The flavor constituents and functionality of small kingfish were studied as affected by two stage enzyme hydrolysis (TSEH). Total free amino acid contents in water extract, autolytic extract and TSEH of small kingfish were 541.3 mg%, 8,245.3 mg% and 6,636.6 mg%, respectively. Major free amino acids in TSEH were hydroxyproline, glutamic acid, proline, leucine, phenylalanine, lysine, arginine. As for nucleotides and other bases, IMP, TMAO and total creatinine were principal components in TSEH. And the major inorganic ions in TSEH were Na, K, P, Cl and $PO_{4}$. Also TSEH of small kingfish revealed very higher Angiotensin-I converting enzyme inhibition effect than those of water and autolytic extract.
Protein-polysaccharides(PP) extracted from four species of gulfweed, fusiforme, sea-mustard and sea-tangle were examined for antitumor activity toward sarcoma-180 implanted in mice, ICR. Polysaccharides in protein-polysaccharides extracted from gulfweed, fusiforme, sea-mustard and sea-tangle were 61.48, 55.61, 34.06 and 30.28%, respectively. Monosaccharides of four seaweeds consisted of glucose, galactose, mannose, fructose and xylose, and major amino acids consisted of glutamic acid, aspartic acid, cystein, valine and glycine. Antitumor activity of the protein-polysaccharides extracted from sea-mustard showed the highest inhibition ratio of 69.76% when PP was injected to the mice at the dose of 100mg/Kg/day. PP of sea-tangle showed the maximum survival ratio of 25.22% when injected at the dose of 100mg/Kg/day.
Phospholamban is the regulator of $Ca^{2+}-ATPase$ in cardiac sarcoplasmic reticulum(SR). The mechanism of regulation appears to involve inhibition by dephosphorylated phospholamban. Phosphorylation of phospholamban relieves this inhibition. Recently, there has been a report that the cytoplasmic domain (amino acids 1-25) of phospholamban is insufficient to inhibit the $Ca^{2+}$ pump. To explore the domains of phospholamban responsible for $Ca^{2+}-ATPase$ inhibitory activity, we examined the effect of a synthetic phospholamban peptide consisting of amino acid residues 1-25 on $Ca^{2+}$ uptake by reconstituted skeletal SR $Ca^{2+}-ATPase$. The $Ca^{2+}-ATPase$ of skeletal SR was purified and reconstituted in proteoliposomes containing phosphatidylcholine (PC) or phosphatidylcholine: phosphatidylserine (PC:PS). Inclusion of a phospholamban peptide in PC proteoliposomes was associated with significant inhibition of the initial rates of $Ca^{2+}$ uptake at pCa 6.0, and phosphorylation of this peptide by the catalytic subunit of cAMP-dependent protein kinase reversed the inhibitory effect on the $Ca^{2+}$ pump. Similar effects of phospholamban peptide were also observed using PC:PS proteoliposomes. Based on these results, we could conclude that the cytoplasmic domain of phospholamban, containing the phosphorylation sites, by itself is sufficient to inhibit the $Ca^{2+}$ pump of SR.
Jung, Yu Jin;Nogoy, Franz Marielle;Cho, Yong-Gu;Kang, Kwon Kyoo
Journal of Plant Biotechnology
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v.42
no.3
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pp.186-195
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2015
Anthranilate synthase (AS) is a key enzyme in the biosynthesis of tryptophan (Trp), which is the precursor of bioactive metabolites like indole-3-acetic acid and other indole alkaloids. Alpha anthranilate synthase 2 (OsASA2) plays a critical role in the feedback inhibition of tryptophan biosynthesis. In this study, two vectors with single (F124V) and double (S126F/L530D) point mutations of the OsASA2 gene for feedback-insensitive ${\alpha}$ subunit of rice anthranilate synthase were constructed and transformed into wildtype Dongjinbyeo by Agrobacterium-mediated transformation. Transgenic single and double mutant lines were selected as a single copy using TaqMan PCR utilized nos gene probe. To select intergenic lines, the flanking sequence of RB or LB was digested with a BfaI enzyme. Four intergenic lines were selected using a flanking sequence tagged (FST) analysis. Expression in rice (Oryza sativa L.) of the transgenes resulted in the accumulation of tryptophan (Trp), indole-3-acetonitrile (IAN), and indole-3-acetic acid (IAA) in leaves and tryptophan content as a free amino acid in seeds also increased up to 30 times relative to the wildtype. Two homozygous event lines, S-TG1 and D-TG1, were selected for characterization of agronomic traits and metabolite profiling of seeds. Differentially expressed genes (DEGs), related to ion transfer and nutrient supply, were upregulated and DEGs related to co-enzymes that work as functional genes were down regulated. These results suggest that two homozygous event lines may prove effective for the breeding of crops with an increased level of free tryptophan content.
Hwang, Chung Eun;Joo, Ok Soo;Lee, Jin Hwan;Song, Yeong Hun;Hwang, In Guk;Cho, Kye Man
Food Science and Preservation
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v.24
no.1
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pp.134-144
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2017
This study evaluated the changes of physiochemical properties, phytochemical compounds (isoflavones and phenolic acids), and biological activity during the fermentation of Doenjang without and with bitter melon powder (BMP). The pH decreased from 6.41-5.83 to 5.81-5.24, during the fermentation of Doenjang, while the acidity increased from 0.42-0.65% to 1.28-1.48%. The viable cell numbers of Bacillus and Yeast, salinity, and total amino acid contents increased at the end fermentation (60 day). Also, the fermented Doenjang (FD) with 10% BMP showed the highest ${\gamma}$-aminobutyric acid (GABA, 129.87 mg/100 g) contents, among all the Doenjang samples. The FD exhibited significantly higher inhibitory activities than unfermented Doenjang (UFD) on radicals and ${\alpha}$-glucosidase. The phytochemical compounds including isoflavone-aglycones and phenolic acids increased, whereas isoflavoneglycosides decreased in the BM following fermentative processing. Moreover, the total phenolic, isoflavone-aglycone, and phenolic acid contents were markedly increased, leading to a general increase in antioxidant and ${\alpha}$-glucosidase inhibition activities after fermentation. These results suggest that BMP may be used to prepare a new type of fermented Doenjang with improved antioxidant and antidiabetic activities.
Joo, Ok Soo;Hwang, Chung Eun;Hong, Su Young;Sin, Eui Cheol;Nam, Sang Hae;Cho, Kye Man
Food Science and Preservation
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v.25
no.1
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pp.124-135
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2018
This study investigated the nutritional properties and biological activities of Ganoderma lucidum (GL). The round type of GL contained higher carbohydrate content, while the Nokgak type of GL contained higher crude ash, crude fat, and crude protein content. The most abundant amino acid, fatty acid, mineral, and soluble vitamin observed were valine (round type: 11.90 mg/g and Nokgak type: 17.18 mg/g), linoleic acid (round type: 47.56% and Nokgak type: 75.68%), potassium (round type: 116.50 mg/100 g and Nokgak type: 184.36 mg/100 g), and vitamin B3 (round type: 1.78 mg/100 g and Nokgak type: 1.81 mg/100 g), respectively. In addition, the ${\beta}$-glucan content were 34.15 g/100 g (round type) and 30.07 g/100 g (Nokgak type). The GL 70% ethanol extract at $40^{\circ}C$ showed higher radical scavenging as well as carbohydrate and lipid enzyme inhibition than other conditions. At 1 mg/mL of treatment with the 70% ethanol extract at $40^{\circ}C$ of round type GL, the DPPH, ABTS, hydroxyl radical scavenging, and ${\alpha}$-glucosidase, ${\alpha}$-amylase, and pancreatic lipase inhibition activities obtained were approximately 92.85, 99.74, 58.09, 89.68, 44.68, and 67.56%, respectively.
Shen, Wen;Chen, Kaili;Sun, Yanming;Guo, Haiying;Chen, Dongmei;Cao, Yang
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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v.30
no.5
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pp.736-742
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2017
Objective: Experiments were conducted to clone the sequence of Wild Argali short palate, lung and nasal epithelium clone 1 (SPLUNC1) cDNA, and to lay the foundation for further study the biological function of Wild Argali SPLUNC1. Methods: The complete sequence of Wild Argali SPLUNC1 cDNA was generated by rapid amplification of cDNA ends. The entire coding sequence was inserted into the pPIC9K vector and expressed in Pichia pastoris (P. pastoris) GS115. The recombinant SPLUNC1 protein was detected by Western blot and purified by $Ni^{2+}$ chelate affinity chromatography. The test of effect of the protein on Mycoplasma ovipneumoniae (MO) was performed with real-time polymerase chain reaction. Results: The Wild Argali SPLUNC1 cDNA was 1,076 bp with an open reading frame of 768 bp, which encoded a 26.49 kDa protein composed of 255 amino acids. Its amino acid sequence shared 98.4%, 96.9%, 94.5%, 90.2%, 80.8%, 78.4%, 78.3%, 72.5%, 72.3%, 68.8% identity with those of SPLUNC1 cDNA from Ovis aries (accession no. NP_001288334.1), Capra hircus (accession no. XP_005688516.1), Pantholops hodgsonii (accession no. XP_005979709.1), Bos taurus (accession no. NP_776851.1), Felis catus (accession no. XP_006929910.1), Homo sapiens (accession no. NP_001230122.1), Sus scrofa (accession no. NP_001005727.1), Chinchilla lanigera (accession no. NP_001269294.1), Mus musculus (accession no. NP_035256.2), and Rattus norvegicus (accession no. NP_742028.1), respectively. The recombinant protein corresponded to the expected molecular mass of 25.47 kDa as judged by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, and it was detected in the supernatant of P. pastoris, and it could be purified. The results from the test of inhibition effect of argali recombinant SPLUNC1 protein on MO showed that the product could inhibit MO very well (p<0.01). Conclusion: The amino acid sequence of Wild Argali SPLUNC1 was different from other organisms. The recombinant SPLUNC1 protein has good biological activity.
This study was undertaken to elucidate the underlying mechanisms of ATP depletion-induced membrane transport dysfunction and cell death in renal proximal tubular cells. ATP depletion was induced by incubating cells with 2.5 mM potassium cyanide(KCN)/0.1 mM iodoacetic acid(IAA), and membrane transport function and cell viability were evaluated by measuring $Na^+$-dependent phosphate uptake and trypan blue exclusion, respectively. ATP depletion resulted in a decrease in $Na^+$-dependent phosphate uptake and cell viability in a time-dependent manner. ATP depletion inhibited $Na^+$-dependent phosphate uptake in cells, when treated with 2 mM ouabain, a $Na^+$ pump-specific inhibitor, suggesting that ATP depletion impairs membrane transport functional integrity. Alterations in $Na^+$-dependent phosphate uptake and cell viability induced by ATP depletion were prevented by the hydrogen peroxide scavenger such as catalase and the hydroxyl radical scavengers(dimethylthiourea and thiourea), and amino acids(glycine and alanine). ATP depletion caused arachidonic acid release and increased mRNA levels of cytosolic phospholipase $A_2(cPLA_2)$. The ATP depletion-dependent arachidonic acid release was inhibited by $cPLA_2$ specific inhibitor $AACOCF_3$. ATP depletion-induced alterations in $Na^+$-dependent phosphate uptake and cell viability were prevented by $AACOCF_3$. Inhibition of $Na^+$-dependent phosphate uptake by ATP depletion was prevented by antipain and leupetin, serine/cysteine protease inhibitors, whereas ATP depletion-induced cell death was not altered by these agents. These results indicate that ATP depletion-induced alterations in membrane transport function and cell viability are due to reactive oxygen species generation and $cPLA_2$ activation in renal proximal tubular cells. In addition, the present data suggest that serine/cysteine proteases play an important role in membrane transport dysfunction, but not cell death, induced by ATP depletion.
Bioactive peptides (BAP) showed excellent cosmetic activity than bio-materials such as caffeic acid (CA), gallic acid (GA), and nicotinic acid (NA). Caffeoyl tripeptide-1 (CT-1) is a BAP that is stabilized with Gly-His-Lys (GHK) tripeptide and CA by using Fmoc solid phase peptide synthesis. Digalloyl tetrapeptide-19 (DT-19) is stabilized by combining Lys-Glu-Cys-Gly with GA and nicotinoyl tripeptide-1 (NT-1) is synthesized by GHK and NA. According to experiments, CT-1 has an excellent anti-oxidant function even with a very small amount of 10 ppm CT-1. DT-19's tyrosinase inhibition activity has the better effect of about 28.57% in 0.01% and 33.33% in 0.005% of concentration and about 7.89% in 0.001% concentration than vitamin-C. In addition, NT-1 is safer than the NA. Almost BAPs like pal-KTTKS, acetyl hexapeptide, and copper tripeptide-1 have the anti-wrinkle effect while DT-19 and NT-1 are applicable for potential BAPs focused on the whitening effect. The three kinds of BAPs like CT-1, DT-19, and NT-1 consisting of amino acids are safe to the skin, and have more excellent stability than bio-materials which are found to be unstable and cause skin irritation. Due to the high biological activity of BAP in the field of skin care, its utilization will increase constantly.
The purpose of this study is to observe purification and properties of osteopontin(OPN) from bovine milk. The purification of osteopontin from bovine milk was performed by using ion-exchange and hydrophobic chromatography. SDS-PAGE analysis revealed that the protein migrated at Mw. 60,000. NH2-terminal sequence analysis of the first seven amio acids revealed the protein to be identical to that previously reported for bovine OPN. 35-wk-old chickens, including 3 Single Comb White Leghorn (SCWL), were used to produce egg yolk antibody(IgY) against OPNas a antigen. However, the anti-OPN antibody activities determined by ELISA. Immunological assy of OPN in milk was performed using radial immunodiffusion test based on the standard curve of pure OPN. The radial precipitation lines of four different milk samples indicated that the concentrations of OPN in the milk samples were within the range of 31.7 to 39.7${\mu}g$/ml. On inhibition with OPN on precipitation of calcium phosphate, OPN was slightly higher than casein phosphopeptide(CPP) and poly-glutamic acid.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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