Han, Yoo Ri;Youn, So Youn;Ji, Geun Eog;Park, Myeong Soo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제24권5호
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pp.675-682
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2014
Approximately 50% of people in the world experience abdominal flatulence after the intake of foods containing galactosides such as lactose or soybean oligosaccharides. The galactoside hydrolyzing enzymes of ${\alpha}$- and ${\beta}$-galactosidases have been shown to reduce the levels of galactosides in both the food matrix and the human gastrointestinal tract. This study aimed to optimize the production of ${\alpha}$- and ${\beta}$-galactosidases of Bifidobacterium longum subsp. longum RD47 with a basal medium containing whey and corn steep liquor. The activities of both enzymes were determined after culturing at $37^{\circ}C$ at pH 6.0 for 30 h. The optimal production of ${\alpha}$- and ${\beta}$-galactosidases was obtained with soybean oligosaccharides as a carbon source and proteose peptone no. 3 as a nitrogen source. The optimum pH for both ${\alpha}$- and ${\beta}$-galactosidases was 6.0. The optimum temperatures were $35^{\circ}C$ for ${\alpha}$-galactosidase and $37^{\circ}C$ for ${\beta}$-galactosidase. They showed temperature stability up to $37^{\circ}C$. At a 1 mM concentration of metal ions, $CuSO_4$ inhibited the activities of ${\alpha}$- and ${\beta}$-galactosidases by 35% and 50%, respectively. On the basis of the results obtained in this study, B. longum RD47 may be used for the production of ${\alpha}$- and ${\beta}$-galactosidases, which may reduce the levels of flatulence factors.
A plasmid vector, pXGPRMATG-lac-Tgx, was developed for overproduction of $\beta$-galactosidase in Escherichia coli using the genetic components of groEx, a heat-shock gene cloned from symbiotic X-bacteria in Amoeba proteus. The vector is composed of intragenic promoters P3 and P4 of groEx, the structural gene of lac operon, transcription tenninator signals of lac and groEx, and ColEl and amp'of pBluescript SKII. The optimized host, E. coli DH5$\alpha$, transfonned with the vector constitutively produced 117,310-171,961 Miller units of $\beta$-galactosidase per mg protein in crude extract. The amount of enzyme in crude extract was 53% of total water-soluble proteins. About 43% of the enzyme could be purified to a specific activity of 322,249 Miller units/mg protein after two-fold purification, using two cycles of precipitation with ammonium sulfate and one step of gel filtration. Thus, the expression system developed in this study presents a low-cost and simple method for purifying overproduced $\beta$-galactosidase in E. coli.
수박의 형태적 변이의 유전적 원인을 분석해 보기 위해 8개 계통에서 re-sequencing을 수행하였다. 유전적 변이의 수는 염색체에 따라 다르게 나왔으며 발견된 SNP의 약 12.9%만이 유전자내에서 발견되었고 나머지는 프로모터나 유전자 사이의 지역에서 발견되었다. SNP 밀도에 대한 분석 결과 염색체 6번의 말단지역에 변이가 집중되어 있는 것을 알 수 있었다. 또한 염색체 10과 11번에 잘 보존된 지역을 발견하였다. Pathway 분석을 통해 DIMBOA(일종의 항생제)-glucoside 분해 대사가 계통간 가장 차이나는 것으로 확인되었으며 이는 각 계통의 병저항성에서 차이가날 가능성을 시사하는 것이다. 당대사 관련 유전자 변이를 분석한 결과 alpha-galactosidase 유전자에 가장 변이가 많은 것으로 밝혀졌다. 이러한 연구 결과는 육종을 분자수준에서 이해하는 데 도움을 줄 것으로 생각한다.
Fabry disease (FD) is a rare X-linked lysosomal storage disorder caused by the deficiency of ${\alpha}$-galactosidase A. Patients with classical FD present acroparesthesia, hypohidrosis, cornea verticillata, disseminated angiokeratoma, and microalbuminuria in childhood, and develop life-threatening renal, cardiac, and cerebrovascular complications typically after the fourth decade of life. To date, more than 700 mutations responsible for FD have been identified in the human GLA gene. Herein, we report a novel GLA mutation, c.1117_1141del25 (p.Gly373Profs*10), identified in an 11-year-old Korean boy with FD presenting early cardiac and neurologic manifestation and in other affected family members. The boy had acroparesthesia, hypohidrosis, cornea verticillata, and left ventricular hypertrophy. His mother and sister also had acroparesthesia. Two males on the mother's side had similar pain and died of unknown causes. The plasma ${\alpha}$-galactosidase A activity (4.1 nmol/hr/mg protein) of the patient was markedly lower than the mean value of the controls. The plasma level of globotriaosylsphingosine was elevated in the patient and all the carriers. We concluded the novel GLA mutation c.1117_1141del25 is a pathogenic mutation for FD, probably related to the early cardiac manifestation of FD.
파브리병(Fabry disease)은 매우 드문 X-연관 유전 대사 질환으로 알파 갈락토시다아제(alpha galactosidase A)의 결핍으로 인하여 다양한 세포 및 기관에 글리코스핑고지질(glycosphingolipid)의 축적을 초래하는 질환이다. 심장 침범이 비교적 흔하며 비정상적인 지질침착으로 인한 심근 염증, 좌심실 비대 및 심근 섬유증을 일으킨다. 심장 침범은 환자 예후를 결정하는 중요한 요인이므로 이를 진단하는 것은 매우 중요하다. 심장 자기공명영상은 심실의 기능, 부피 측정을 위한 표준기법으로 알려져 있으며 심근의 조직 변화를 볼 수 있는 유용한 기법이다. 특히 최근 많이 쓰이는 T1 지도화 기법을 통한 심근 조영 전 T1 수치를 이용하여 파브리병의 심장 침범을 조기 진단할 수 있으며 자기공명영상을 이용한 심근 질량 측정으로 치료 모니터링을 할 수 있다. 심장 자기공명영상은 파브리병 환자에서 다양한 역할을 할 수 있을 것으로 생각되며 이에 대해 정리해보고자 한다.
Enzyme activities, production of killer toxin and some functionality of forty seven yeasts isolated from traditional Meju were investigated in culture broth and cell free extracts. Activities of $\alpha$-galactosidase, invertase and inulinase were detected in cell free extracts of 38 strains, 43 strains and 45 strains, respectively and acidic and neutral protease activities also were detected in culture broth of all the strains, $\beta$-Galactosidase activity was detected in cell free extracts of OE-20 and S-14 strains. Killer toxins were produced by OE-12, S-8 (Candida spp.), OE-19 (Zygosaccharomyces spp.) and S-3 (Saccharomyces spp.). Culture broth of OE-23 and S-9 showed 61.3% and 59.2% of antioxidant activity to $\alpha$, $\alpha$-diphenyl-$\beta$-picrylhydrazyl(DPPH), but nitrite-scavenging ability as well as inhibition of tyrosinase and polyphenol oxidase were not appeared in all the strains.
A novel strategy was developed for isolating suppressors from sporulation-deficient mutants. The mutation in the BCY1 gene, which codes for the regulatory subunit of cAMP-dependent protein kinase, when homozygous, results in diploids being meiosis and sporulation deficient. Two plasmids, YCp-MAT.alpha. and YEp-SPOT7-lacZ, were introduced into MAT.alpha. BCY1$\^$+/ or MAT.alpha. bcy1 haploid cells. The transformant of the BCY1$\^$+/ haploid cell produced .betha.-galactosidase under nutrient starvation, but the bcy1 transformant did not. Using this system, the mutagenesis experiment performed on the bcy1 transformant strain resulted in a number of sporulation mutants that produced .betha.-galactosidase under nutrient starvation. One complementation group, sob1, was identified from the isoalted suppressor mutants and characterized as a single recessive mutation by tetrad analysis. Genetic analysis revealed that the sob1 mutation suppressed the sporulation deficiency, the failure to arrest at the G1 phase of the cell cecle, and the sensitivity to heat or nitrogen starvation caused by the bcy1 mutation. However, the sob1 mutation did not suppress the sporulation deficiency of ime1 and of ime2 diploids. These results suggest that the sob1 mutation affects a gene which functions as a downstream regulator in both meiosis and cell cycle regulation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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