This study was performed to investigate thermophilic bacteria from soil having broad antifungal spectrum against Rhizoctonia solani, Colletotrichum gloeosporioides, Phytophthora capsici, Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici, and Botrytis cinerea. One isolate selected could resist heat shock of $60^{\circ}C$ for one hour, and had broad antifungal activity in dual culture assay against all tested fungal pathogens and was identified as Bacillus amyloliquefaciens Y1 using 16S rRNA gene sequence. Further investigation for antifungal activity of bacterial culture filtrate (BCF) and butanol crude extract (BCE) of various concentrations showed broad spectrum antifungal activity and fungal growth inhibition significantly increased with increasing concentration with highest growth inhibition of 100% against R. solani with 50% BCF and 11 mm of zone of inhibition against R. solani with 4 mg BCE concentration. Treatment of butanol crude extract resulted in deformation, lysis or degradation of C. gloeosporioides and P. capsici hyphae. Furthermore, B. amyloliquefaciens Y1 produced volatile compounds inhibiting growth of R. solani (70%), C. gloeosporioides (65%) and P. capsici (65-70%) when tested in volatile assay. The results from the study suggest that B. amyloliquefaciens Y1 could be a biocontrol candidate to control fungal diseases in crops.
Tagele, Setu Bazie;Lee, Hyun Gu;Kim, Sang Woo;Lee, Youn Su
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제29권1호
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pp.66-78
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2019
In this study, strain KNU17Pc1 was tested for its antifungal activity against Rhizoctonia solani AG-1(IA), which causes banded leaf and sheath blight (BLSB) of maize. KNU17Pc1 was tested further for its broad-spectrum antifungal activity and in vitro plant growth promoting (PGP) traits. In addition, the in vivo effects of KNU17Pc1 on reduction of BLSB severity and seedling growth promotion of two maize cultivars under greenhouse conditions were investigated. On the basis of multilocus sequence analysis (MLSA), KNU17Pc1 was confirmed as P. chlororaphis subsp. aurantiaca. The study revealed that KNU17Pc1 had strong in vitro antifungal activity and was effective toward all in vitro PGP traits except phosphate solubilization. In this study, for the first time, a strain of P. chlororaphis against Colletotrichum dematium, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium oxysporum f.sp. melonis, Fusarium subglutinans and Stemphylium lycopersici has been reported. Further biochemical studies showed that KNU17Pc1 was able to produce both types of phenazine derivatives, PCA and 2-OH-PCA. In addition, solid phase microextraction-gas chromatography-mass spectrometry (SPME-GC-MS) analysis identified 13 volatile organic compounds (VOCs) in the TSB culture of KNU17Pc1, 1-undecene being the most abundant volatile. Moreover, for the first time, Octamethylcyclotetrasiloxan (D4), dimethyl disulfide, 2-methyl-1,3-butadiene and 1-undecene were detected in P. chlororaphis. Furthermore, this study reported for the first time the effectiveness of P. chlororaphis to control BLSB of maize. Hence, further studies are necessary to test the effectiveness of KNU17Pc1 under different environmental conditions so that it can be exploited further for biocontrol and plant growth promotion.
Antifungal bacteria for biological control of plant diseases or production of novel antibiotics to plant pathogens were isolated in 1997 from various soils of Ansung, Chunan, Koyang, and Paju in Korea. Sixty-four bacterial strains pre-screened from approximately 1,400 strains were tested on V-8 juice agar against eight plant pathogenic fungi using in vitro bioassay technique for inhibition of mycelial growth. Test pathogens were Alternaria mali, Colletotrichum gloeosporioides, C. orbiculare, Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum, F. oxysporum f. sp. lycopersici, Magnaporthe grisea, Phytophthora capsici, and Rhizoctonia solani. A wide range of antifungal activity of bacterial strains was found against the pathogenic fungi, and strain RC-B77 showed the best antifungal activity. Correlation analysis between inhibition of each fungus and mean inhibition of all eight fungi by 64 bacterial strains revealed that C. gloeosporioides would be best appropriate for detecting bacterial strains producing antibiotics with potential as biocontrol agents for plant pathogens.
근채류식물의 근부원인이 되는 토양유래의 식물병원 성진균에 대한 생물학적 방제를 위하여 저병해인삼경작 지토양으로부터 식물근부균 Fusarium solani의 생육을 강력히 길항하는 억제세균 YPL-1을 분리, 선발하였으며 이들 동정한 결과 Pseudomonas stutzeri이거나 그 근연종으로 확인하였다. 선발된 P.stutzeri YPL-1에 의해 생산된 근부균생육억제물질은 열에 민감하고 고분자의 단백질물질로서 chitinase 및 laminarinase 등 F.solani의 외막가수분해효소인 것으로 추정된다. 더욱이 chitinase 생산능과 근부균생육억제능은 정관계로 비례한다는 것도 알았다. 이는 NTG를 이용하여 얻은 chitinase 및 laminarinase 생산불능변이주 P.stutzeri YPL-M122(chi-, lam-), P.stutzeri YPL-M153(chi-)에 의해서도 확인되었다. 그러나 본 P.stutzeri YPL-1은 siderophore를 전혀 생산하지는 못하였다. 이 결과로 미루어 보아 선발된 억제균 P.stutzeri YPL-1 균주에 의한 식물근부균 F.solani의 생육억제기작은 저분자물질인 항생물질이나 siderophore가 아닌 chitinase를 주로 하는 외막가수분해효소에 의한 근부균 F.solani의 세포벽분해에 기인된 것으로 생각된다.
곤충은 장내에 서식하고 있는 미생물과 상호작용을 통해 공생하는 것으로 알려져 있으며, 이러한 공생자는 공진화를 통하여 극한 환경에서도 서식을 가능하게 한다. 이러한 관점에서 토양 속에서 부엽토와 식물 잔재를 먹고 사는 장수풍뎅이 유충의 장내에 존재하는 공생자는 식물병원균을 방제하는 데 유용한 미생물이 존재할 것으로 생각된다. 따라서, 식물병원균에 대해 활성을 갖는 유용 미생물 10종을 장수풍뎅이 유충의 소화기관 전장, 중장, 후장으로부터 분리하였다. 분리된 10종의 유용 미생물은 유묘 검정을 통하여 토마토 잿빛곰팡이병, 배추 뿌리혹병, 고추 탄저병, 고추 역병에 대하여 강력한 항균 활성을 확인하였다. 10종의 항균활성 미생물은 형태적 특성과 16s rRNA gene 분석으로 Bacillus속 4종, Paenibacillus속 3종 및 Streptomyces속 3종으로 동정되었다. 유용 미생물은 인산 가용화, indole-3-acetic acid, siderophore 생성 활성이 우수하며 진균외막가수분해 효소인 β-1,3-glucanase, pretease 활성을 보였다. 10종의 유용 미생물 중, DM152 균주는 토마토와 고추 식물체의 모든 기관에서 생장을 촉진시켰다. 따라서, 장수풍뎅이 유충의 소화기관으로부터 분리된 10종의 장내 미생물은 생물학적 방제제 및 생물비료의 활용 가능성을 나타내었다.
We tested Trichoderma harzianum as a biocontrol agent for Rhizoctonia solani AG2-1, using six natural antifungal materials to improve its efficacy. Among the six materials tested, peony (Paeonia suffruticosa) root bark (PRB) showed the strongest antifungal activity against R. solani AG2-1, and was not antagonistic to T. harzianum. Scanning electron microscopy showed that treatment with PRB extract resulted in shortened and deformed R. so/ani AG2-1 hyphal cells. The control of radish damping-off caused by R. so/ani AG2-1 was greatly increased by combined treatments of T. harzianum and PRB, as compared with either of the two treatments alone, with the control effect increased from 42.3-51.5% to 71.4-87.6%. The antifungal compound in PRB, which was isolated in chloroform and identified as paeonol by mass spectrometry, $^1H$ NMR, and $^{13}C$ NMR analyses, inhibited the growth of R. so/ani AG2-1 but not that of T. harzianum. Thus, PRB powder or extract may be used as a safe additive to T. harzianum to improve the control of the soil borne diseases caused by R. so/ani AG2-1.
식물생장 촉진 호르몬인 auxin을 생산하는 균주를 선발하기 위해 경산지역 경작지 토양에서 29종의 세균을 분리하였으며 Salkowsky test를 통해 auxin을 생산하는 14종을 선발하였다. 이 중 CAS(chrome azurol S) blue agar에서 siderophore의 생산을 확인 후 auxin과 siderohroe를 동시에 생산하는 AH18을 최종 선발하였다. AH18의 mung-bean adventitious root induction test를 통해 식물생장 촉진 능이 대조구에 비해 1.5배나 뛰어남을 알 수 있었고, 토마토 pot test에서 토마토 시들음병의 윈인균인 F. oxysporum에 대해서 길항력도 나타내었다. 선발된 AHl8 균주는 16S rDNA와 Biolog system을 통해 Bacillus subtilis 동정되었다. B. subtilis AH18은 Sucrose-asparagine-MgsO$_4$(SAM) medium (pH 6.0)에 접종하여 30$^{\circ}C$에서 3일간 배양 시 siderophore를 가장 많이 생산하는 것을 알 수 있었다.
The present study described the isolation of 2-methylbutyric acid (2-MBA) produced from Bacillus pumilus L1, to subsequently investigate its nematicidal activity for the control of the root-knot nematode. The results showed that 2-MBA could be purified by chromatographic techniques and was identified using nuclear magnetic resonance and liquid chromatography-mass spectrometry. Crude extract and partially purified compounds had a significant effect on the inhibition of egg hatchability and second-stage juvenile (J2) mortality. A dose-dependent effect of 2-MBA was observed for J2 mortality and egg hatchability. Egg hatchability was 69.2%, 59.9%, 32.7%, and 0.0% at 125, 250, 500, and $1000{\mu}g\;mL^{-1}$ of 2-MBA after 4 d of incubation, respectively. Meanwhile, J2 mortality was in the range of 24.4%-100.0% after 2 d of incubation, depending on the concentrations of 2-MBA used. A pot experiment also demonstrated that treatment of B. pumilus L1 culture caused a significant reduction in the number of galls, egg masses, and J2 population than that of the tap water (TW) control. However, as the B. pumilus L1 culture concentration was decreased, the efficacy of nematode control by treatment of B. pumilus L1 culture was reduced compared to that of TW. B. pumilus L1 inoculation at different concentrations also promoted cucumber plant growth. Therefore, our study demonstrated the potential of 2-MBA from B. pumilus L1 as a biocontrol agent against the root-knot nematode and a plant growth promoter for cucumber plants.
Ginseng (Panax ginseng) is one of the most widely cultivated medicinal herbs in Korea. However, yield losses reached up to 30-60% due to various diseases during 3 or 5 years of ginseng cultivation in the country. Therefore, successful production of ginseng roots depends primarily on the control of diseases. The objective of this study was to select potential biocontrol agents from rhizobacteria isolated from various plant internal root tissues for the control of multiple ginseng diseases as an alternative to fungicides. Among 106 Bacillus strains, two promising biocontrol agents, Bacillus pumilus strain B1141 and Paenibacillus lentimobus strain B1146, were selected by screening against root rot of ginseng caused by Cylindrocarpon destructans in a greenhouse. Pre-inoculation of selected isolates to seed or l-year-old root of ginseng resulted in stimulation of shoot and/or root growth of seedlings, and successfully controlled root rot caused by C. destructans (P<0.05). Furthermore, drenching of cell suspension of the selected isolates on seedling-growing pots reduced the incidence of Phytophthora blight after the seedlings were challenged with zoospores of Phytophthora cactorum (P<0.05). P. lentimorbus strain B1146 showed antifungal activity against various soil-borne pathogens in vitro, while B. pumilus strain B1141 did not show any. Results of this study suggest that some rhizobacteria can induce resistance against various plant diseases on ginseng.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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