• 한국생물물리학회:학술대회논문집
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• 한국생물물리학회 2003년도 정기총회 및 학술발표회
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• pp.39-39
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• 2003

In our previous study, WEHI-231, an immature B cell line, showed intractable increase in [C $a^{2+}$]$_{c}$ after the B-cell receptor (BCR) ligation and treatment with 2-aminoethoxydiphenylborate (2-APB), which was never observed in Bal-17, a mature B cell line (Nam et al., 2003, FEBS Lett). In this study, a whole cell voltage clamp study revealed a specific expression of a novel type of $K^{+}$ current, namely voltage-independent background-type $K^{+}$ channels (IK-bg), in WEHI-231 cells. IK-bg was dramatically increase by the application of 2-APB (50 $\square$M), which induced severe hyperpolarization of WEHI-231 from -45 ㎷ to -90 ㎷, When dialyzed with $Mg^{2+}$ and ATP-free pipette solution, a spontaneous development of IK-bg and membrane hyperpolarization were observed. IK-bg was insensitive to classical $K^{+}$ channel blockers (TEA, glibenclamide, $Ba^{2+}$(1 mM)), whereas blocked by quinine and quinidine in a voltage-dependent manner ($IC_{50}$/=6~9 $\square$M at +60㎷). Phorbol myrstate, a PKC activator, decreased the amplitude of IK-bg. Extracellular acidification (pH 6.5) slightly inhibited IK-bg. Arachidonic acid, riluzole, or hyposmotic stress could not affect the IK-bg after the full development by the intracellular dialysis with Mg-ATP-free solution. In a cell-attached mode of single channel recording from WEHI231, we found two types of voltage-independent $K^{+}$ channels with unitary conductance of 300 pS and 120 pS, respectively. Both channels showed very short mean open times and their open probabilities were increase by the application of 2-APB. In Bal-17 cells, no such $K^{+}$ current was observed in 50 cells tested. In summary, WEHI-231 immature B cells express background $K^{+}$ channels. The pharmacological properties and the large unitary conductance suggest that novel types of two-pore domain $K^{+}$ channels (2-P-K channels) might be expressed in WEHI-231, which may provide an intriguing targets of signal transduction in the immature B lymphocytes.e B lymphocytes.

• 대한지역사회영양학회지
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• 제7권4호
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• pp.527-538
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• 2002

Body antioxidant status is an important factor in the prevention of many chronic diseases caused by oxidative stress, especially in the elderly and is affected by health-related habits, such as smoking, drinking and regular physical activity. The aim of this study was to investigate the relationship between these health-related habits and plasma antioxidant status in the elderly. Plasma antioxidant status was examined by determining plasma levels of antioxidant vitamins (vitamin C, A, E, $\beta$ -carotene), total antioxidant status (TAS) and thiobarbituric acid-reactive substance (TBARS) . The subjects included 225 elderly persons aged over 60 yews (63 males, 162 females) living in the Ulsan area. They were interviewed to collect data on their general characteristics and health behaviors such as smoking, exercise and alcohol consumption by means of questionnaires. Their dietary intakes were obtained by means of semi-quantitative food frequency questionnaires (FFQ) The study population was divided into two or three groups according to their smoking, drinking, and exercise status. The ratio of smoker, drinker and exerciser was 16.7%, 31.0% and 44.2% respectively. The dietary antioxidant vitamin intakes were not significantly different among groups of smoking and drinking status, but tended to be higher in non-smokers and non-drinkers than in smokers and drinkers. Plasma vitamin C and $\beta$ -carotene levels were significantly higher in non-smokers, but Plasma vitamin A and TBARS levels were significantly lower in non-smokers than in smokers. Plasma TAS was not significantly different among the smoking groups, but showed a tendency to decrease with an increase in the number of packyear. Plasma vitamin C and $\beta$ -carotene levels of the non-drinkers were higher than those of drinkers and past-drinkers, but plasma vitamin A, C, E, TAS and TBARS showed no difference among the groups of drinker. All vitamin intakes of the exercisers were slightly higher than those of the non-exercisers, but vitamin C intake was significantly higher in female exercisers than in non-exercisers. Plasma $\beta$ -carotene levels were significantly higher in male exercisers and plasma vitamin A, C, E, TAS and TBARS levels tended to be higher in exercisers than in non-exercisers. These results suggested that change to non-smoker, modulation of alcohol consumption and regular exercise could enhance antioxidant defences against reactive oxygen species and might increase the likelihood of a healthier life span.

• 한국식품영양과학회지
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• 제43권12호
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• pp.1808-1816
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• 2014

본 연구는 삼채의 뿌리와 잎을 물과 주정을 이용하여 추출하여 항산화 활성 및 항염증 효과를 비교 평가하였다. 삼채의 추출물에 포함된 총 폴리페놀 함량과 전자스핀공명기기를 이용한 DPPH, alkyl, hydroxyl 라디칼 소거능, ABTS를 이용한 라디칼 소거 활성 및 FRAP 및 ORAC을 이용한 항산화 활성을 평가하였는데, 삼채뿌리 추출물보다는 삼채잎 추출물의 항산화 활성이 높았으며 이는 잎에 포함된 총 폴리페놀 함량과 관련이 있을 것으로 판단된다. 물 추출의 경우가 뿌리와 잎 모두 수율이 높았으며 폴리페놀 함량과 ORAC value와 alkyl 라디칼 소거 활성은 비슷한 경향을 나타내었으나 DPPH와 hydroxyl 라디칼 소거 활성과는 다른 결과를 나타내었다. 또한 간세포를 이용한 세포 독성 평가 실험 수행 결과, 0.25 mg/mL의 농도까지는 삼채의 뿌리와 잎의 물 추출물 및 주정 추출물 모두 독성을 나타내지 않았다. RAW264.7 세포를 이용하여 독성을 나타내지 않는 농도인 0.2 mg/mL 이하에서 항염증 활성 평가를 수행한 결과 삼채뿌리 및 삼채잎의 물과 주정 추출물은 모두 NO의 생성을 농도 의존적으로 감소시키는 경향을 나타내었다. 뿐만 아니라 삼채 추출물은 염증성 사이토카인인 IL-6와 TNF-${\alpha}$의 생성을 감소시켰으며, 특히 삼채뿌리 물 추출물은 가장 높은 IL-6와 TNF-${\alpha}$의 생성 억제를 나타내었다. 또한 삼채 추출물이 LPS로 유도한 세포내 활성산소종을 농도 의존적으로 억제하는 것을 확인하였으며, 위의 결과로 삼채잎 추출물은 항산화 활성이 우수하고 삼채뿌리 추출물은 항염증 활성이 높음을 확인하였다. 따라서 삼채 추출물이 우수한 항산화 및 항염증 활성을 가지고 있는 것으로 판단되며, 이와 관련된 항산화 및 항염증 생리활성 물질에 관한 추가적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제30권6호
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• pp.1215-1219
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• 2001

In vitro 항산화 활성이 확인된 참취가 생체 내에서도 활성을 나타내는 지를 확인하기 위해 대조군과 5%및 10% 참취 분말을 첨가한 식이를 4주간 횐쥐에 투여하면서 마지막 1주간 알콜로 산화적 스트레스를 유발한 후 희생시킨 흰쥐의 체중 증가량과 함께 체중에 대한 장기의 상대 중량, 간, 신장에서의 지질과산화, 항산화효소 활성, glutathione 및 혈청 알부민의 함량을 분석하였다. 4주간의 사육 후 체중 증가량은 대조군, 5% 참취첨가군 그리고 10% 참취첨가군의 순으로 높았으나 유의적인 차이는 없었으며 체중에 대한 상대적인 장기 중량 중에서 간, 비장은 대조군에 비해 참취 첨가군의 경우 더 낮은 비율을 나타내었다. 간에서 지질과산화로 생성되는 TBARS 함량은 대조군(66 $\mu\textrm{g}$)에 비해 5%(45 $\mu\textrm{g}$) 및 10% 참취 분말 식이군(35 $\mu\textrm{g}$)에서 참취 첨가량이 증가할수록 낮았다. Mn-SOD와 catalase활성은 참취 첨가군들에서 대조군보다 낮았으나 Cu, Zn-SOD와 glutathione peroxidase 활성 및 glutathione 함량은 실험군들간에 유의적인 차이를 나타내지 않았다. 신장에서는 Mn-SOD와 glutathione peroxidase 활성이 대조군보다 참취 첨가군에서 유사하거나 낮은 경향을 나타내었으나 Cu, Zn-SOD와 catalase의 활성 및 TBARS, glutathione의 함량은 실험군들간에 유의적인 차이를 보이지 않았다. 한편, 혈청 알부민의 함량은 실험군들간에 큰 차이가 없었다. 이상과 같은 실험 결과를 종합할 때 참취는 에탄올에 의해 유발된 산화적인 스트레스를 적절하게 방어하여 특히 간장에서의 지질과산화 및 Mn-SOD활성의 감소를 가져왔으며 그 효과는 참취의 첨가량에 비례하는 경향을 나타내었으므로 생체 안에서 알코올과 같은 산화적 스트레스에 대한 항산화제로서의 역할을 효과적으로 수행할 수 있을 것으로 기대된다.

• 한국식품과학회지
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• 제31권6호
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• pp.1661-1666
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• 1999

인체에 대해서 유익한 작용을 하며 실생활에서 쉽게 접할수 있는 3개의 보익제를 동의보감으로부터 선정하여 효능을 과학적으로 검증하기 위한 자료로서 항산화력을 조사하였다 동의보감의 처방에 따라서 약재를 혼합한 후 열수 추출한 물질의 항산화력을 전자공여능, SOD 유사 활성 및 지질과산화 억제능을 이용하여 조사한 결과 대표적 항산화제인 vitamin C에 비하여 낮은 활성을 보였으나 모두 항산화력을 나타내었다. 이 3개 탕제를 흰쥐에게 4주간 투여한 뒤 혈장에서 총항산화력이 대조군에 비하여 증가하였다. 또한, 탕제 투여한 흰쥐의 간 조직을 적출 하여 활성 산소발생제인 2.2'-azobis(amidinopropane)dihydrochloride(AAPH)를 처리한 결과 조직내의 대표적 비효소 항산화제인 환원형 glutathione의 감소가 억제되었으며, 산화형과 환원형의 비율 또한 증가하여 탕제 투여에 의해 간 조직 및 혈장의 항산화력이 증가함을 확인하였다. 이러한 결과 산화적 손상의 지표로 사용되는 지질과산화(TBARS) 단백질 분해도 역시 탕제 투여군이 비투여군에 비하여 감소하였다. 따라서, 보익제로 사용되는 3개 탕제는 체내 항산화력을 증강시켜 노화 및 다양한 질병의 원인이 되는 산화적 손상으로부터 체내를 보호할 수 있을 것으로 추측된다.

• Molecules and Cells
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• 제40권3호
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• pp.230-242
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• 2017

In the Arabidopsis genome, approximately 80 MAP3Ks (mitogen-activated protein kinase kinase kinases) have been identified. However, only a few of them have been characterized, and the functions of most MAP3Ks are largely unknown. In this paper, we report the function of MAP3K16 and several other MAP3Ks, MAP3K14/15/17/18, whose expression is salt-inducible. We prepared MAP3K16 overexpression (OX) lines and analyzed their phenotypes. The result showed that the transgenic plants were ABA-insensitive during seed germination and cotyledon greening stage but their root growth was ABA-hypersensitive. The OX lines were more susceptible to water-deficit condition at later growth stage in soil. A MAP3K16 knockout (KO) line, on the other hand, exhibited opposite phenotypes. In similar transgenic analyses, we found that MAP3K14/15/17/18 OX and KO lines displayed similar phenotypes to those of MA3K16, suggesting the functional redundancy among them. MAP3K16 possesses in vitro kinase activity, and we carried out two-hybrid analyses to identify MAP3K16 substrates. Our results indicate that MAP3K16 interacts with MKK3 and the negative regulator of ABA response, ABR1, in yeast. Furthermore, MAP3K16 recombinant protein could phosphorylate MKK3 and ABR1, suggesting that they might be MAP3K16 substrates. Collectively, our results demonstrate that MAP3K16 and MAP3K14/15/17/18 are involved in ABA response, playing negative or positive roles depending on developmental stage and that MAP3K16 may function via MKK3 and ABR1.

• Molecules and Cells
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• 제41권6호
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• pp.582-590
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• 2018

Endothelial progenitor cells (EPCs) and outgrowth endothelial cells (OECs) play a pivotal role in vascular regeneration in ischemic tissues; however, their therapeutic application in clinical settings is limited due to the low quality and quantity of patient-derived circulating EPCs. To solve this problem, we evaluated whether three priming small molecules (tauroursodeoxycholic acid, fucoidan, and oleuropein) could enhance the angiogenic potential of EPCs. Such enhancement would promote the cellular bioactivities and help to develop functionally improved EPC therapeutics for ischemic diseases by accelerating the priming effect of the defined physiological molecules. We found that preconditioning of each of the three small molecules significantly induced the differentiation potential of $CD34^+$ stem cells into EPC lineage cells. Notably, long-term priming of OECs with the three chemical cocktail (OEC-3C) increased the proliferation potential of EPCs via ERK activation. The migration, invasion, and tube-forming capacities were also significantly enhanced in OEC-3Cs compared with unprimed OECs. Further, the cell survival ratio was dramatically increased in OEC-3Cs against $H_2O_2$-induced oxidative stress via the augmented expression of Bcl-2, a pro-survival protein. In conclusion, we identified three small molecules for enhancing the bioactivities of ex vivo-expanded OECs for vascular repair. Long-term 3C priming might be a promising methodology for EPC-based therapy against ischemic diseases.

• 한국식품영양과학회지
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• 제46권11호
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• pp.1293-1299
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• 2017

Epigallocatechin-3-gallate(EGCG)는 녹차에 함유된 flavonoid 계열 화합물로, 녹차의 대표적인 유효성분으로 알려져 있다. 본 연구는 3T3-L1 세포에서 EGCG의 항비만 작용 및 항산화 효소 활성을 평가하였다. EGCG는 지방세포 분화를 유의적으로 억제하였으며, 지방세포 분화와 관련된 단백질인 $C/EBP{\alpha}$와 aP2의 발현을 감소시켰다. 동시에 EGCG는 GSH의 활성을 유도하였으며, 항산화 효소인 SOD, CAT, GPx 및 GR의 활성을 증가시켰다. EGCG는 지방세포 분화 동안 활성산소종의 형성을 감소시켰다. 체내 phase II 효소인 HO-1과 GCLC는 EGCG에 의해 발현이 유도되었다. 따라서 EGCG는 3T3-L1 세포에서 항산화 효소의 활성화를 유도하며 동시에 지방세포로의 분화를 억제하는 것으로 나타났다. 또한, EGCG는 활성산소종의 생성을 억제하였으며, 이는 EGCG의 항산화 작용에 의한 지방세포 분화 억제 작용이 관련이 있는 것으로 판단된다. EGCG에 의한 항비만 효과와 항산화 작용을 연구한 본 연구는 녹차를 활용한 체지방 감소 효능을 지닌 식품 개발에 기초 자료로 활용될 수 있을 것으로 생각된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제30권1호
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• pp.15-20
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• 2002

Diacylglycerol Kinase (DGK)는 E. coli 및 진핵세포에서의 신호전달에 관여하며, 또한 미생물에서 생리적 자극에 따라 다른 발현 양상을 보이는 것으로 밝혀져 있다. Bacillus subtilis에서 이 유전자에 대한 환경에서의 자극 신호들, 즉 pH 변화, 삼투압의 변화 및 온도의 변화에 따른 발현양상을 연구하였다. 이미 동정된 dgk locus의 KpnI-HindIII의 0.45 kb의 DNA fragment를 probe로 하여 Dot blot, Northern blot analysis를 통해 발현량을 조사해 본 결과 dgk 유전자는 pH변화, 삼투압의 변화 및 온도의 변화에 대응하여 발현되는 유전자임을 알 수 있었다. 특히 낮은 pH, 고 삼투압, 및 저온에서 dgk 유전자의 발현량이 많아짐을 확인 할 수 있었다. Northern hybridization에서 약 2.5kb의 mRNA가 관찰되었다. dgk gene의 ORF size는 약 0.4 kb로 관찰된 transcript size와는 일치하지 않았다. 따라서 Streptococcus mutans의 dgk gene과 마찬가지로 B. subtilis의 dgk 유전자도 polycistronic mRNA로 발현되는 것을 추정할 수 있었으며, 염색체상의 dgk gene에서 상류의 ORF2까지의 크기가 약 2.5 kb로 관찰된 mRNA size와 동일하였다. dgk gene 상류의 ORF2영역의 0.6 kb의 DNA fragment를 probe로 하여 northern blot hybridization을 수행한 결과, 2.5 kb의 mRNA가 관찰되었으며 발현되는 형태도 dgk probe를 이용한 결과와 동일하였다. 따라서 dgk gene은 상류부위의 ORF2 gene과 operon을 형성하여 polycistronic mRNA로 전사되는 것으로 판단된다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제12권2호
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• pp.318-326
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• 2002

The pathogenic marine bacterium Vibrio vulnificus is the causative agent of food-borne diseases such as life-threatening septicemia. To better understand this organism's strategies to survive osmotic stress, a mutant that was more sensitive to high osmolarity was screened from a library of mutants constructed by a random transposon mutagenesis. By a transposon-tagging method, putAP genes encoding a proline dehydrogenase and a proline permease were identified and cloned from V. vulnificus. The amino acid sequences deduced from nucleotide sequences of putAP from V. vulnificus were 38 to $59\%$ similar to those of PutA and PutP reported from other Enterobacteriaceae. Functions of putAP genes were assessed by the construction of mutants, whose putAP genes were inactivated by allelic exchanges. When proline as the sole carbon or nitrogen source was used, the putA mutant was not able to grow to the substantial level, revealing the proline dehydrogenase is the only enzyme for metabolic conversion of proline into other amino acids. Although the growth rate of the putP mutant on proline as the sole carbon or nitrogen source was significantly reduced, the mutant still grew. This indicated that at least one more proline permease is produced by V. vulnificus. The putP mutant decreased approximately $2-log_10$ CFU/ml after a hyperosmotic challenge, while the parent strain decreased approximately $l-log_10$ CFU/ml. This result suggests that the gene product of putP contributes to the osmotic tolerance of V. vulnificus.