Bacterial stain 3Y was isolated from a site that was contaminated with diesel for more than 15 years. The strain could grow on various petroleum using hydrocarbons as the sole carbon source. The strain grew not only on aliphatic hydrocarbons but also on aromatic hydrocarbons. 3Y grew on aliphatic petroleum hydrocarbons hexane or hexadecane, and aromatic petroleum hydrocarbons BTEX, phenol, biphenyl, or phenanthrene. The strain showed aromatic ring dioxygenase and meta-cleavage dioxygenase activities as determined by tests using indole and catechol. Aromatic ring dioxygenase is involved in the initial step of biodegradation of aromatic hydrocarbons while meta-cleavage dioxygenase catalyzes the cleavage of the benzene ring. Based on a nucleotide sequence analysis of its 16S rRNA gene, 3Y belongs to the genus Sphingomonas. A phylogenetic tress was constructed based on the nucleotide sequences of closest relatives of 3Y and petroleum hydrocarbon degrading sphingomonads. 3Y was in a cluster that was different from the cluster that contained well-known sphingomonads. The results of this study suggest that 3Y has the potential to cleanup oil-contaminated sites. Further investigation is warranted to optimize conditions to degrade petroleum hydrocarbons by the strain to develop a better bioremediation strategy.
A Gram-negative bacterium was isolated from mushroom media that markedly reduces the level of extracellular toxins (i.e., tolaasins) produced by Pseudomonas tolaasii, the most destructive pathogen of cultivated mushrooms. The HC1 strain was selected as detoxifying tolaasin by bioassay on potato and it was identified Pseudomonas sp. by the cultural, morphological and physiological characteristics, and analysis of the 16S rRNA. The isolated bacterium is saprophytic but not parasitic nor pathogenic to cultivation mushroom. The isolated bacterium for P. tolaasii cell, was sufficient for detoxification in vitro. Inoculation of the isolated bacterium prevents the development of bacterial disease in Pleurotus ostreatus, Flammunia velutipes and Agaricus bisporus. Control efficacy of brown blotch of strain HC1 treatment was 69, 68 and 55% on Agaricus bisporus, Flammulina velutipes and Pleurotus ostreatus, respectively. The suppressive bacterium may be useful in future for the development of biocontrol system and the construction of genetically modified edible fungi resistant to the disease caused by P. tolaasii.
EPS producing bacteria were enumerated in ginseng root system (rhizosphere soil, rhizoplane, inside of root). EPS producing bacterial density of rhizosphere soil, rhizoplane and inside of root were distributed $9.0{\times}10^6$ CFU/g, $7.0{\times}10^6$ CFU/g, and $1.4{\times}10^3$ CFU/g, respectively. Phylogenetic analysis of the 24 EPS producing isolates based on the 16S rRNA gene sequences, EPS producing isolates from rhizosphere soil (RS) belong to genus Arthrobacter (6 strains) and Rhizobium (1 strain). EPS producing bacteria from rhizoplane (RP) were Arthrobacter (6 strains), Rhodococcus (1 strain) and Pseudomonas (1 strain). EPS producing bacteria from inside of root (IR) were categorized into Rhzobium (6 strains), Bacillus (1 strain), Rhodococcus (1 strain), and Pseudomonas (1 strain). Phylogenetic analysis indicated that Arthrobacter may be a member of representative EPS producing bacteria from ginseng rhizosphere soil and rhizoplane, and Rhizobium is typical EPS producing isolates from inside of ginseng root. The yield of EPS was 10.0 and 4.9 g/L by Rhizobium sp. 1NP2 (KACC 17637) and Arthrobacter sp. 5MP1 (KACC 17636). The purified EPS were analyzed by Bio-LC and glucose, galactose, mannose and glucosamine were detected. The major EPS sugar of these strains was glucose (72.7-84.9%).
For the detection of the oil-degrading bacterium, Nocardia sp. Hl7-1, inoculated during the bioremediation of oil-contaminated soil, a species-specific primer was constructed based on the 16S rDNA sequence of this strain. Two forward primers and two reverse primers were designed and tested against both closely and distantly related bacterial strains. All the primers designed were specific to the Nocardia sp. H17-1. Particularly, primer sets NH169F-NH972R and NH575F-NH972R could be used to detect 50 fg of template DNA and TEX>$1.2${\times}$10^4$ CFU/g of sandy soil. These two PCR primer sets successfully detected the H 17-1 strain in the oil-con-laminated soil samples containing heterogeneous DNA. We also conformed the primer specificity by restriction-enzyme cleavage of the PCR products and denaturing gradient gel electrophoresis.
Journal of Korean Society of Environmental Engineers
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v.30
no.8
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pp.798-807
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2008
Due to economic impairment derived from metal corrosion of pumping station installed around coastal area, it was needed for related cause-effect to be investigated for understanding practical corrosion behavior and providing proper control. This research was thus carried out to determine whether the microbe can influence on metal corrosion along with its control in the laboratory. For this study, groundwater was sampled from the underground pump station(i.e. I Gas Station) where corrosion was observed. Microbial diversity on the samples were then obtained by 16S rDNA methods. From this, microbial populations showing corrosion behaviors against metals were reported as Leptothrix sp.(Iron oxidizing) and Desulfovibrio sp.(Sulfur reducing) Iron oxidizing bacteria were dominantly participating in the corrosion of iron, while sulfate reducing bacteria were more preferably producing precipitate of iron. In case of galvanized steel and stainless steel, iron oxidizing bacteria not only enhanced the corrosion, but also generated its scale of precipitate. Sulfate reducing bacteria had zinc steel corroded greater extent than that of iron oxidizing bacteria. In the inactivation test, chlorine or UV exposure could efficiently control bacterial growth. However as the inactivation intensity being increased beyond a threshold level, corrosion rate was unlikely escalated due to augmented chemical effect. It is decided that microbial corrosion could be differently taken place depending upon type of microbes or materials, although they were highly correlated. It could be efficiently retarded by given disinfection practices.
An antagonistic bacterial isolate, that inhibits the growth of plant pathogens, was selected and identified from 5,000 isolates screened from the rhizosphere of various crop plants. An isolate Bacillus sp. N32, tested against Colletotrichum gloeosporioides causing anthracnose disease in hot pepper, produced both a heat resistant antifungal protein and a heat sensitive antifungal protein. The heat resistant protein was partially purified by Ammonium sulfate fractionation and gel filtration chromatography. The bioautography showed that the proteins possessed high antifungal activity. The biosynthetic gene cluster responsible for the heat resistant antifungal protein was cloned from cosmid library using DNA probe obtained from PCR product with the primers targeting the conserved nucleotide sequence of the synthetic genes reported earlier, Most of the clones obtained showed higher homology to fengycin antibiotic synthetic gene family reported earlier. On the other hand, the heat sensitive protein was isolated from SDS-PAGE and electroblotting to determine the N-terminal amino acid sequences. The heat sensitive antifungal protein gene was cloned from the ${\lambda}-ZAP$ libraries using a DNA probe based on the N-terminal amino acid sequences of the heat sensitive protein. We are contemplating to clone and sequence the whole gene cluster encoding the heat sensitive protein for further analysis.
Strains degrading ethylene glycol(EG) and terephthalic acid(TPA) were isolated from water systems, and identified as Pseudomonas sp. They were named as Pseudomonas sp. EAW for EG and as Pseudomonas sp. TS2 for TPA. The optimal culture conditions of temperature, pH and nitrogen source were found to be $35^{\circ}C$, 7.5 and ammonium sulfate, respectively. The growth of strains and removal efficiency was slightly promoted by trace elements such as niacin and biotin in case of EG, and by trace elements such as $Na_2MoO_4{\cdot}2H_2O$ and thiamin i case of TPA. With increasing inoculation sloe for batch culture, the removal efficiency of EG by the strain EAW was conspicuously increased, while the removal efficiency of TPA by the strain TS2 was not changed as much as that of EG. The growth rate of the strain EAW was much more decreased than that of the strain TS2 in the enrichment medium, as the frequency of repeated-batch culture in the rich-medium increased. in case of real wastewater, growth rate and removal efficiencies of EG and TPA were lower than those in the enrichment medium. $COD_{Mn}\;and\;COD_{Cr}$ removal efficiencies after 48 hrs batch culture in real wastewater were 89% and 93%, respectively. The specific growth rate was inhibited when the initial concentration of EG or TPA was more than 25g/L.
The regulation of pyrimidine nucleotide synthesis has been proved to be controlled by a regulatory protein PyrR-mediated attenuation in the Gram-positive bacteria. After several bacterial genome sequencing projects, we have discovered the PyrR orthologues in the databases for Haemophilus influenzae and Synechocystis and sp. PCC6803 genome sequences. To investigate whether these PyrR orthologue proteins regulate pyrimidine nucleotide synthesis as well as the cases of Bacillus, the PyrR regions of each strains were amplified by PCR and cloned with pUC19 or T-vector in Escherichia coli and with a shuttle vector pHPS9 for E. coli and B. subtilis. For the regulation test of the PyrR orthologues, the aspartate-transcarbamylase (ATCase) assay was carried out. From the results of the ATCase assay, it was confirmed that Synechocystis sp. PCC6803 could not restore by pyrimidines to a B. subtilis, PyrR but H. influenzae PyrR could. For Purification of PyrR orthologue proteins, PyrR orthologue genes were cloned into the expression vector (pET14b). Over-expressed product of PyrR orthologue genes was purified and analyzed by the SDS-PACE. The purified PyrR orthologue proteins from H. influenzae and Synechocystis sp. PCC6803 turned out to be molecular mass of 18 kDa and 21 kDa, respectively. The result of uracil phosphoribosyl transferase (UPRTase) assay with purified PyrR orthologue proteins showed that H. influenzae PyrR protein only has UPRTase activity. In addition, we could predict several regulatory mechanisms that PyrR orthologue proteins regulate pyrimidine de novo synthesis in bacteria, through phylogenetic analysis for PyrR orthologue protein sequences.
Seo, Sam-Yeol;Ahn, Haet-Nim;Eom, Seong-Hyeon;Im, Eun-Yeong;Park, Ji-Young;Kim, Yong-Gyun
Korean journal of applied entomology
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v.51
no.1
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pp.39-45
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2012
The entomopathogenic bacterium, $Xenorhabdus$ sp., was isolated from an entomopathogenic nematode, $Steinernema$$monticolum$. When these bacteria were injected into the hemocoel of the diamondback moth, $Plutella$$xylostella$, they caused significant mortality. However, the bacterium was not pathogenic when it was administered orally. This study showed that $Xenorhabdus$ sp. significantly enhanced oral pathogenicity of $Bacillus$$thuringiensis$ (Bt) against the last instar larvae of $P.$$xylostella$. Different ratios of culture broth of $Xenorhabdus$ sp. and Bt showed significantly different pathogenicities against $P.$$xylostella$. In field tests, the optimal bacterial mixture significantly enhanced control efficacy against $P.$$xylostella$ compared to Bt treatment alone. These results demonstrated that $Xenorhabdus$ sp. culture broth can be developed as a potent biopesticide by enhancing the insecticidal efficacy of Bt.
Kim, Dong-Ho;Kim, Jae-Hun;Yook, Hong-Sun;Ahn, Hyun-Joo;Kim, Jung-Ok;Sohn, Cheon-Bae;Byun, Myung-Woo
Korean Journal of Food Science and Technology
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v.31
no.6
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pp.1619-1627
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1999
Microbiological characteristics of gamma irradiated low salt squid Jeot-gal were examined. Following the fermentation periods, total bacterial cell, Lactobacillus spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Pseudomonas spp. and yeast cell number were counted on their selective media and some acid forming bacteria and Pseudomonas spp. were identified. As the gamma irradiation dose increased, the microbial density of early fermentation phase was reduced and the growth rate was delayed. The repression effects on microbiological growth by gamma irradiation were to be higher as salt concentration increased. Adequate conditions of salt concentration and gamma irradiation for low-salt squid Jeot-gal preparation were 10% and 10 kGy, respectively. Lactobacillus sp. 2, Micrococcus varians and Streptococcus sp. I were isolated from 5% salt containing squid Jeot-gal, and Micrococcus morrhuae was from 20% only while Lactobacillus plantarum and Lactobacillus brevis were widespread. Lactobacillus brevis, Pediococcus halophilus and Pseudomonas diminuta were sensitive and Lactobacillus plantarum, Micrococcus morrhuae and Pseudomonas sp. 3 were resistant to gamma irradiation. The diversity of microflora decreased as salt concentration decreased and gamma irradiation dose increased.
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