Objectives: Bee venom (BV) is a complex mixture of proteins and contains proteins such as phospholipase and melittin, which have an effect on blood clotting and blood clots. The mechanism of action of honey bee venom (HBV, Apis mellifera) on human plasma proteins and its anti-thrombotic effect were studied. The purpose of this study was to investigate the anti-coagulation effect of BV and its effects on blood coagulation and purification. Methods: Crude venom obtained from Apis mellifera was selected. The anti-coagulation factor of the crude venom from this species was purified by using gel filtration chromatography (sephadex G-50), and the molecular weights of the anti-coagulants in this venom estimated by using sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Blood samples were obtained from 10 rabbits, and the prothrombin time (PT) and the partial thromboplastin time (PTT) tests were conducted. The approximate lethal dose (LD) values of BV were determined. Results: Crude BV increased the blood clotting time. For BV concentrations from 1 to 4 mg/mL, clotting was not observed even at more than 300 seconds, standard deviations $(SDs)={\pm}0.71$; however, clotting was observed in the control group 13.8 s, $SDs={\pm}0.52$. Thus, BV can be considered as containing anti-coagulation factors. Crude BV is composed 4 protein bands with molecular weights of 3, 15, 20 and 41 kilodalton (kDa), respectively. The $LD_{50}$ of the crude BV was found to be $177.8{\mu}g/mouse$. Conclusion: BV contains anti-coagulation factors. The fraction extracted from the Iranian bees contains proteins that are similar to anti-coagulation proteins, such as phospholipase $A_2(PLA_2)$ and melittin, and that can increase the blood clotting times in vitro.
The anti-coagulant activity of ilexoside D isolated from the roots of ilex pubescens Hook. et Am. was investigated in in vivo models of blood coagulation in rats. On oral administration, ilexoside D prolonged the bleeding time and the whole blood recalcified clotting time, but not the plasma recalcified clotting time. In vitor, ilexoside D did not affect the recalciffed clotting times of whole blood, platelet-rich plasma(PRP), and platelet-poor plasma(PPP), while in the presence of tissue factor the compound prologed the reduced proth-rombin times of whole blood, PRP and PPP in the dose-dependent manner. These results indicate that ilexoside D has the anit-tissue factor activity as well as the antithromobotic activity.
The influence of the ditary containing boiled eggs on the plasma cholesterol level and antithrombotic activity in rats was studied. Rats were fed basal diet(0% boiled eggs) as a control group or diets containing 25% and 50% boiled eggs or a mixed diet with 95% boiled eggs plus 5% $\alpha$-cellulose powder as a experimental groups for 30 days. The bleeding time and whole blood clotting time were significantly(P<0.05) increased by feeding diet containing 25% boiled eggs compared to groups of basal diet, 50% or 95% boiled eggs diets. The plasma clotting time was high in group of 25% boiled eggs diet. However, there were no difference in plasma clotting time among rats fed the dietary boiled eggs. The levels of plasma total cholesterol(TC) and low density plus very low density lipoprotein cholesterol(LDL, VLDL-C) were significantly(P<0.05) highest in group 95% boiled eggs diet compared to others. There were no differences in high density lipoprotein cholesterol(HDL-C) among rats fed the dietary boiled eggs. The levels of plasma TC, HDL-C, LDL$.$VLDL-C and the ratios of HDL-C/TC were not significant among the basal diet, 25% and 50% boiled eggs diets. These results suggest that the intakes of the dietary boiled eggs have the antithrombotic activity and plasma cholesterol lowering effect.
Objectives : An aim of study is to investigate effects of curculiginis rhizoma in vitro (factor Xa (FXa) inhibitor assay, prothrombinase assay, prothrombin time (PT) assay, activated partial thromboplastin time (aPTT) assay) and in vivo experiment (blood clotting time, thromboxane B2 content assay in serum and weight of thrombus by AV-shunt rat model). Methods : We gained a human serum and used serum in vitro study such as factor X activity (FXa) inhibition, prothrombinase inhibition, prothrombin time (PT) and activated partial thromboplastin time. Fifteen SD rats were divided into three groups (intact control group and two experimental group treated with extract of Curculiginis Rhizoma(ECR)). Rats were orally administrated DW (intact control group), 600 mg/kg concertration of ECR and 200 mg/kg concertration of ECR. After one hour, we anesthetized rats and made arteriovenous (AV) shunt rat models to study weights of thrombus, took a hole blood to study content of thromboxane B2 and blood clotting time. Results : In vitro, ECR increased a inhibitory activity of FXa, prothrombinase and aPTT compared than intact control group. Especially ECR made significant increase of FXa and prothrombinase inhibitory activity (p<0.05, p<0.01). And PT were increased in ECR control group compared with intact control group. In vivo, a blood clotting time of experiment group treated with ECR 600 mg/kg were significantly increased compared with that of intact control group (p<0.05) and content of thromboxane B2 was significantly decreased in group treated with ECR 600 mg/kg in seum. The weight of thrombus were significantly reduced in group treated with ECR 600 mg/kg compared with intact control group (p<0.05). But in vivo experiment study, those of group treated with ECR 200 mg/kg were reduced compared with those of intact control group without statistical significance. Conclusions : ECR has a antithromboic activity in internal course with inhibitory activity of FXa and prothrombinase in vitro, it required to research more study for effective compounds.
Green tea catechins(GTC) were studied for its inhibitory effect on human platelet aggregation in vitro, for its antithrombotic effect in mice in viro, and bleeding and clotting time in rats. The catechins were isolated and purified from green tea, which were composed of (-)-epigallocatechin gallate, (-)-epigallocatechin, (-)epicatechin gallate and (-)-epicatechin, GTC produced a potent inhibition of human platelet aggregation in a dose-dependent manner against the stimulants such as ADP, collagen, epinephrine and ristocetin n vitro. GTC also prevented death due to the formation of pulmonary thrombosis by platelet aggregates in mice in a dose-de-pendent manner in viro. GTC increased the bleeding time, whole blood clotting time and plasma clotting time in rats, too. These results suggest that GTC is a promising antithrombotic agent.
Microvel double velour graft impregnated with a biodegradable algin was studied as a new vascular graft. It is blood tight but still retains high porosity. Thls graft does not need to be preslotted with blood before implantation and has good tissue ingrowth and biological healing properties. The algin impregnated vascular graft was investigated by "in vitro" tests in this study. It was characterl zed by ESCA analysis, SEM observation, and measurements of water permeability, algin coating weight, mechanical properties and whole blood clotting time. The water permeability of the graft was reduced more than 99% and the whole blood clotting time was fast more than three times by the algin impregnation treatment. "In vivo" performance examinations of the algin impregnated graft are on progress.aft are on progress.
Ion beam enhanced deopsition(IBED) was adopted to synthesize biocompatible titanium oxide film. Structure characteristics of titanium oxide film were investigated by RBS, AES and XRD. The blood compatibility of the titanium oxide film was studied by measurements of blood clotting time and platelet adhesion. The results show that the anticoagulation property of titanium oxide film is improved significantly. The mechanism of anticoagulation of the titanium oxide film was discussed.
Objectives : The aim of this study is to research an anti-thrombus effect by Diospyros Kaki Calyx. Methods : The healthy human plasma were gained and used in vitro study such as factor X activity (FXa) inhibition, prothrombinase inhibition, prothrombin time (PT) and activated partial thromboplastin time. Fifteen SD rats were divided into three groups ; intact control group (orally administrated with distilled water 5ml/kg) and two experimental group treated with extract of diospyros kaki calyx (EKC). Experimental rats were orally 600 mg/kg concentration of EKC and 200 mg/kg concentration of EKC. After an hour from administration, we anesthetized rats and made arteriovenous (AV) shunt rat models to study weight of thrombus, took whole blood to study content of thromboxane B2 and blood clotting time. Results : In vitro, EKC significantly increased inhibitory activity of FXa, prothrombinase compared with intact control group ($^*P$ <0.05). PT and aPTT were increased in EKC treated (600 mg/kg) group compared with intact control group ($^*P$ <0.05). In vivo, blood clotting time of experiment group treated with EKC 600 mg/kg were significantly increased compare with that of intact control group (p<0.05) and content of thromboxane B2 was significantly decreased in group treated with EKC 600 mg/kg in serum. The weight of thrombus were significantly reduced in group treated with EKC 600 mg/kg compared with intact control group (p<0.05). But in vivo experiment study, those parameters of group treated with EKC 200 mg/kg were relatively decreased compared with those of intact control group without statistical significance. Conclusions : EKC has an antithrombic activity because of inhibition internal course such as FXa and prothrombin. And EKC inhibited a hole blood clotting in vivo experiment by low content of thromboxane B2.
The in vitro anticoagulant and fibrinolytic activities of crude extracts from insects were evaluated in order to find effective therapeutic drugs for the treatment of myocardial and cerebral thrombosis. We prepared three types of extracts (water, methanol and ethylacetate) from 28 insects for use as raw materials for the activity assays. The fibrinolytic activity was tested using the fibrin plate method and the activated partial thromboplastin time and thrombin time were measured for blood clotting activity. With regards to the fibrinolytic system, water extracts of six kinds of insects displayed a remarkable level of activity with a plasmin-like action. The water extracts of [Catharsius molossus, Eupolyphaga sinensis, Huechys sanguinea, Mantidis $o\ddot{o}theca$, Mimela splendens, and Polistes mandarinus (Vespae Nidus)] exhibited the activity. On the other hand, the methanol extracts did not display any fibrinolytic activity. In terms of the coagulation system, an aqueous extract of silkworm Tongchunghacho (Paecilomyces japonica), Oxya japonica japonica and Buthus martensi (Scorpion) increased the clotting time significantly longer (181 times) than the control. These results suggest that crude drugs from insects are useful sources for the development of new drugs for use in treatments involving blood coagulation and fibrinolysis.
This study was conducted to examine the effect of dietary iron levels on lipid metabolism, antioxidative and antithrombogenic capacities in 16-month-old rats. Thirty-two Sprague-Dawley male 16-month-old rats weighing 618 $\pm$ 6 g were raised for 10 days with medium-iron diet (35 ppm in diet) and blocked into 4 groups according to their body weights. One of groups was sacrificed to obtain initial data and the rest 3 groups were raised for 3 months with experimental diets containing different levels of iron (5 ppm, 35 ppm, and 350 ppm). Total lipid, triglyceride and total chole-sterol concentrations in plasma and liver, HDL-cholesterol concentration in plasma, fecal total lipid triglyceride and total cholesterol excretions, thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) level in plasma LDL + VLDL (low density lipoprotein + very low density lipoprotein) fractions, blood-clotting time and eicosanoids levels in plasma were measured. The results are as follows: Plasma total lipid, triglyceride and total cholesterol concentrations, TBARS level in plasma LDL + VLDL fractions were increased and blood-clotting time tended to be shortened during 3 months of experimental period. Low (5 ppm) iron diet improved lipid metabolism via increasing HDL-cholesterol and fecal choles-terol excretion. High (350 ppm) iron diet decreased plasma total lipid, triglyceride and total cholesterol concentrations as compared to medium (35 ppm) iron diet and lowered body weight and epididymal fat pad weight. On the other hand, TBARS level in plasma LDL + VLDL fractions and blood-clotting time were increased with high iron diet. It is plausible that low iron diet improves lipid metabolism, antioxidative and antithrombogenic capacities in 16-month-old rats.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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