Bacterial endospores, especially those of Bacillus and Clostridium genera, are the target of sterilization in various foods. We used Bacillus subtilis ATCC 6633 spores to screen novel antimicrobial substances against spores from medicinal plants. We collected 79 types of plant samples, comprising 42 types of herbs and spices and 37 types of medicinal plants used in traditional medicine in Korea and China. At a concentration of 1%(w/v), only 14 of the ethanol extracts exhibited antimicrobial activity against B. subtilis spores of at least 90%. Crude extracts of Torilis japonica, Gardenia jasminoides, Plantago asiatica, Fritllaria, and Arctium lappa showed particularly high sporicidal activities, reducing the spore count by about 99%. Consideration of several factors, including antimicrobial activity, extraction yields, and costs of raw materials, resulted in the selection of T. japonica, G. jasminoides, A. lappa, and Coriandrum sativum for the final screening of novel antimicrobial substances. Verification tests repeated 10 times over a 4-month period showed that the ethanol extract of T. japonica fruit reduced aerobic plate counts of B. subtilis spores the most, from $10^7$ to $10^4\;CFU/mL$ (99.9%) and with a standard deviation of 0.21%, indicating that this fruit is the most suitable for developing a novel antimicrobial substance for inactivating B. subtilis spores.
식품에 사용가능한 천연식품보존제를 개발하기 위하여 총 62종이 특용작물을 대상으로 실험하였다. 공시된 62종의 특용작물에 대한 물추출물 및 80% 에탄올 추출물을 제조하였으며 Escherchia coli, Listeria monocytogens 및 Candidia albicans의 3종의 미생물을 대상균주로 하여 paper disk method에 의해 항균력을 측정하였으며 그 결과 7종의 특용작물을 1차로 선발하였고 이후 정밀실험을 통하여 복분자 (Rubus coreanus miquel), 가자육(Therminalia chebula Retz), 오배자(Rhus javanica) 3종의 특용작물을 최종 선발하였다. 선발된 3종의 특용작물에 대한 항균 spectrum 측정 결과 가자육과 오배자 추출물이 비교적 넓은 항균 spectrum을 가지고 있었다. 최소성장억제농도인 MIC(minimal inhibition concentration)를 측정한 결과 가자육과 오배자 추출물이 낮은 수치의 MIC를 가지고 있는 것으로 나타났다. 액체배양시 균주의 성장억제에 미치는 영향을 측정한 결과 Listeria monocytogens에 대한 생육억제 활성이 매우 우수한 것으로 나타나 천연 식품보존제로서의 가능성이 있음을 알 수 있었다.
식물성 생약재의 항균력과 활성산소(superoxide anion, $O_2^-$)의 생산에 미치는 in vitro 효과를 조사하여 금후 in vivo 실험에 적용할 때, 어류 체내 자연 저항성 증진을 꾀할 수 있는 식물성 생약재를 발굴하기 위한 기초자료를 얻고자 하였다. 식물성 생약재는 고삼, 귀전우, 구절초, 박하, 방풍, 연교, 약쑥, 지유, 삼백초, 삼지구엽초, 상백피, 소회향, 편축, 팔각 등 14종류로 이들을 열수추출하여 실험에 사용하였다. 항균력 시험에는 어병세균 Listonella anguillarum(Vibrio anguillarum), Vibrio sp., Vibrio alginolyticus, Edwardsiella tarda, Streptococcus sp., Lactcoccus garvieae를 대상으로 disk법을 사용하였으며, 활성산소의 생산능은 넙치 신장 대식세포를 이용한 nitroblue tetrazolium(NBT) 반응으로써 조사하였다. 그 결과,약쑥이 다른 생약재에 비하여 시험에 사용된 어병 세균에 대한 항균활성이 월등히 뛰어났으며, 또한 넙치 대식세포의 활성산소 생산능을 크게 자극하는 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
토양 미생물인 방선균의 배양액으로부터 그람양성균에 대해 항균활성을 가지는 항균성 물질을 탐색하였다. 2,500주의 방선균 배양액을 탐색하여 항균성 물질 생산균주 Streptomyces sp. G9l353을 분리하였고, 그로부터 생산된 항균성 물질인 A91353을 분리 정제하였다. A91353은 다양한 구조해석 연구에 의하여 N-acetyl-phenylalanine으로 동정되었으며 Sc. pyogenes 308A, Sc. pyogenes 77A 등과 같은 그람양성균에 대해 선택적이며, D-alanyl-D-alanine과 상호작용 하여 그람양성균의 세포벽 합성을 저해하는 것으로 사료된다. N-acetyl-phenylalanine의 최소생육저해 농도는 그람양성균에 대해서 $50{\mu}g/ml$ 이었으며, 그람음성균에 대한 활성은 나타나지 않았다.
Allii sativi Bulbus(garlic) have been shown to possess medicinal value, in particular, antimicrobial activity. In this study, we compared the efficacy on some pathogenic bacteria and fungus among several different extracts(water, hexane, ethyl acetate, methanol, chloroform) of Allii sativi Bulbus. Animal pathogenic bacteria and fungus(S. gallinarium: KCTC 2441, S. flexneri: KCTC 2361, E. cloacae: KCTC 2006, K. pneumonia: KCTC 2208, C. albicans: KCTC 1940) were used to test by measurement of minimum inhibitory concentrations(MIC) and disc diffusion. Allii sativi Bulbus were cut and mixed with water at 37℃ about 24 h and filtered, and several different solvents(hexane, chloroform, ethyl acetate, methanol) were respectively added to separate the fraction of each solvent. The antimicrobial(bacteriocidal) and antifungal effect were apparently shown from water extract, hexane and ethyl acetate extract against using strains(Staphylococcus gallinarium, Shigella flexneri, Enterobacter doacae, Klebsiella pneumonia, Candida albicans). Especially, the water extract showed the superior efficacy. And the clear zone size of water extract (11~27 mm) was greater than that of gentamycin, hexane extract and ethyl acetate extract against S. gallinarium. S. flexneri, K. pneumonia and C. albicans. Minimum inhibitory concentrations(MIC) of water extract appeared to around 2.0~7.5 ㎎/㎖ against S. gallinarium, S. flexneri, E. cloacae and K. pneumonia. The greater activity was shown by water extract because the MIC of water extract for C. albicans observed in very low concentration(<1.0 ㎎/㎖) compared to hexane(5.0 ㎎/㎖) and ethyl acetate(10.0 ㎎/㎖). Therefore, these results exhibited that water extract of Allii sativi Bulbus have stronger antimicrobial activity than hexane and ethyl acetate extract, and may be useful as topical medicine of superficial infections causing C. albicans as well as antifungal agents.
천연식품보존제의 개발을 위해 우리나라 전지역에서 쉽게 구할 수 있고 산나물로 많이 이용되어온 질경이를 대상으로 식품부패미생물에 대한 항균효과를 검색하였다. 질경이 메탄을 추출물은 1.5mg/ml의 농도에서 곡류의 부패를 일으키는 B. subtilis와 호염균으로 식중독의 원인이 되는 V. parahaemolyticus의 성장을 완전히 억제하였다. 인공합성보존제인 Sodium propionate는 1%의 농도에서 B. subtilis는 80.97%, E.coli는 26.57%, S. aureus는 31.28%, L. monocytogenes는 72.71% 그리고 V. parahaemolyticus는 19.75% 저해되었으며 5% 농도에서는 5균주 모두 완전히 저해되었다. 이상의 결과로 볼 때 질경이의 메탄올추출물이 sodium propionate 보다 10배 낮은 저 농도에서 식품부패 미생물의 성장을 완전히 저해하는 것으로 나타났다. 또한 각 용매별로 분획하여 항균성을 살펴본 결과 ethylacetate 분획물이 다른 분획보다 높은 항균력을 보였는데 B. subtilis, E. coli와 V. parahaemolyticus는 1.0 mg/ml의 농도에서 성장이 저해되었다. 특히 chloroform 분획물은 S. aureus에 대하여 250$\mu\textrm{g}$/disc의 농도에서 강한 저해력을 보였다.
The increasing emergence of lead drugs for the resistance produced by the pathogenic strains and arrival of new diseases have initiated the need for searching novel metabolites with best anticancer and antimicrobial properties than the existing one. With this view, the investigation was conducted for the isolation, identification, and biological evaluation of potential endophytic fungi of Aegle marmelos, a medicinal tree used for more than three decades, for curing various disorders. A total of 169 endophytic fungal strains obtained from sampling and among those 67 were pigmented strains. Upon antagonistic screening, five endophytic fungal strains exhibited antagonistic potentiality by inhibiting the pathogens. These five potent strains were characterized at molecular level by sequencing the amplified internal transcribed spacer (ITS) 1 and ITS 4 regions of rDNA and they were grouped under order Pleosporales, Eurotiales, and Capnodiales. The metabolites from the respective strains were produced in fungal culturing media and extracted using polar solvents. Further, the extracts of five endophytes manifested antimicrobial activity against tested clinical pathogens and Alternaria alternata (FC39BY), Al. citrimacularis (FC8ABr), and Curvularia australiensis (FC2AP) exhibited significant antimicrobial profile against 9 of 12 tested pathogens, showing broad spectrum activity. The antioxidant levels of all the five endophytes revealed the highest activity at least concentrations, and major activity was unveiled by the members of order Pleosporales FC2AP and FC8ABr. This research explains the value of endophytic fungal extracts and its significance of antimicrobial and antioxidant properties.
Khong, Nicholas M.H.;Foo, Su Chern;Yau, Sook Kun;Chan, Kim Wei;Yusoff, Fatimah Md.
Fisheries and Aquatic Sciences
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제25권4호
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pp.189-201
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2022
Jellyfish is an emerging aquaculture species, farmed for Oriental cuisines and nutraceutical ingredients. This study aimed to examine antioxidative and antimicrobial potentials of various fractions of the jellyfish, Acromitus hardenbergi. The bell and oral arms of the jellyfish were sequentially extracted with petroleum ether (PE), dichloromethane (DCM), chloroform (CHCl3), methanol (MeOH), and water (H2O) to extract its bioactive in an increasing polarity gradient. Test fractions were assayed for antiradical activities using electron spin resonance spectrometry, β-carotene-linoleate model and Folin-Ciocalteu assay; and antimicrobial activity against 2 Gram-negative bacteria, 4 Gram-positive bacteria and 2 fungal species using the disc diffusion assay. All fractions were also subjected to Fourier Transform Infrared (FTIR) analysis to identify types of functional groups present. It was found that the hydrophilic extracts (H2O fractions) possessed the most effective radical scavenging activity (p < 0.05) while the lipophilic extracts (PE fractions) the most active antimicrobial activity, especially against Gram-positive bacteria (p < 0.05). Total oxidation substrates content was found to be highest in the PE fractions of jellyfish bell and oral arms (p < 0.05). FTIR data showed that the H2O and MeOH fractions contains similar functional groups including -OH, -C=O, -N-H and -S=O groups, while the PE, DCM, and CHCl3 fractions, the -CH3, -COOH groups. This study showed that A. hardenbergi contains antioxidants and antimicrobials, thereby supporting the traditional claim of the jellyfish as an anti-aging and health-promoting functional food. Bioassay-guided fractionation approach serves as a critical milestone for the strategic screening, purification, and elucidation of therapeutically significant actives from jellyfish.
This study explores beneficial bacteria isolated from the roots and rhizosphere soil of Khao Rai Leum Pua Phetchabun rice plants. A total of 315 bacterial isolates (KK001 to KK315) were obtained. Plant growth-promoting traits (phosphate solubilization and indole-3-acetic acid (IAA) production), and antimicrobial activity against three rice pathogens (Curvularia lunata NUF001, Bipolaris oryzae 2464, and Xanthomonas oryzae pv. oryzae) were assessed. KK074 was the most prolific in IAA production, generating 362.6 ± 28.0 ㎍/ml, and KK007 excelled in tricalcium phosphate solubilization, achieving 714.2 ± 12.1 ㎍/ml. In antimicrobial assays using the dual culture method, KK024 and KK281 exhibited strong inhibitory activity against C. lunata, and KK269 was particularly effective against B. oryzae. In the evaluation of antimicrobial metabolite production, KK281 and KK288 exhibited strong antifungal activities in cell-free supernatants. Given the superior performance of KK281, taxonomically identified as Bacillus sp. KK281, it was investigated further. Lipopeptide extracts from KK281 had significant antimicrobial activity against C. lunata and a minimum inhibitory concentration (MIC) of 3.1 mg/ml against X. oryzae pv. oryzae. LC-ESI-MS/MS analysis revealed the presence of surfactin in the lipopeptide extract. The crude extract was non-cytotoxic to the L-929 cell line at tested concentrations. In conclusion, the in vitro plant growth-promoting and disease-controlling attributes of Bacillus sp. KK281 make it a strong candidate for field evaluation to boost plant growth and manage disease in upland rice.
Anaerobic bacteria are suggested to be potential source for new antibiotics. In order to search for antibiotics from domestic origin, we collected 800 soil samples across Korean locations and could isolate as many as 989 anaerobic strains. Among them 10, strains were found to have good producing capacity of antibiotics. An anaerobe was finally selected due to secreting antibiotics having high antimicrobial activity towards multiple resistant microorganism(E coli JM 83) transformed by genetic engineering technique. Its morphological, physiological and biochemical charateristics were investigated, together with antimicrobial spectrum therefrom. On antimicrobial spectrum study, substance secreted from this strain, had no activities to fungus and yeast. The selected strain showed G(+) and coccal shape, on Gram, staining and electron scanning microscopy, respectively. Biochemically this strain utilized glucose, fructose lactose, sucrose, but did not arabinose, cellulose, rhamnose, sorbitol, trehalose, mannitol. Catalase test showed negative property. Optimal growth temperature was $37^{\circ}C$. The results obtained above suggest this strain Streptococcus faecium subspp. and we named it Streptococcus sp. An-21-1.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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