Background: Russian sturgeon (Acipenser gueldenstaedtii) is an emerging candidate species in the Korean aquaculture domain owing to its highly valued caviar. Although the embryonic development of this species was previously described, the complete image data on the morphological differentiation of developing embryos have not been yet fully available. Further, with the viewpoint of larval production in hatchery, the effects of temperature on embryonic viability and the temporal window of hatching event have not been extensively studied. Hence, the objective of this study was to provide a complete set of photographic image data on the embryogenesis and also to examine the effects of incubation temperatures on embryonic viability and hatching event in farm-bred Russian sturgeon. Results: Typical characteristics of embryonic development including uneven, holoblastic cleavages with unequal blastomeres, followed by the formation of germ layer, neurulation, and organogenesis until hatching, were documented. Under different temperature conditions (12, 16, or $20^{\circ}C$), viability of embryos incubated at $12^{\circ}C$ was significantly lower as relative to those of 16 and $20^{\circ}C$ incubated embryos. Hatchability of embryos was higher, and the timing of hatching event was more synchronized at $20^{\circ}C$ than at 12 and $16^{\circ}C$. Conclusion: Data from this study suggest that the incubation of Russian sturgeon embryos at $20^{\circ}C$ would be desirable in the hatchery practice with respect to the good hatchability of embryos and the synchronization of hatching events. Additionally, the updated image data for complete embryonic development could be a useful reference guide for not only developmental researches but also artificial propagation of Russian sturgeon in farms.
본 연구는 서울대공원 인공사육장에서 남생이(Mauremys reevesii) 알의 부화온도 차이에 따른 부화기간과 성장에 영향을 주는지 알아보고자 연구했다. 전체 201개의 남생이 알을 26(n=89)℃, 28(n=75)℃ 그리고 32(n=37)℃에서 각각 부화시켰다. 남생이 알의 부화온도와 부화기간은 온도에 따라 유의미한 차이를 나타내었다. 본 연구에서 부화 온도가 높을수록 부화율이 증가하였다. 26℃, 28℃, 그리고 32℃에서 부화한 알의 부화 기간은 각각 66.1(±4.0, n=52)일, 65.3(±3.3, n=44)일 그리고 58.8(±7.7, n=31)일이었다. 부화율은 32℃(83.8%)가 26℃(58.4%)와 28℃(58.7%)보다 상대적으로 높았다. 32℃에서 부화한 14일 된 새끼의 몸무게가 26℃와 28℃에서 부화한 14일 된 새끼의 몸무게보다 높았다. 그렇지만 부화 후 180일과 270일에 새끼의 몸무게는 부화 온도에 따라 큰 차이가 없었다. 본 연구에서 한국산 남생이(M. reevesii) 알의 부화 온도가 부화 기간과 성장 초기 남생이의 체중에 유의한 영향을 미치는 것으로 나타났다.
Kim, Hye Jin;Lee, Ki Hwan;Park, Sung Baek;Choi, Young Bae;Yang, Jung Bo
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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제42권3호
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pp.94-100
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2015
Objective: The goal of this study was to ascertain optimal assisted hatching (AH) method in frozen embryo transfer. We compared the effect of depending on whether mechanical or laser-AH was performed before or after the vitrification of embryo development rate and blastocyst cell numbers. Methods: In order to induce superovulation, pregnant mare's serum gonadotropin followed by human chorionic gonadotropin were injected into 4- to 5-week-old female mice. 2-cell embryos were then collected by flushing out the oviducts. The Expanded blastocysts were recovered after the collected embryos were incubated for 48 hours, and were then subjected to artificial shrinkage (AS) and cross-mechanical AH (cMAH) or quarter-laser zona thinning-AH (qLZT-AH) were carried out using the expanded blastocysts before or after vitrification. After 48 hours of incubation, followed by vitrification and thawing (V-T), and blastocysts were fluorescence stained and observed. Results: The rate of formation of hatched blastocysts after 24 and 72 hours of incubation was significantly higher in the AS/qLZT-AH/V-T group than in the other groups (p<0.05). The cell number of the inner cell mass was higher in AS/V-T/non-AH and AS/V-T/cMAH groups than those of others (p<0.05). In the control group, the number of trophectoderm and the total cell number were higher than in the AS-AH group (p<0.05). Conclusion: The above results suggest that AS and AH in vitrification of expanded blastocysts lead to the more efficient formation of hatched blastocysts in mice.
Studies were carried out to investigate the phenotypic characteristics of the non-molting mutant (nm-f) which was mapped on the 2nd linkage group. The results obtained were as follows : The nm-f mutant was distinguishable in the 3rd day of hatching. About 80 percentage of the non-molting mutant larvae died at the first instar within 10 days of hatching. The remaining larvae survived to the 2nd ad the 3rd instar but did not live to the final instar. There was no difference in non-molting nutant manifestation between hibernating and artificial hatching eggs. As a result of hemolymph protein analysis, the protein content on nm-f mutant was less than the normal larvae's. Therefore, we conclude that the characterization of nm-f is similar to the already known strains of non-molting mutant and the shortage of hemolymph protein is closely related to the non-molting characteristic in nm-f.
월년종의 냉장처리일수 및 인공부화에 따른 부화상태를 알고자 춘기채종 잠 103$\times$잠 104를 공시하여 1월하순에서 2월 중순에 걸친 시험에서 1월 하순경에 잠난은 휴면타파가 이루어 졌으나 5$^{\circ}C$ 냉장기간이 길어짐에 따라 휴면이 완전 타파되어 최청이 가능하다고 생각한다. 인공난화처리는 영기 비중 1.075 보다는 1.10이 변화에 좋은 영향을 미쳤으며 침지시간은 2분보다는 3분이 효과적이었다. 저온처리와 인공부화처리간에는 저온처리가 짧은 경우는 인공난화처리로서 부화에 효과적이나 반대로 긴 경우는 인공부화 양리량이 강할 수록 난 영산농도와 침지시간이 강할 수록 효과적이었다.
The aim of this study was to compare the efficacy of cryopreservation methods for ex situ conservation of spermatozoa from far eastern catfish, Silurus asotus. The spermatozoa activity index (SAI) and hatching rates were higher in spermatozoa stored in Alserver's solution than those of spermatozoa stored in glucose solution. The SAI and hatching rates in all experimental groups gradually decreased with increasing duration of storage. Additionally, the SAI and hatching rates gradually decreased with increasing thawing temperatures at all storage durations (P<0.05). Based on the SAI and hatching rates, our results suggest that the optimal cryopreservation conditions of catfish spermatozoa involve storage in Alserver's solution with 15% ethylene glycol, and thawing at $25^{\circ}C$. Cryopreservation of spermatozoa is a useful and reliable technique for conserving gene resources and for artificial propagation of far eastern catfish.
인공부화기 내에 종란이 입란하여 18일간 발생기를 거쳐 발육기로 이란을 한다. 발생기 동안 계태아 무게 손실은 곧 기실형성과 상관되며 적당한 기실 형성은 곧 건강한 초생추와 입란 대비 부화율과도 연결된다. 그러나 국내 부화장의 부화기에는 현재 무게를 측정하는 장치 없이 부화실장과 관계자의 경험과 발육기로 이란시 표준 무게 측정으로 결과적 측면을 습득하는 것이 현실이다. 그로 인하여 부화 중 조기 폐사, 약추, 병약한 초생추 발생이 빈번한 실정이다. 종란 중량 감소를 모니터링하는 것은 발육장치기 안에서의 무게 변화에 따른 병아리 품질과 부화율 성과를 얻는 데에 절대적으로 중요하다. 종란의 크기와 난각질, 노계 군에 따라 수분 손실은 각기 다르다. 발육기 안에서 무게 변화를 실시간 측정하고 그에 따른 환기 변화를 최적화하여 부화율의 증가를 기대할 수 있으며 부화 시 전체 무게의 10~13% 감소를 컨트롤할 수 있는 실시간 측정 시스템의 개발 필요성이 대두된다. 본 연구를 통한 시스템은 기존의 입란과 이란시 직접적으로 일회성을 체크하는 방식으로 발육 기간 내에는 계태아 수분 증발 측정 제어가 불가능하여 부화율에 영향을 못 미치는 시스템과 달리 아두이노 스케치 보드에 로드셀 4개를 병렬로 연결하고 실시간으로 휴대폰, 컴퓨터를 연결하기 위해 Hyper-terminal 프로그램을 이용하여 AT-command 명령어를 활용하여 정상적으로 연동하였다. 블루투스의 통신속도는 15200으로 설정하여 아두이노와 Hyper-terminal 프로그램의 통신 속도를 맞춰주었다. 실시간 모니터링을 하여 인공부화기 내의 계태아 무게의 변화를 육안으로 확인할 수 있도록 시스템을 설계하였다. 이와 같은 방법으로 종란의 부화율 상승 및 건강상태의 향상을 목표로 하였으며 실시간 모니터링으로 인하여 사용자의 편의성을 확대하고자 하였다.
강원연안에 서식하는 코끼리조개의 인공종묘생산 기술개발을 목적으로 산란유발 방법 및 수정과 부화를 위한 수온과 염분농도의 최적조건 등을 연구한 결과를 요약하면 다음과 같다. 코끼리조개의 산란유발은 간출자극과 자외선조사해수자극에서는 전혀 반응이 없었다. 수온자극에서는 5월에 15.0-25.0%의 반응을 보였고, 6월에는 10.0%의 반응을 보였다. 그러나 생식소를 절개한 것은 15.0-45.0%로 가장 높은 반응을 보였다. NH 하(4) OH 용액을 해수에 첨가하는 자극에서는 8/1000N-10/1000N에서 15.0%의 반응율을, 그리고 NH 하(4) OH 용액을 생식소에 주사하는 자극은 5/100N-7/100N에서 5.0-10.0%의 반응율을 보였다. 코끼리조개의 수온에 따른 수정율은 수온 11-17$^{\circ}C$범위에서 74.2-89.2%였고, 부화율은 수온 8-$14^{\circ}C$에서 84.3-90.5%로 가장 높았다. 염분 농도에 의한 수정율은 염분 25-$35tetperthousand$범위에서 72.5-88.5%, 부화율은 염분 30-$35tetperthousand$에서 82.7-86.9%였다. 수정과 부화를 위한 수온과 염분농도의 최적조건은 수온 11-$14^{\circ}C$, 염분농도 30-$35tetperthousand$로 나타났다.
본 연구는 Amphiprion melanopus의 산란 주기 행동 및 산란 후 습성을 조사하고 이를 기반으로 부화장치를 제안하고자 하였다. 연중 수온, 염분 및 광주기가 일정한 인공적인 환경에서 사육된 4쌍의 어미들은 산란주기 및 횟수가 각각 다르게 나타났다. 반면, 수정 후 알 관리는 수컷에 의해서 주로 관리가 되었다. 부화일이 가까워질수록 수컷의 eggfanning 횟수가 증가하였고, 특히, 부화 직전에 더욱 격렬한 행동을 나타냈다. 이러한 정보를 기반으로 에어레이션형, 스프레이형, 회전 수류형 등 3종의 부화장치에 대한 clownfish류 4종의 부화율을 조사한 결과, 회전 수류형 시스템의 부화율이 87.3%로 스프레이형(74.4%)과 에어레이션형(60.5%)보다 높았다. 그리고 회전수류형에서 부화판 개수별(2, 3, 5개)에 따른 부화율은 서로 차이가 없었다. 그러므로 부화자어의 사육 크기를 고려하여 수조 크기를 결정하면 많은 개수의 부화판을 넣어 대량으로 부화시킬 수 있을 것이다.
The present study was performed to investigate the efficacy and safety of laser assisted hatching (AH) on mouse embryos. Non-contact $1.48{\mu}m$ diode laser system used to create a precise hole on zona pellucida. 2-cell embryos were collected from the mice (ICR) that had the coitus vaginal plug confirmed at 48 hours after hCG injection. Collected 2-cell embryos were cultured in the HTF medium supplemented with 0.4% BSA. For experiments, embryos at 8-cell stage were used after 18-22 hours in culture. After assisted hatching, the embryos were further cultured in HTF medium containing 0.1% PVP (anti-hatching system) for 3 days. For evaluate efficiency of laser on mouse embryo hatching, the effect of AH methods (acidic tyrode, pronase and laser), the number of artificial holes (1, 2 and 3 hole) and the irradiation time of laser (2, 4, 6, 8 and 10 ms) were examined. Hatching rates of laser AH group (95.2%) was significantly higher than that of control group (50.8%), but there was no differences among the laser (95.2%), acidic tyrode (100%) and pronase (98.5%) groups. Hatching rates of the number of zona pellucida opening by laser, there were no differences among the 1 hole (87.5%),2 hole (92.1%) and 3 hole (85.9%) groups. Developmental and hatching rates of embryos according to laser irradiation time were similar in the treatment groups. Therefore, these results suggest that laser AH using non-contact $1.48{\mu}m$ diode laser is a simple and accurate and effective procedure for AH. Based on these results, laser AH could be use safely for human ART program.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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