• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제12권2호
• /
• pp.196-203
• /
• 2002

A novel process for urokinase purification was studied using p-aminobenzamidine as the ligand and sepharose 4B as the matrix. The adsorption, washing, and elution conditions were optimized by an unusual method. An adsorption buffer containing 2.5 M NaCl and $1\%$ Tween 80 facilitated the adsorption of urokinase on the affinity media and prevented contaminants from binding to the p-aminobenzamidine affinity gel. It was found that $5\%$ Tween 80 removed most of the contaminants from the affinity column. A 0.2 M glycine elution buffer containing 0.5 M NaCl (pH 3.0) was found to have a strong elution ability with a high recovery and purity of urokinase. A crude urokinase material of231 IU/mg protein from human urine was purified to 124,300 IU/mg protein with a purification factor of 538 and yield of $86.7\%$. As a result, a high purity urokinase was obtained with only a single affinity chromatography step. The purification process was successfully scaled-up to a 2-1 chromatography column. The resulting urokinase eluate could be directly lyophilized, thereby complying with Chinese pharmacopoeia (1995 version) standards.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제50권2호
• /
• pp.107-110
• /
• 2007

일반적 대장균 배지 조건에서는 발현되지 않는 대장균 K-12의 laccase gene(yacK)을 PCR로 증폭한 후 pET28c에 클로닝하여 과량 발현시켰다. 과량 생산된 laccase를 His-affinity 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다. SDS-PAGE 방법으로 확인한 과량 발현된 단백질의 분자량은 약 55,000이었으며, guaiacol 용액과 agar 배지에서 역가를 보여주었고 최적 온도는 65$^{\circ}C$, 최적 pH는 5이었다.

• 미생물학회지
• /
• 제21권4호
• /
• pp.221-228
• /
• 1983

Saccharomyces cerevisiae로 부터 glucose-6-phosphate dehydrogenase을 신속하고 간편하게 정제하는 과정을 affinity chromatography를 이용하여 개발하였다. 이 효소를 정제하는데 적절한 affinity medium을 조사해 본 결과, $NADP^+ -agarose$와 Affi-gel Blue(Cibacron Blue F3GA)가 Affi-gel Red(Procion Red HE-3B), AMP-agarose, ATP-agarose, 그리고 $NADP^+ -agarose$보다 유용함이 밝혀졌다. 이 두가지 affinity media에 흡착된 효소를 분리 하는데 가장 적합한 elution 조건을 조사하였는데 KCI gradient( (0-1.OM)가 효소의 순도 및 수회율을 가장 높일 수 있는 적합한 방법이었다. 특히 Affi-gel Blue를 사용할 경우, KCI gradient로 효소를 용출시키기 전에 NAD-(15mM)로NAD+에 친화역을 갖는 효소들을 제거하는 것이 enzyme의 순도를 높이는데 매우 효과적이었다. 그 결과 glucose-6-phosphate dehydrogenase를 baker's yeast로 부터 기존의 간단한 정제 과정과 affinity chromatography를 병행한 방식을 샤용하여 분리 하였는데, affinity medium으로 Affi-gel Blue를 사용했을 때는 180배 정도, NADP+-agarose를 사용했을 때는 2,000배 정도로 정제 되었다. 대량으로 glucose-6-phosphate dehydrogenase를 정제하는 경우, Affi-gel Blue를 사용하던 효소의 순도는 NADP+-agarose보다 낮으나, 효소의 회수율은 훨씬 더 높았다. 또한 G-6-P dehydrogenase에 대한 affinity medium의 capacity도 Affi-gel Blue가 NADP+-agarose보다 5배정도 높았으며 더우기 Affi-gel Blue는 여러번 반복적으로 사용될 수 있고, 그 제조 과정도 NADP+-agarose보다 간단하며 경비도 적게 들었다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제31권2호
• /
• pp.201-204
• /
• 2003

Glycopeptide antibiotics, teicoplanin was purified from a mutant strain of Actinoplanes teichomyceticus ATCC31121, A. teichomyceticus MSL2211. We developed a simple procedure to separate and purify the teicoplanin from the fermentation broth. Teicoplanin was purified by two-step purification system, hydrophobic adsorption and sugar affinity chromatography in combination with HPLC analysis based on the properties of hydrophobic acyl chain and sugar moiety in teicoplanin. Teicoplanin was separated from the culture broth by Diaion HP-20 and further purified by concanavalin A affinity column chromatography. As an adsorbent resin, Diaion HP-20 in broth eliminated toxic effects on growth, reduced feedback repression of teicoplanin production, and assisted In rapid recovery of teicoplanin. The teicoplanin displayed the final yield of 80% and 95% of purity.

• 약학회지
• /
• 제52권1호
• /
• pp.79-84
• /
• 2008

Alismatis Rhizoma has been used as diuretics and antiphlogistics in the Chinese oriental medicine. A trypsin inhibitor was isolated from Alismatis Rhizoma using DEAE ion exchange column, trypsin affinity column, and FPLC chromatography, and its activity and characteristics were studied. The purifed Alismatis Rhizoma trypsin inhibitor (ARTI) was estimated to be about 22 kDa. The sequence determination on N-terminal amino acid residues and 84 amino acid residues has been completed, yet no homology has been found with trypsin inhibitors reported at NCBI. ARTI did not show inhibitory activities on chymotrypsin and elastase, however it exhibited a significant inhibitory activity on bovine trypsin, and formed a complex with rat liver 10-formyltetrahydrofolate dehydrogenase.

• 한국식품위생안전성학회지
• /
• 제8권4호
• /
• pp.251-254
• /
• 1993

Extraction and Clean-up procedures coupled with quantitation by high performance liquid chromatography(HPLC) was evaluated for the detection of 4 aflatoxins, B1, B2, G1 and G2, in peanut butter. The Sep-pak clean-up method showed poorer separation and repeatability than did the modified DeVries' and an immunoaffinity column clean-up methods. No significant difference of detected aflatoxins between the affinity column clean-up and modified DeVries' method. The coefficients of variation for the 4 aflatoxins were ranging from 6.3∼32.3 by the modified DeVries' method and 5.3∼9.8 by the affinity column clean-up.

• 멤브레인
• /
• 제8권1호
• /
• pp.50-58
• /
• 1998

Polysulfone 재질의 다공성 평판막 및 실관막에 키토산 피막층을 형성시킨 후 반응성 염료인 Cibacron Blue 3GA를 고정화시켜 human serum albumin(HSA)의 결합용량이 최대 70 $\mu{g/cm}^2$인 단백질 친화성 막을 제조하였다. 친화성 평판막 모듈을 대상으로 HSA에 대한 용출 크로마토그래피 실험을 수행하여 eluent 용액의 최적 환경조건을 결정하였는바, 1M KCl이 첨가된 농도 0.06 M, pH 10의 universal buffer를 eluent로 사용했을 때 리간드와 결합된 단백질의 용출이 가장 우수하였다. 친화성 평판막 및 실관막 모듈을 대상으로 HSA의 전열 크로마토그래피 실험을 수행하여 단백질에 대한 동적 결합용량을 측정하였다. 이 결과 동적 결합용량은 평판막 모듈의 경우에는 loading 용액의 유량과 HSA의 농도가 증가함에 따라 평형 결합용량 값으로부터 크게 감소하였으나, 실관막 모듈의 경우에는 loading 용액의 유량과 HSA의 농도에 관계없이 항상 평형 결합용량 수준을 유지하였는바, 따라서 실관막 모듈이 평판막 모듈보다 단백질 친화성 크로마토그래피 분리관으로서 더 효과적이었다.

• Journal of Dairy Science and Biotechnology
• /
• 제15권1호
• /
• pp.1-9
• /
• 1997

본 실험에서는 한우초유를 33% ammonium sulfate 포화용액으로 처리하여 조면역글로블린을 얻은 후 gel filtration, ion-exchange chromatography를 이용하여 조면역글로블린의 분리 정도를 조사하고 affinity chromatography column을 이용하여 조면역글로블린으로 부터 Ig G의 결합정도를 알아보고 Protein G Sepharose fast flow system을 이용하여 신속하게 대량으로 Ig G의 분리를 꾀하여 얻어진 Ig G를 이용하여 ELISA방법으로 항체 생성유무를 측정하였으며, 그 결과는 다음과 같다. 1. HPLC상에서 Superose 12 column을 이 용하여 한우초유의 조면역글로블린을 분리한 결과 Holstein초유의 조면역글로블린과 유사한 분리정도를 나타냈지만 약 84%의 Ig G를 한우초유의 조면역글로블린으로 부터 분리할 수 있었다. 2. Mono Q를 이용하여 HPLC에서 한우초유의 조면역글로블린을 gel filtration방법보다 짧은 시간에 분리할 수 있었지만 그다지 분리 정도가 좋지 않은 것으로 나타났다. 3. Hi-trap protein G column이 protein A sepharose CL-4B column보다 더 많은 양의 Ig G를 한우초유의 조면역글로블린으로 부터 얻을 수가 있었다. 4. Protein G Sepharose fast flow system을 이용하여 20mg의 sample양을 주입하여도 충분히 Ig G를 분리할 수 있었으며, ml 당 약 1.25mg의 Ig G를 얻을 수가 있었다. 5. ELISA방법을 이용하여 한우초유의 Ig G에 대한 항체 생성 유무를 측정한 결과, 면역화된 토끼에서 정상 토끼의 혈청에서보다 titer가 높게 나타났으므로 항체생성이 확인되었다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
• /
• 한국생물공학회 2001년도 추계학술발표대회
• /
• pp.221-224
• /
• 2001

Effect of hyperosmotic pressure on growth of recombinant Chinese hamster 。 vary cells and Erythropoietin (EPO) production was investigated. Cells were cultivated in batch modes at various osmolalities. When the osmolality increased from 314 to 463mOsm/Kg, specific EPO productivity (qp) was increased up to 1.6-fold but cell growth was inhibited. EPO has a complex oligosaccharide structure that plays an important role in biological activity in vivo. To investigate the influence of hypoerosmotic pressure on the glycosylation, structural analysis of oligosaccharide was calTied out. Recombinant human EPO was produced by CHO cells grown under various osmotic pressure and purified from culture supernatants by heparin-sepharose affinity column and immunoaffinity column. N-linked oligosaccharides were released enzymatically and isolated by paper chromatography. The isolated oligosaccharides were labeled with fluorescent dye, 2-aminobenzamide and analyzed with MonoQ anion exchange chromatography and GlycosepN amide chromatography for the assignment of GU (glucose unit) value. Glycan analysis by HPLC showed that neutral (asialo) oligosaccharide was increased slightly with an increase in osmolality. In portion of sialylated glycan, total relative amount of mono- and di-sialyated glycan was increased but that of tri- and tetra-sialylated glycan decreased as osmolality was increased.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제29권1호
• /
• pp.1-8
• /
• 1991

스파르가눔 생리식염수 추출액 내에 포함되어 있는 성분단백질 중 스파르가눔증 환자 혈청내 특이 IgG항체와 민감하고 특이하게 반응하는 항원단벼질인 36, 29 kDa단백질을 단세포군 항체를 이용한 면역친화성 크로마토그 래피로 순수분리할 수 있음은 이미 보고하였다. 이 연구에서는 스파르가눔 추출액 내에 포함된 이 36, 29 kDa단백질이 젤라틴을 고리로 한 친화성 크로마토그래피로 훨씬 쉽게 순수분리할 수 있음을 증명하고자 하였다. 젤라틴을 고리로 부착시킨 Sepharose 4B column에 스파르가눔 추출액을 통과시키고 젤라틴에 부착한 단백질은 4 M urea/0.1M NaCl 용액을 분리완충액으로 분리하였다. 이렇게 분리한 단백질은 SDS-PAGE에서 36, 29 kDa band로 구성되어 있었고, SDS-PAGE/immunoblot 결과 환자의 polyclonal 항체는 이들 band에만 반응하였다. 스파르가눔증, 기타 기생충증 환자 및 건강대조군 혈청내 스파르가눔 특이항체가(IgG)를 면역효소측정 법으로 측정 한 결과 순수분리한 이 단백질은 특히 특이도가 95.8%로 생리식염수 추출액의 89%보다 우수하였고 민감도는 차이가 없었다. 이상의 결과는 젤라틴을 고리로 이용한 친화성 크로마토그래피는 스파르가눔 생리식염수 추출액 내의 36 및 29 kDa 단백질을 간편하게 순수분리할 수 있고 단백질의 항원성도 유지할 수 있음을 보이고 있었다.