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Activated Phenoloxidase Interacts with A Novel Glycine-rich Protein on the Yeast Two-hybrid System

  • Lee, Sun-Woo;Lee, Hyun-Seong;Kim, Eun-Jun;Yoo, Mi-Ae;Lee, Bok-Luel
    • BMB Reports
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    • 제34권1호
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    • pp.15-20
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    • 2001
  • One of the innate immune reactions in invertebrates is the pro-phenoloxidase (pro-PO) activation system that is involved in the generation of superoxide, melanin synthesis, and the subsequent sequestration of foreign matter entering the hemocoel of the invertebrates. However, the molecular mechanism of this biological reaction is still obscure. To expand our understanding of the biological roles of the pro-PO activation system in invertebrates, we performed a yeast two-hybrid screening by using three regions of pro-PO as bait and a yeast two-hybrid cDNA library from Tenebrio molitor larvae as prey We isolated a novel partial cDNA clone that encodes a glycine-rich protein that interacted with the active phenoloxidase (termed phenoloxidase interacting protein, POIP). POIP consists of two domains: One is an N-terminal unique domain and the other is a C-terminal glycine-rich domain. The C-terminal glycine-rich domain showed sequential homology with those of insect antifungal proteins. Also, the yeast two-hybrid screen in a reverse orientation (using POIP as bait) yielded PO, suggesting that the PO-POIP interaction is specific. By using a 315 bP PCR fragment of the N-terminal unique region of POIP, we cloned the full-length cDNA of POIP from the Tenebruo cDNA library constructed by using E. coli injected larvae. The interaction analysis between PO, and a truncated fragment lacking the N-terminal unique region of POIP, indicated that the N-terminal unique region is necessary for interaction between PO and POIP. The expression level of the POIP mRNA is increased by bacterial injection into T. molitor larvae. This suggests that POIP might be engaged in the humoral defense reaction.

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Polyhydroxyalkanoate Chip for the Specific Immobilization of Recombinant Proteins and Its Applications in Immunodiagnostics

  • Park, Tae-Jung;Park, Jong-Pil;Lee, Seok-Jae;Hong, Hyo-Jeong;Lee, Sang-Yup
    • Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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    • 제11권2호
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    • pp.173-177
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    • 2006
  • In this study, a novel strategy was developed for the highly selective immobilization of proteins, using the polyhydroxyalkanoate (PHA) depolymerase substrate binding domain (SBD) as an active binding domain. In order to determine the appropriacy of this method for immunodiagnostic assays, the single-chain antibody (ScFv) against the hepatitis B virus (HBV) preS2 surface protein and the severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) envelope protein (SCVe) were fused to the SBD, then directly immobilized on PH A-coated slides via microspotting. The fluorescence-labeled HBV antigen and the antibody against SCVe were then utilized to examine specific interactions on the PHA-coated surfaces. Fluorescence signals were detected only at the spotted positions, thereby indicating a high degree of affinity and selectivity for their corresponding antigens/antibodies. Furthermore, we detected small amounts of ScFv-SBD (2.7 ng/mL) and SCVe-SBD fusion proteins (0.6ng/mL). Therefore, this microarray platform technology, using PHA and SBD, appears generally appropriate for immunodiagnosis, with no special requirements with regard to synthetic or chemical modification of the biomolecules or the solid surface.

지식공학을 위한 상호작용 시스템의 집단 행위 모델링 및 합성 방법 (Modeling and Composition Method of Collective Behavior of Interactive Systems for Knowledge Engineering)

  • 송준섭;마리암 라흐마니;이문근
    • 정보과학회 논문지
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    • 제44권11호
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    • pp.1178-1193
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    • 2017
  • 지식 도메인에 대한 집단적인 패턴에서 시스템의 행위를 이해하는 것은 중요하다. 그러나 시스템의 크기, 상호작용의 복잡성으로 집단 행위를 표현하는데 구조적인 어려움이 있으며, 상태 폭발 문제가 발생한다. 또한, 다른 시스템과의 합성은 시스템의 크기와 복잡성이 기하급수적으로 증가하기 때문에 현실적으로 어렵다. 본 논문은 도메인 공학의 새로운 개념인 행위 온톨로지를 이용하여, 집단 행위를 모델링하는 실용적인 방법을 제시한다. 첫째, 액티브 온톨로지를 통해 시스템의 행위를 정의한다. 둘째, 행위는 일반 정규 표현식이라고 불리는 정량화된 추상 격자 구조로 표현된다. 셋째, 격자는 공통된 요소를 기반으로 다른 격자와 합성할 수 있다. 이 방법은 시스템 복잡성을 줄이기 위해, 시스템 상태를 최소화하는 것뿐만 아니라 집단 패턴에서 시스템 동작을 표현하는 혁신적인 방법 중 하나일 수 있다. 이 방법을 구현하기 위해, PRISM 프로토타입 도구를 ADOxx 메타 모델링 플랫폼으로 개발하였다.

WDM-PON용 주입 잠금 패브리-페롯 레이저 다이오드의 시영역 대신호 모델링 (Time-domain Large-signal Modeling of Injection-locked Fabry-Perot Laser Diode for WDM-PON)

  • 이승현;김건우;정영철
    • 한국광학회지
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    • 제21권2호
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    • pp.74-81
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    • 2010
  • WDM-PON 용 저가형 광원으로 유망한 주입 잠금 패브리-페롯 레이저 다이오드의 특성 해석을 위한 모델링 방법을 제시하였다. 해석 방법으로는 시영역 대신호 모델을 이용하였으며, 계산 결과는 기존의 실험 결과와 유사한 경향을 보임을 확인하였다. 이를 토대로 특정한 파라미터를 가지는 레이저 다이오드 구조에서의 단면 반사율에 따른 동작 특성과 디튜닝, 아이 다이어그램등을 모델링 하였다. 특히 단면 반사율의 값에 따른 부모드 억제율 특성 및 디튜닝의 영향을 살펴보았으며, 주입되는 단면의 반사율이 1% 미만으로 유지되어야 안정된 특성을 얻을 수 있음을 확인하였다. 아이 다이어그램의 경우 155 Mbps 급에서는 손쉽게 아이 열림을 얻을 수 있지만, 1.25 Gbps 급에서는 레이저 다이오드의 활성층 두께 등의 파라미터를 적정화해야 적정한 아이특성을 얻을 수 있음을 보였다.

Deletion Analysis of the Major NF-${\kappa}B$ Activation Domain in Latent Membrane Protein 1 of Epstein-Barr Virus

  • Cho, Shin;Lee, Won-Keun
    • Journal of Microbiology
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    • 제37권4호
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    • pp.256-262
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    • 1999
  • Latent membrane protein 1 (LMP1) of the Epstein-Barr virus (EBV) is an integral membrane protein with six transmembrane domains, which is essential for EBV-induced B cell transformation. LMP1 functions as a constitutively active tumor necrosis factor receptor (TNFR) like membrane receptor, whose signaling requires recruitment of TNFR-associated factors (TRAFs) and leads to NF-${\kappa}B$ activation. NF-${\kappa}B$ activation by LMP1 is critical for B cell transformation and has been linked to many phenotypic changes associated with EBV-induced B cell transformation. Deletion analysis has identified two NF-${\kappa}B$ activation regions in the carboxy terminal cytoplasmic domains of LMP1, termed CTAR1 (residues 194-232) and CTAR2 (351-386). The membrane proximal C-terminal domain was precisely mapped to a PXQXT motif (residues 204-208) involved in TRAF binding as well as NF-${\kappa}B$ activation. In this study, we dissected the CTAR2 region, which is the major NF-${\kappa}B$ signaling effector of LMP1, to determine a minimal functional sequence. A series of LMP1 mutant constructs systematically deleted for the CTAR2 region were prepared, and NF-${\kappa}B$ activation activity of these mutants were assessed by transiently expressing them in 293 cells and Jurkat T cells. The NF-${\kappa}B$ activation domain of CTAR2 appears to reside in a stretch of 6 amino acids (residues 379-384) at the end of the carboxy terminus.

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Interruption of Helicobacter pylori-Induced NLRP3 Inflammasome Activation by Chalcone Derivatives

  • Choi, Hye Ri;Lim, Hyun;Lee, Ju Hee;Park, Haeil;Kim, Hyun Pyo
    • Biomolecules & Therapeutics
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    • 제29권4호
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    • pp.410-418
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    • 2021
  • Helicobacter pylori causes chronic gastritis through cag pathogenicity island (cagPAI), vacuolating cytotoxin A (VacA), lipopolysaccharides (LPS), and flagellin as pathogen-related molecular patterns (PAMPs), which, in combination with the pattern recognition receptors (PRRs) of host cells promotes the expression and secretion of inflammation-causing cytokines and activates innate immune responses such as inflammasomes. To identify useful compounds against H. pylori-associated gastric disorders, the effect of chalcone derivatives to activate the nucleotide-binding oligomerization domain (NOD)-like receptor family, pyrin domain-containing 3 (NLRP3) inflammasome was examined in an H. pylori-infected human monocytic THP-1 cell line in this study. Among the five synthetic structurally-related chalcone derivatives examined, 2'-hydroxy-4',6'-dimethoxychalcone (8) and 2'-hydroxy-3,4,5-trimethoxychalcone (12) strongly blocked the NLRP3 inflammasome in H. pylori-infected THP-1 cells. At 10 μM, these compounds inhibited the production of active IL-1β, IL-18, and caspase-1, and apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain (ASC) oligomerization, but did not affect the expression levels of NLRP3, ASC, and pro-caspase-1. The interruption of NLRP3 inflammasome activation by these compounds was found to be mediated via the inhibition of the interleukin-1 receptor-associated kinase 4 (IRAK4)/IκBα/NF-κB signaling pathway. These compounds also inhibited caspase-4 production associated with non-canonical NLRP3 inflammasome activation. These results show for the first time that certain chalcones could interrupt the activation of the NLRP3 inflammasome in H. pylori-infected THP-1 cells. Therefore, these chalcones may be helpful in alleviating H. pylori-related inflammatory disorders including chronic gastritis.

소량 및 불균형 능동소나 데이터세트에 대한 딥러닝 기반 표적식별기의 종합적인 분석 (Comprehensive analysis of deep learning-based target classifiers in small and imbalanced active sonar datasets)

  • 김근환;황용상;신성진;김주호;황수복;추영민
    • 한국음향학회지
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    • 제42권4호
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    • pp.329-344
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    • 2023
  • 본 논문에서는 소량 및 불균형 능동소나 데이터세트에 적용된 다양한 딥러닝 기반 표적식별기의 일반화 성능을 종합적으로 분석하였다. 서로 다른 시간과 해역에서 수집된 능동소나 실험 데이터를 이용하여 두 가지 능동소나 데이터세트를 생성하였다. 데이터세트의 각 샘플은 탐지 처리 이후 탐지된 오디오 신호로부터 추출된 시간-주파수 영역 이미지이다. 표적식별기의 신경망 모델은 다양한 구조를 가지는 22개의 Convolutional Neural Networks(CNN) 모델을 사용하였다. 실험에서 두 가지 데이터세트는 학습/검증 데이터세트와 테스트 데이터세트로 번갈아 가며 사용되었으며, 표적식별기 출력의 변동성을 계산하기 위해 학습/검증/테스트를 10번 반복하고 표적식별 성능을 분석하였다. 이때 학습을 위한 초매개변수는 베이지안 최적화를 이용하여 최적화하였다. 실험 결과 본 논문에서 설계한 얕은 층을 가지는 CNN 모델이 대부분의 깊은 층을 가지는 CNN 모델보다 견실하면서 우수한 일반화 성능을 가지는 것을 확인하였다. 본 논문은 향후 딥러닝 기반 능동소나 표적식별 연구에 대한 방향성을 설정할 때 유용하게 사용될 수 있다.

Chromophore 형성과 rhodopsin kinase 활성을 이용한 항활성 로돕신 mutant의 분석 (Chromophore formation and phosphorylation analysis of constitutively active rhodopsin mutants)

  • 김종명
    • 생명과학회지
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    • 제17권6호통권86호
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    • pp.783-790
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    • 2007
  • G protein-coupled receptor, (GPCR)는 세포외부의 신호를 인식 시 G 단백질을 활성화시켜 신호를 전달하며 kinase에 의한 인산화를 통하여 지속적인 신호전달을 억제한다. 외부 신호물질이 없는 조건에서도 활성을 나타내는 항활성 돌연변이종(CAM)은 GPCR의 신호전달 이상에 기인한 질병 치료나 활성화 구조변화의 좋은 연구대상이다. 희미한 빛을 인식하는 시각수용체인 로돕신의 CAM으로는 salt bridge에 직접적인 영향을 미치는 돌연변이인 G90D, El13Q, 그리고 K296E와, 직접적인 영향이 없는 돌연변이인 E134q와 M25Y등 두 가지 계통의 종류가 알려져 있다. 본 연구에서는 각각의 돌연변이가 복합된 mutant를 구성하여 agonist와 inverse agonist에 대한친화도와 로돕신 kinase에 대한 활성을 조사하여 각 종에서의 구조변화의 차이를 분석하였다. 로돕신 mutant의constitutive activity는 all-trans-retinal에 대한 친화도에 비례하며 11-cis-retinal에 대한 친화도와는 역상관 관계를 보여준다. 같은 계통에 속하는 돌연변이가 합쳐진 복합 mutant는 단일 mutant에 비하여 미약한 정도의 로돕신 kinase 항활성화 증가를 보여주나, 다른 계통에 속하는 두 가지 돌연변이가 합쳐진 mutant는 항활성화가 크게 증가되었음을 보여주었다. 이 결과는 다른 계통에 속하는 mutant에서는 상이한 구조변화가 일어나며 로돕신이완전한 활성화에 이르기 위해서는 최소한 두 가지 종류의 돌연변이에 의하여 생기는 구조변화들이 함께 일어나야함을 의 미 한다. G protein 활성화와 유사한 항활성화 분석 결과는 rhodopsin kinase가 인식하는 로돕신의 활성화상태 구조가 G protein이 인식하는 구조와 유사함을 의미한다. 특히 가장 강한 활성을 나타내는 El13Q/E134Q/M257Y는 활성화상태 GPCR 단백질의 결정 시도에 이용 될 수 있을 것이다.

편광 또는 무편광 패브리-페롯 레이저 다이오드의 활성층 및 주입 잠금 동작 특성 모델링 (Modeling of Active Layer and Injection-locking Characteristics in Polarized and Unpolarized Fabry-Perot Laser Diodes)

  • 정영철;이종창;조호성
    • 한국광학회지
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    • 제23권1호
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    • pp.42-51
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    • 2012
  • 본 논문에서는 패브리 페롯 레이저 다이오드(FP-LD : Fabry-Perot LD)에서 활성층 구조에 따른 주입 잠금 특성을 비교하였다. 편광 및 무편광 다중양자우물 구조와 무편광 벌크 구조의 이득 스펙트럼 및 주입 캐리어 밀도에 따른 최대 이득 특성을 TE, TM 편광에 대하여 계산하였다. 계산된 이득 파라미터를 시영역 대신호 모델에 적용하여 FP-LD의 주입 잠금 특성을 확인한 결과, 무편광 FP-LD가 편광 FP-LD 에 비하여 RIN(Relative Intensity Noise) 특성 면에서 약 3 dB 정도 우수하고, 2.5 Gbps 변조시에 아이 특성이 훨씬 우수함을 알 수 있다.

소형 MR감쇠기의 성능 실험에 기초한 준능동 제어 시스템 (Semi-Active Control System Based on the Experimental Results of the Performance of a Small Scale MR Damper)

  • 민경원
    • 한국전산구조공학회논문집
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    • 제19권3호
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    • pp.233-238
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    • 2006
  • 이 논문에서는 소형 다층 구조물의 진동제어에 적용하기 위한 복합모드의 자기유변유체(MR) 감쇠기를 개발하였다. 우선, 도식적으로 전단, 유동, 복합모드 MR감쇠기의 형태를 설계조건과 함께 표현하였고, 각각의 모드에 대하여 자기장에 따른 감쇠력을 예측하기 위한 해석모델을 유도하였다. 다음으로 적당한 크기의 복합모드 MR감쇠기를 제작하고 자기장에 따른 감쇠특성을 시간영역에서 평가하였다. 마지막으로 지진하중을 받는 소형구조물에 제작된 MR감쇠기가 준능동 제어기로 제어하였을 때의 성능을 수치적으로 평가하였다.