Phenazine 1-carboxylic acid (PCA) is an antifungal antibiotic isolated from a culture filtrate of Bacillus sp. B-6 producing an acyl CoA synthetase inhibitor. This antibiotic is reported as an inhibitor of an acyl CoA synthetase from Pseudomonas sp.. Bacillus sp. B-6 was resistant to PCA up to 350 ${\mu}g/ml$. We investigated the mechanism of the resistance of Bacillus sp. B-6 to PCA. The rate of growth in a medium containing up to 100 ${\mu}g/ml$ was as rapid as the PCA-free medium. At a PCA concentration of 300 ${\mu}g/ml$, the growth rate was more than half that of the control. In this work, we purified acyl CoA synthetase from Bacillus sp. B-6 and found that this acyl CoA synthetase was much less sensitive to PCA than the acyl CoA synthetase from other source. These findings suggested that the insensitivity of Bacillus sp. B-6 acyl CoA synthetase plays an important role in the PCA resistance of this bacterium.
Identification of soil microorganism strain B-6. a producer of acyl CoA synthetase inhibitor, based on its morphological, physiological, biochemical and chemotaxonomical charact eristics was performed. The strain B-6 was identified as Bacillus subtilis. Ihe acyl CoA synthetase inhibitor produced by this strain was highly achieved in fermentation medium that contained glucose 1.0%, soluble starch 1.0%, NH$_4$Cl 0.3%, oatmeal 1.0%, pharmamedia 1.0%, basic magnesium carbonate 0.5%. pH 7.5 at 30$^{\circ}$C for 7 days. The optimal pH and temperature for growth were 9.0 and 30$^{\circ}$C, respectively. Butanol extract of culture filterate of strain B-6 in acyl CoA synthetase inhibitor production medium containing corn steep liquor exhibited high acyl CoA synthetase inhibitor activity and antimicrobial activity against C. albicans. But chloroform extract of culture filterate of strain B-6 in medium containing NH$_4$Cl, ($NH_4)_2SO_4$ or urea instead of corn steep liquor exhibited higher antimicrobial activity against C. albicans than that of butanol extract.
Acyl CoA synthetase inhibitor, was purified from the culture broth of a Bacillus sp. B-6, which had been isolated from soil, by chloroform extract, silica gel column chro matography and preparative TLC. The purified acyl CoA synthetase inhibitor showed higher Antifungal activity against C. al-bicans (MIC: 8${\mu}$g/ml). Though the analysis of UV spectrum, melting point, IR spectrum, Mass-spectrum, $^1H$-NMR and $^{13}C$-NMR spectrum, the inhibitor could be identified as phenazine-l-carboxylic acid.
본 연구에서는 long fatty acyl CoA synthetase의 저해제이며, 죽상동맥경화 억제 및 혈관확장 효과가 있는 것으로 알려진 triacsin C의 LPS로 유도된 3T3-L1 지방세포의 염증반응에 대한 효과를 알아보고자 하였다. 10 ${\mu}M$의 triacsin C를 2시간 동안 처리한 결과, LPS로 유도된 배양액내 IL-6 분비량과 mRNA IL-6 발현이 유의적으로 감소하였고 이는 선행연구를 통해 항염증 효능이 입증된 resveratrol(50 ${\mu}M$, 24시간 처리)에 비해서도 배양액으로의 분비된 IL-6의 억제효과가 더 높게 나타났다. 그러나 triacsin C과 resveratrol의 동반상승 효과는 없는 것으로 나타났다. Triacsin C나 resveratrol은 LPS로 유도된 지방세포의 TLR2, MCP-1, iNOS 유전자 발현에 대한 억제효과는 없는 것으로 나타났다. 그러나 triacsin C 처리 후에 resveratrol을 혼합 처리한 경우 iNOS의 발현은 LPS 대조군에 비해 유의적으로 감소하였다. 향후 triacsin C가 LPS로 유도된 염증반응을 어떤 기전으로 억제하는 지에 대해서는 추후 연구가 필요한 것으로 사료된다. 결론적으로 이 연구에서는 지방산 합성 저해제인 triacsin C는 3T3-L1 지방세포에서 IL-6 특이적 항염증 효과가 있으며, triacsin C와 resveratrol을 동시에 처리했을 때 iNOS의 발현을 유의적으로 감소시킴을 확인하였다. 이는 내독소에 의한 지방세포의 염증반응에 대한 triacsin C의 항염증 효과를 입증하기 위한 기초자료로 활용이 가능할 것으로 기대된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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