Cordyceps militaris specimens were continuously collected by Entomopathogenic Fungal Culture Collection (EFCC), Kangwon National University from different mountains, national parks and recreation parks of Korea from 1986 to 2002, mainly from late May to October of each year. Dry specimens of C. militaris along with their isolates have been preserved in EFCC. Fruiting of C. militaris was induced from single ascospore isolates as well as their combinations in brown rice medium. Fruiting experiments showed that combinations of single ascospore isolates produced fertile fruiting bodies, but single isolates could not produce any fruiting bodies. It was shown that two isolates of the opposite mating types were required to produce fertile stromata. However, combinations of the same mating type isolates produced no fruiting body, showing that C. militaris is a bipolar, heterothallic fungus.
Armillaria mellea mushrooms were cultivated on the sawdust media, Quercus sawdust; rice bran=80:20 in polypropylene bags. The isolate of Armillaria mellea used was ARM69002F collected from a Korean pine plantation in Hongcheon district. The length of time between spawning and fruiting was required for 90 to 100 days. The number of fruiting bodies produced in a bags with a kg substrate were approxinately 31 (range of 18 to 62), and the total fresh weight 158g (61 to 207g), converted to 13 to 15% of fresh weight. The pilei of fruiting bodies were average 4.0 cm (2.5 to 7.6 cm)wide, and their stipes 8.2 cm long and 0.6 cm-thick at the upper part and 1.2 cm at the base.
In order to breed a Cordyceps bassiana isolate that stably forms fruiting body in artificial cultivation, isolates derived from subculturing and single spores were tested through mating. From C. bassiana EFCC 783, three subcultured isolates EFCC 2830, EFCC 2831 and EFCC 2832 were obtained and fourteen single conidial isolates were obtained from these three subcultured isolates. Two different morphological types were found in the fourteen single conidial isolates. One type was able to form synnemata and another type was not able to form synnemata. Since switch of morphological type was not observed despite their continuous subculturing, cross was performed between the two types and the formation of fruiting body was examined. Ascospores were obtained from a selected fruiting body formed by hybrid of the cross. Self-cross and combinational cross of the ascospore-derived isolates generated hybrids that stably produce high quality fruiting body in artificial media.
To produce an artificial fruiting body of Armillaria mellea on the oak sawdust medium, seven strains of A. mellea were used. The top surface of oak sawdust medium covered with ground raw carrot was inoculated with each of 7 strains and cultured for 30 days at $25^{\circ}C$ in the dark condition until the mycelia of A. mellea completely colonized the medium from top to bottom. Then, the mycelia which were fully covered on the top surface of the medium were scratched slightly with a spatula and filled with tap water for 3 hours. To induce the primordial formation, the 7 strains of A. mellea were transferred to the growth chamber under the illumination (350 lux) of 12 hours and relative humidity of $85{\pm}5%$ in a day and then cultured at $16{\pm}1^{\circ}C$. Only A. mellea IUM 949 could form primordia on the sawdust medium, but the other strains did not make primordia at the same condition. The primordia of A. mellea IUM 949 were formed 10 days after complete colonization of the medium and the fruiting bodies were produced 7 days after a primordial formation. The experimental results suggested that IUM 949 strain might be a good candidate for mass production of fruiting bodies of A. mellea.
In the fungal genus Cordyceps, the type species Cordyceps militaris produces bioactive ingredients and exhibits medicinal effects as a Traditional Chinese Medicine (TCM), The fruiting bodies of C.militaris have now been mass-produced artificially and used as functional food and medicine in China. The unstable variation in forming fruiting body is however a key restrictive factor in industrial production. The genetic study on in vitro stromata formation of C. militaris has rarely been carried out. Here, we report the effects of genetic variation including the mating system on perithecial stromata formation of C. militaris. Monoconidial isolates which have both MAT1-1-1 and MAT1-2-1(genotype MAT1-1/2) could produce stromata. While the isolates only have either MAT1-1-1 or MAT1-2-1 (genotype MAT1-1 or MAT1-2) failed to produce stromata. Despite obvious heterothallism, homothallism was occasionally observed in a few isolates of C. militaris. High genetic variation was observed amongst the different monoconidial isolates of C. militaris. The unstable variation or lose of fruiting body formation was found to be caused by the inner-species high genetic variation of C. militaris. These results also indicated that C. militaris sexually behaved as both heterothallic and homothallic and required two mating type compatible in the same culture in order to produce regular clubshaped perithecial stromata.
경제적 부가 가치가 높은 붉은자루동충하초의 안정적 대량생산 기틀을 마련하고자 자실체 증식 특성 및 자실체 성분 분석을 한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 붉은자루동충하초의 감염률은 관행인 누에 5령 기잠시 분무 접종하는 방법보다 번데기 시기에 주사접종 하는 방법이 높았다. 2. 붉은자루동충하초의 자실체 발생은 온도 $21{\sim}25^{\circ}C$, 습도 91% 이상, 광 1500 lx 이상에서 양호하였다. 3. 붉은자루동충하초의 유리당 함량은 Glucose가 7.9 mg으로 가장 많았으며, 다음이 Sucrose 이었으며 Glycerol과 Mannitol은 미량 검출되었다. 4. 붉은자루동충하초의 누에 자실체에 함유된 아미노산의 총 함량은 $34.6{\mu}mole/g$이며, 16종의 구성 아미노산중 Arginine이 15.6%로 가장 높았으며, Lysine이 3.4%로 가장 낮게 분포하였다. 5. 붉은자루동충하초의 누에 자실체 유리 지방산 조성은 Oleic acid 함량이 가장 많았으며, Palmitoeic acid는 소량 함유되어 있었다. 6. 붉은자루동충하초의 누에 자실체 유기산 조성은 Citric acid가 가장 많았으며, Malic acid와 Propionic acid는 미량 존재하였다.
본 연구는 밀리타리스 동충하초의 교배형 유전자인 MAT1-1과 MAT1-2 두 종류에 특이적인 프라이머를 사용하여 multiplex PCR을 실시하였고, 그 결과 형성된 MAT1-1과 MAT1-2에 대한 233-bp와 191-bp에서 DNA 밴드를 통해 교배형 및 교배여부를 확인하였고 자실체 특성검정을 통해 품종특성이 우수한 새로운 동충하초 '도원홍초 2호'를 개발하였다. 신품종 '도원홍초 2호'의 자실체는 곤봉형이고 밝은 주황색을 띠었으며, 코디세핀 함량은 0.33%였고 자좌의 굵기와 길이는 각각 3.5 mm와 7.1 cm였다. '도원홍초'와 비교할 때, 새로운 '도원홍초 2호'의 수량은 7%가 증수되었고 경도가 높은 특징을 보였다. 균사생장의 적온은 $20{\sim}25^{\circ}C$였고 버섯 발생의 적온은 $18{\sim}22^{\circ}C$였으며, 접종에서부터 자실체 발생까지의 기간은 49.7일이 소요되었다. 신품종 '도원홍초2호'는 교배형 분자마커를 육종과정에 이용하여 효율성을 높였으며, 우수한 재배적 특성으로 동충하초 인공재배 및 산업적 생산에 기여할 것으로 판단된다.
Ganoerma lucidum의 인공재배(人工栽培)로 얻은 자실체(子實體)의 형태적(形態摘) 특성(特性)을 기초(基礎)로 계통(系統)을 분류(分類)하고 전기영동특성(電氣泳動特性)과의 관련성(關聯性)을 검토하였다. 영지균은 버섯의 형태(形態)와 윤문(輪紋)의 유무에 따라 4계통(系統)으로 분류(分類)되었으며 그중 편각 윤문형(輪紋形)이 가장 많았고 전형적 녹각형은 소수였다. 자실체(子實體)의 모양 즉 편각과 녹각, 갓 표면(表面)의 윤문(輪紋) 유무(有無)는 유전성(遺傳性)이었다. 영지균사(菌絲) 및 자실체(子實體)의 전기영동(電氣泳動)에 의한 단백질(蛋白質), Peroxidase, Esterase 및 Leucine Amino Peptidase Isozyme Pattern을 조사(調査)한 결과(結果) 한국자생영지균(韓國自生靈芝菌)은 유전형질(遺傳形質)에 다양성(多樣性)을 보였다. 그중 Esterase Isozyme Pattern은 편각과 녹각간에 차이가 컸고 동(同) 계통(系統)간에는 높은 유사도(類似度)를 보여 계통분류(系統分類) 결과(結果)와 일치하였다.
This study was carried out to obtain basic data on physiological characteristics for an artificial cultivation of fruiting body of C. pruinosa. C. pruinosa showed the most favorable growth on the MCM medium. The optimal condition for the mycelial growth was obtained at 25$^{\circ}C$ and pH 5.0, respectively. Carbon sources such as arabinose, mannose, xylose were favorable for stimulating a mycelial growth and fruiting bodies of C. pruinosa. Ammonium nitrate, ammonium citrate and ammonium tartrate of nitrogen sources also appeared to be good in the mycelial growth and fruiting body formation.
In order to elucidate the possibility of artificial production of p. ferulae by solid-state culture, the optimization of culture conditions was carried out. When $NH_4H_2PO_4$ and $CaCO_3$ were used in the cultures using test tube with 30 g of Populus sawdust at $25^{\circ}C{\pm}1$ in the dark, the favored mycelial growth was observed with $1\%$ of $NH_4H_2PO_4$ and the production of polysaccharide was 7.85 mg/100 mg of mycelium with $1\%$ of $CaCO_3$. The mixtures of $80\%$ of Populus Sawdust and $20\%$ of rice bran at $60\%$ of water content were determined to be optimal for the production of fruiting bodies in the sawdust culture. When three treatments containing various ratios of garlic powder were conducted, yields of fruiting bodies were drasti[ally higher than those of Synthetic mixture without garlic powder The highest yield (143 g/bag) was obtained with $7\%$ garlic powder. The yield of synthetic mixture containing $7\%$ of garlic powder was $83\%$ higher than that of Sawdust culture. The reason why garlic powder did support growth was not clear but it is possible that garlic powder might contain effective components for the formation of fruiting body. The optimal synthetic mixture composition consisted of cotton seed $77\%$, lime $6.4\%,\;K_2HPO_4\;0.2\%,\;KH_2PO_4\;0.2\%,\;CaHPO_4\;0.2\%$, corn flour $4\%$, wheat flour $5\%$, and garlic pow-der $7\%$.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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