For the purpose of acquiring microbial agents that can be utilized to biologically control the major airborne diseases to apple trees, such as canker(Botryosphaeria dothidea), bitter rot(Glomerella cingulata), alternaria leaf spot(Alternaria mali), root rot(rosellinia necatrix), canker(Valsa ceratosperma) and gray mold rot(Botrytis cinerea), the effective microorgaisms were isolated, tested for antagonistic activity to the pathogens causing major diseases to apple trees and identifed. Screening of more than 5,000 species of microorganisms collected in nature for them antagonistic action to the pathogens causing 5 major diseases to apple trees resulted in selection of effective species. Out of the 11 species, one species designated as CAP134 demonstrated outstanding activity. The bacterial strain, CAP134 exerted antagonistic efficiency of 57% on an isolated strain and 40% on a donated strain of Botryosphaeria dothidea., 52% on an isolated strain and 46% on a purchased strain of Alternaria mali, 60% on Valsa ceratosperma 25% on Glomerella cingulata, and 64% Rosellinia necatrix. The CAP134 was identified as a bacterial strain to Bacillus subtilis ATCC 6633 based on morephology, culture conditions, and physio-biochemical characteristics.
Kim, Ki-Wook;Bae, Yun-Ui;Yoo, Ju-Soon;Cho, Su-Dong;Moon, Ja-Young;Kim, Dong-Wan;Jeong, Yong-Kee;Joo, Woo-Hong
한국생물공학회:학술대회논문집
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한국생물공학회 2003년도 생물공학의 동향(XIII)
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pp.415-419
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2003
One strain was isolated from wilted chestnut tree and identified as Helicosporium nizamabadense. Also, the strain was evaluated for biocontrol potentials against phytopathogens. Autoclaved fraction of the isolate also showed complete growth inhibition of the turfgrass large patch pathogen, Rhizoctonia. solani AG2-2 and plant pathogen, Botrytis cinerea. Culture extracts of Helicosporium nizamabadense were purified by Thin Layer Chromatography. The several fractions were analyzed by GC-MS, and NMR etc. Antifungal activities were presumably showed more than 5 fractions against the pathogens. Among them, the most effective antifungal fraction was identified as 2-Methylresocinol using GC-MS, and NMR. These results suggest that the 2-Methylresocinol may be useful for biochemicals.
More than 1200 microorganisms were isolated from soil samples collected from various sources and localities. Among the isolates, 2 actinomyces (TH-04 and BA313) and 1 Bacillus sp. (CJ3) were selected as antagonists to pepper anthracnose fungus Colletotrichum gloeosporioides. These 3 isolates inhibitied mycelial growth of C gloeosporioides and the inhibition rates were over 70% on PDA. When the isolates were co-cultured with conidia of C. gloeosporioides in potato dextrose broth, conidial germination was severely inhibited and the inhibition rates of TH-04, BA313, and CJ3 at 24 hours were 75%, 72%, and 68%, respectively. The inhibition rates at n hours incubation were not much different from the rates at 24 hours. To check the activity on the plant, each isolate was mixed with equal volume of conidial suspension of C. gloeosporioides and wound-inoculated on green pepper fruit. After 6 days, the anthracnose lesions on the fruits inoculated with the mixture were much smaller than the lesions caused by the C. gloeosporioides itself. The lesion areas of TH-04 or BA313 treated pepper were less than 30% of the check. TH-04 and BA313 also showed antagonistic activity to Phytophthora spp. and Botrytis cinerea. By scanning electron microscopy and fatty acid analyses (MIDI), TH-04 and BA313 were identified to Streptomyces halstedii and S. violaceusniger, repectively.
Bacterial isolates, CC178, PTC25, HC39 and KY165 originally obtained from the leaves of cucumber or tomato were selected for biocontrol agents against gray mold of cucumber and tomato by in vivo cucumber seedling assay. Each suspension of the selected epiphytic bacteria were sprayed three times at seven-day interval from early stage of cucumber in a field. Incidence of gray mold on cucumber fruits treated with isolates CC178, PTC25, HC39 and KY165 was 15.3%, 18.2%, 23.6%, and 10.4%, respectively, whereas that of control was 38.0% after 7 days of final spray. On the other hand, treatment with the selected isolates, CC178, PTC25, HC39, and KY165 on tomato showed 2.2%, 1.3%, 2.9%, and 3.5% in the incidence of gray mold on leaves, whereas that of control was 9.3%. All selected isolates had strong antagonistic activity against Botrytis cinerea on dual culture plate assay.
Methanol extracts from 53 species of oriental medicinal plants in 34 families were tested for their fungicidal activities against Pyricularia grisea, Rhizoctonia solani, Phytophthora capsici, Phytophthora infestans, Collectotrichum dematium, Botryospaeria dothidea, Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum, Botrytis cinerea, Puccinia recondita, and Erysiphe graminis. In in vitro study using impregnated paper disc method, the efficacy varied with both plant pathogen and plant species tested. Methanol extracts of Asarum sieboldii roots, Sinomenium acutum roots, Pinus densiflora leaves, Rheum undulatum root barks, Coptis japonica roots, and Phellodendron amurense barks showed potent fungicidal activities against the various pathogens when treated with 10 mg/disc. In a whole plant test, methanol extracts of P. densiflora leaves and roots and C. japonica roots were highly effective against a variety of plant pathogens. As a naturally occurring fungicide, P. densiflora- and C. japonica-derived materials could be useful as new fungicidal products against various plant diseases induced by plant pathogenic fungi.
Antifungal activity of Korean and Chinese lichen-forming fungi(LFF) was evaluated against plant pathogenic fungi of Botryosphaeria dothidea, Botrytis cinerea, Diaporthe actinidiae, Pestalotiopsis longiseta, Pythium sp., Rhizoctonia solani, and Sclerotium cepivorum. The LFF were isolated from Cladonia scabriuscula, Melanelia sp., Nephromopsis asahinae, Nephromopsis pallescens, Parmelia laevior, Pertusaria sp., Ramalina conduplicans, Ramalina sinensis, Ramalina sp., Umbilicaria proboscidea and Vulpicida sp. with discharged spore method. The isolates were deposited in the herbarium of Korean Lichen Research Institute(KoLRI) in Sunchon National University. The LFF of Melanelia sp., P. laevior, Pertusaria sp., R. conduplican and Ramalina sp. exhibited strong antifungal activity against all of the pathogenic fungi examined. Among them, LFF of P. laevior showed more than 90% of inhibition in fungal hyphae growth, compared with control. The results imply that LFF can be served as a promising bioresource to develop novel biofungicides. Mass cultivation of the LFF is now under progress in laboratory conditions for chemical identification of antifungal substances.
Methanol extracts of fruits of 67 plants were screened for in vivo antifungal activity against Magnaporthe grisea, Corticium sasaki, Botrytis cinerea, Phytophthora infestans, Puccinia recondita, and Blumeria graminis f. sp. hordei. Among them, 13 plant extracts ($3,000\;{\mu}g/ml$) showed more than 90% disease-control efficacy against at least one of six plant diseases. Specifically, the extracts of Aleurites fordii, Angelica dahurica, Camellia japonica, Chamaecyparis pisifera, Pittosporum tobira, and Styrax japonica controlled more than 90% of the development of rice blast at $1,000{\mu}g/ml$. Extracts of both S. japonica and A. dahurica fruits at $333{\mu}g/ml$ concentration displayed strong antifungal activity against M. grisea on rice seedlings.
A strain antagonistic to Fusarium solani, CHO104, was selected from approximately 100 microorganisms isolated from soil. Strain CHO104 was identified as Bacillus amyloliquefaciens and found to be Gram-positive based on the Biolog system and 16S rRNA methods. A culture broth of B. amyloliquefaciens CHO104 also exhibited antimicrobial activity against various microorganisms. As such, the EtOAc extract of the culture broth was isolated by various column chromatographic procedures and HPLC. The antimicrobial and antifungal substance was then characterized as macrolactin A $(C_{24}H_{34}O_5)$ using high-resolution EI-MS and NMR analyses, and found to be very effective in inhibiting the growth of Staphylococcus aureus, E. coli, and Botrytis cinerea, even when using a concentration of one-twentieth of the benzoic acid as the control compound.
A soil microorganism producing ${\alpha}$- and ${\beta}$-glucosidase inhibitors was identified as Bacillus lentimorbus, based on the fatty acid and morphological analyses, along with biochemical and physiological tests. The ${\alpha}$-glucosidase inhibitor was highly produced by this strain in a culture medium containing $0.25\%$ of sodium glutamate and $0.5\%$ of glucose, pH 8.0 at $30^{\circ}C$ for 2 days. The ${\alpha}$-glucosidase inhibitor from culture filtrate of his strain was identified as water soluble, organic solvent nonextractable, and heat stable. In addition to ${\alpha}$-glucosidase inhibitor, this strain also produced ${\beta}$-glucosidase inhibitor in he same culture medium and this inhibitor showed an antifugal activity against Botrytis cinerea. While the production of ${\alpha}$- glucosidase inhibitor was decreased by a glucose concentration higher than $1\%$, the production of ${\beta}$-glucosidase inhibitor was lot Influenced by a glucose concentration higher than $20\%$. The ${\alpha}$-glucosidase inhibitor from culture filtrate of this strain was separated from the ${\beta}$-glucosidase inhibitor through Sephadex G-100 column chromatography.
An anti-fungal material produced by actinomycetes was isolated from domestic soil. This actinomycetes was identified as Streptomyces albogriseus by 16S rDNA sequence. YEME (yeast extract 4 g, malt extract 10 g, glucose 4 g, D.W 1l, pH 7.00.2) medium was used for production of anti-fungal materials. S. albogriseus was cultured in a shaking incubator for 2 weeks at 150 rpm and $25^{\circ}C$. An anti-fungal material produced by S. albogriseus was identified at 340 nm by uv/vis- spectrometer and it showed powerful anti-fungal activity. This is the first report that secondary metabolite produced by S. albogriseus showed an activity against phytopathogenic fungi such as Collectrichum coccodes, Botrytis cinerea, Cladosporium cucumerinum, Didymella bryoniae.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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