBa0040E10, we developed 15 STS markers. Of these, pBPH4 and pBPH14 flanked Bph1 at distances of 0.2 cM and 0.8 cM, respectively. The STS markers pBPH9, pBPH19, pBPH20, and pBPH21 co-segregated with Bph1. These markers were shown to be very useful for marker-assisted selection (MAS) in breeding populations of 32 F6 RILs from a cross between Andabyeo and IR71190, and 32 F5 RILs from a cross between Andabyeo and Suwon452.
Biphenyl dioxygenase (BPDO), which catalyzes the first step in the bacterial degradation of biphenyl and polychlorinated biphenyls, was characterized in Pseudomonas sp. B4. The bphA locus containing the four structural genes encoding BPDO were cloned and sequenced. A regulatory gene as well as a putative regulatory sequence were identified upstream of this locus. A transposase-like gene was found within a 1-kb region further upstream, thereby suggesting that the bphA locus may be carried on a transposable element. The three components of the BPDO enzyme have been separately overexpressed and purified from E. coli. The ferredoxin and terminal dioxygenase components showed biochemical properties comparable to those of two previously characterized BPDOs, whereas the ferredoxin reductase exhibited an unusually high lability. The substrate selectivity of BPDO was examined in vivo using resting cell assays performed with mixtures of selected polychlorinated biphenyls. The results indicated that para-substituted congeners were the preferred substrates. In vitro studies were carried out on a BPDO complex where the reductase from strain B4 we replaced by the more stable isoform from Comamonas testosteroni B-356. The BPDO enzyme had a specific activity of $0.26{\pm}0.02 {\mu}mol {min^-1}{mg^-1}\;of\;ISP_{BPH}$ with biphenyl as the substrate. The 2,3-, 4,4'-, and 2,4,4'-chlorobiphenyls were converted to single dihydrodiols, while 2,4'-dichlorobiphenyl gave rise to two dihydrodiols. The current data also indicated that 2,4,4'-trichlorobiphenyl was a better substrate than the 4,4'-dichlorinated congener.
Objective : Benign prostatic hyperplasia(BPH) is one of the most common diseased among elderly men. BPH can be treated with alpha-1 adrenergic blocker or $5{\alpha}$-reductase inhibitor(Finasteride) that reduces serum dihydrotestosterone(DHT). Phellodendri Cortex Ex has been broad studied on its chemical components, pharmacological activity, and clinical effects on anti-inflammation, anti-allergy, anti-tumor, immunity, antibacteria and other bioactivities. In this study, we investigated the therapeutic effects and action mechanism of Phellodendri Cortex Ex with a BPH induced by castration and testosterone treatment. Methods : Sprague-Dawley rats were treated with testosterone after castration for induction of experimental benign prostatic hyperplasia, which is similar to human benign prostatic hyperplasia in histopathological profiles. Phellodendri Cortex as an experimental specimen, and Finasteride as a positive control, were administered orally. The prostates were evaluated by histopathological changes, and the expression of $5{\alpha}$-reductase genes. Results : While prostates of control rats revealed severe acinar gland atrophy and stromal proliferation, the rats treated with Phellodendri Cortex Ex showed a diminished range of the tissue damage. In the reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) of $5{\alpha}$-reductase genes, Phellodendri Cortex inhibited the expression of $5{\alpha}$-reductase genes. Conclusions : These findings suggest that Phellodendri Cortex Ex may protect the glandular epithelial cells and also inhibit stromal proliferation in association with the suppression of $5{\alpha}$-reductase. From these results, we suggest that Phellodendri Cortex Ex could be a useful agent for treating the benign prostatic hyperplasia.
The brown planthopper, N. lugens (Stal), has become a serious pest of rice in tropical Asia during the last decade. At high pest density, its feeding damage causes 'hopperburn' or complete wilting and drying of the rice plant. It also transmits grassy and ragged stunt virus diseases. The estimated losses caused by the pest in tropical Asia exceed $US\$300$ millions. While cultivation of resistant rice varieties has proved to be highly effective against the pest, their long-term stability is threatened because of the evolution of prolific biotypes which can destroy these varieties. At present, identification of biotypes is based principally on the differential reactions of host rice varieties to the pest and on host-mediated behavioral and physiological responses of the pest. Recent findings of morphological differences in adult rostrum, legs, and antennae, body parts that possess receptors for host plant location and discrimination, and cytological differences in N. lugens populations maintained as stock cultures strongly complement other biotype studies. So far, three N. lugens biotypes have been identified in the Philippines. Biotype I can survive on and damage varieties that do not carry and genes for resistance, while Biotype 2 survives on resistant varieties carrying Bph 1 gene and Biotype 3 on varieties carrying gene bph 2. However, none of these biotypes can survive on varieties with genes Bph 3 or bph 4. Several varieties which are resistant in the Philippines are susceptible in India and Sri Lanka as the South Asian biotypes of N. lugens are more virulent than Southeast Asian biotypes. To monitor the pest biotypes in different geographical regions and to identify new sources of resistance, an International Brown Planthopper Nursery has been established in many cooperating countries. The evolution of biotypes is an exceedingly complex process which is governed by the interactions of genetic and biological factors of the pest populations and the genetic makeup of the cultivated varieties. While the strategy for sequential release of varieties with major resistance genes has been fairly successful so far, the monegenic resistance of these varieties makes them vulnerable to the development of the pest biotypes. Therefore, present breeding endeavors envisage utilizing both major and minor resistance genes for effective control of the pest.
자연계로부터 4-chlorobiphenyl (4CB) 을 분해하는 P08, P20, 027 그리고 P1242 균주를 불리하였다. 이들 분해 균주들의 4CB 분해 과정을 UV-spectrophotometry 방법으로 분석한 결과, 4-CB 로 부터 2-hydroxy-6-oxo-6-(4'-chlorophenyl)hexa-2, 4-dienoic acid 와 4-chlorobenzoate(4CBA) 가 생성되었다. 따라서 분해균주들은 공통적으로 meta-cleavage pathway에 의하여 4CB 를 분해하는 것으로 확인되었다. 그러나 DJ-12, P08 그리고 P27 균주는 4CBA 를 계속 분해하여 4-hydroxybenzoate 를 생성하였으나, P20 과 P1242 균주들은 4CBA 를 더이상 분해하지 못 하였다. 각 분해 균주에서 cbp 유전자군의 상동성을 분석하기 위하여 P. pseudoalcaligenes KF707 의 bphABC 유전자군을 DNA probe 로 이용하여 Southern hybridization 을 실시한 결과, DJ-12, P08 그리고 P27 균주들은 XhoI 에 의한 2.2kb 와 1.8 kb, 그리고 EcoRI 에 의한 11 kb 의 genomic DNA 의 절편에서 hybridization 이 일어났다. 따라서 본 연구에서 분리한 4CB 분해 균주들의 cbp 유전자군은 분해경로 및 bph 유전자군과의 상동성에 의거하여 부 group 으로 구분되었다.
본 연구는 전립선암세포주인 LNCaP 세포주와 테스토스테론으로 유도된 전립선비대 백서모델에서 복분자 추출물의 전립선비대 억제 효과를 조사하였다. 첫째, 전립선암 세포주(LNCaP)에서 복분자 미숙과 추출물의 안드로겐 관련 전립선비대 유전자 억제 효과를 조사한 결과 미숙과 50% 에탄올 추출물은 안드로겐 수용체(AR)뿐만 아니라 전립선특이항원(PSA)과 5-알파 환원 효소 type 2(5AR2)의 발현을 가장 높게 억제하였다. 또한 LNCaP 세포에 DHT로 안드로겐 관련 유전자를 유도한 후 복분자 미숙과 50% 에탄올 추출물을 처리한 결과 AR과 PSA mRNA의 발현이 억제됨을 확인하였다. 둘째, 테스토스테론을 이용하여 전립선비대를 유도한 동물모델에서 복분자 미숙과 50% 에탄올 추출물을 6주간 투여한 후 전립선비대 개선 효과를 조사한 결과, 전립선비대유발군에 복분자 미숙과 추출물을 투여한 군에서 전립선 무게, 전립선 소포의 상피세포 두께 및 면적이 감소함을 확인할 수 있었고, 전립선비대 유발 호르몬인 DHT level이 감소함을 확인할 수 있었다.
Benign prostatic hyperplasia (BPH) is one of the common disease in elderly men. Recently old-age population is increased and we are growing more and more interested in clinical importance of BPH. In this study, the effect of PLX, which was the mixture of tomato extract (including 2% of lycopene) and chitooligosaccharide, on prostatic cancer cell and testosterone-induced BPH in adult rats of the Sprague Dawley strain was determined. The cell viability was evaluated by MTT method using L929 and LNCaP cell line, pretreated with various concentrations of PLX. The expression of prostatic specific antigen (PSA) and 5${\alpha$}$-reductase genes were evaluated by realtime PCR using LNCaP cell line and compared various concentrations of PLX with 50 ${\mu}$M of finasteride. An experimental prostatic hyperplasia was induced in male Sprague Dawley rats by giving testosterone for 8 weeks. After 2 weeks from start of giving testosterone, PLX and finasteride were administered orally once a day. The results were analyzed with prostate weight per body weight at 8 weeks. Cell viability of L929 cell line decreased specifically at the concentration of 2000 ${\mu}$g/mf of PLX. The cytotoxicity of PLX to the LNCaP cell line was shown at above 500 ${\mu}$g/ml of PLX. The inhibitory effect of PLX to the expression of PSA and 5${\alpha$}$-reductase genes in LNCaP cell line increased with the concentration of PLX. In vivo study, the results of PLX and finasteride administered group were 3.75${\pm}$0.60 and 3.49${\pm}$0.49 prostate weight ${\times}10^3$/body weight, which were lower than the result of BPH induced group (4.74${\pm}$0.58). These results suggested that PLX may be an effective material in BPH by having the role of the 5a-reductase inhibitor.
벼멸구 저항성 유전자의 mapping, 벼멸구 저항성 관련 QTL 분석, 주요 농업형질과 벼멸구 저항성과의 관계 분석 등에 관한 연구를 수행 하여 얻은 결과는 다음과 같다. 벼멸구 저항성을 가진 통일형 벼인 '삼강'과 자포니카형 벼인 '낙동'을 교배하여 양성된 $F_1$의 약을 배양하여 육성된 120 DH 계통을 유전자 지도 작성을 위한 mapping 재료로 이용 하였다. Maker 검정에서 양친에 다양성을 나타낸 SSR 73, STS 89개 등 총 162개의 marker를 이용하여 전체 길이가 1,884 cM이고 평균 marker간 거리가 11.6 cM인 연관지도를 작성하였다. 유전자지도 작성에 이용된 120 DH 계통에 대한 벼멸구 저항성 정도를 조사하여 저항성 관련 QTL을 분석한 바, 3번, 6번, 7번, 8번 그리고 12번 염색체에서 1개씩 총 5개의 QTL을 확인하고 이들을 qBPR3, qBPR6, qBPR7, qBPR8, qBPR12로 명명하였다. 간장, 수장, 수수 및 출수일수에 대한 QTL을 분석하여, 총8개의 QTL이 7개의 염색체에 위치하는 것으로 확인되었다. 벼멸구 저항성과 주요 농업형질관련 QTL과의 연관관계를 분석한 바, 3번 염색체 상의 벼멸구 저항성 QTL(qBPR3)이 간장 및 수수 관련 QTL(qCL3, qNP6)과 연관되어 있었으며, 7번 염색체 상의 qBPR7은 분상질립 관련 QTL qPGC7.1과 qPWBP7.2과 그리고 8번 염색체상의 벼멸구 저항성 QTL 역시 간장관련 QTL(qCL8)과 연관되어 있는 것으로 나타났다.
The homology among the genes coding for degradation of bipheny(BP) and 4-chlorobiphenyl(4CB) was comparatively analyzed by Southern hybridization in several BP/4CB degrading bacterial strains. As the hybridization results of their genomic DNAs with pcbABCD as the DNA probe, the group of Pseudomonas sp. DJ-12. P08 and P27 strain was separated by the group of P20 and P1242 strains. The P. pseudoalcaligenes KF707 showed the hybidization signal which was homologous to the group of DJ-12, but they had different restriction endonuclease sites. The pcbAB genes in pCUl recombinant plasmid from Pseudomonas sp. DJ-12 appeared to be homologous to pchAB genes in pKTF20 cloned from P. pseudoalcaligenes KF707, but the C genes in both strains were not homologous. The bphABC in pKTF20 showed the signals homologous to the cbp ACB in pAW6194 cloned from P. putida OU83, but homologous signal was not found botween the pcbABCD genes in pCUl and the cbpADCB genes in pAW6194 recombbinant plasmid.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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