Stenotrophomonas maltophilia LK-24가 페놀화합물을 분해하는데 관련된 효소들과 페놀의 분해 산물을 분석한 결과 phenol hydrolase, catechol-2.3-dioxygenase, 2-hydroxymuconic semialdehyde dehydrogenase, 2-hydroxymuconic semialdehyde hydroxylase, 및 acetaldehyde dehydrogenase를 확인하였다. 이러한 효소들의 활성으로 보아 페놀은 meta-pathway ring cleavage를 거치면서 분해되는 것으로 사료된다. 이러한 결과는 페놀화합물의 metabolic pathways를 이해하는데 많은 도움이 되며, phenolic-contaminated waste streams에 S. maltophilia LK-24를 사용할 수 있으리라 여겨진다.
The activity of aldehyde dehydrogenase (ALDH) in the cerebrum, cerebellum, striatum, and medulla oblongata was examined and mitochondrial matrix ALDH was purified prior to immunohistochemical study on the localization of ALDH isozymes in pig brain. Relatively high enzyme activity was found in the striatum and medulla oblongata when using indole-3-acetaldehyde as substrate, and in the striatum when using 3,4-dihydroxyphenylacetaldehyde (DOPAL). The main part of mitochondrial ALDH activities with both acetaldehyde and DOPAL existed in the matrix fraction. The ratio of activity of the matrix to the membrane fraction in the cerebrum was higher than in the cerebellum, suggesting that the distribution pattern of ALDH isozymes was different according to the brain regions. The 276-fold purified mitochondrial matrix ALDH from pig brain was identified to be homologous tetramers with 53 KD subunits. The enzyme showed maximal activity at pH 9.0 and was stable in the temperature range from $25^{\circ}C$ to $37^{\circ}C$. The mitochondrial matrix ALDH activity was considerably inhibited by acetaldehyde in vitro. The $K_m$ values of the enzyme for acetaldehyde and propionaldehyde were 5.8 mM and 4.9 mM, respectively, whereas $K_m$ values for indole-3-acetaldehyde and DOPAL were 44 ${\mu}M$ and 1.6 ${\mu}M$, respectively. The $V_{max}/K_{m}$ ratio was the highest with DOPAL as compared with other substrates. These results suggested that mitochondrial matrix ALDH in the present work might be a low Km isozyme involved in biogenic aldehyde oxidation in pig brain.
본 연구는 ethanol의 reactive metabolite인 acetaldehyde의 일차 배양혈관 평활근 세포에 대한 독성 발현 양식을 규명하기 위한 연구의 일환으로, prostaglandin 합성과 세포독성과의 관련성 여부를 확인하기 위하여 수행되었다. Acetaldehyde는, 일차 배양 혈관 평활근 세포에서의 prostaglandin 합성을 현저히 증가 시켰으며, 이때, cyclooxygenase activity 는 큰 변화없거나 오히려 감소시키는 경향을 보였다. Cyclooxygenase inhibitor 인 indometancin은 acetaldehyde에 의한 LDH release를 현저히 차단시켰으며, aspirin 및 salicylic acid는 전혀 영향을 주지 못했다. Phospholipase $A_2\;(PLA_2)$ inhibitor로 알려져 있는 dexamethasone은 유의적인 세포 독성 경감 작용을 보이지 못하였으며, Lipoxygenase inhibitor 들인 NDGA, propyl gallate 등은 현저한 독성 경감 효과를 보였다. 이상의 결과로부터 acetaldehyde에 의한 일차 배양 혈과 평활근 세포에서의 prostaglandin 합성 증가는 Cell death에 대한 직접적인 원인이 아님을 추론할 수 있었으며, $PLA_2/lipoxygenase$ inhibitor들의 강력한 세포독성 경감 작용으로 미루어 볼 때, acetaldehyde 에 의한 세포독성은 lipoxygenase 대사 산물 혹은 $PLA_2$의 직접 작용에 기인할 가능성을 확인할 수 있었다.
본 연구에서는 숙취용 음료를 개발하기 위하여 알코올을 투여한 흰쥐를 대상으로 흑마늘 추출물 130 mg/kg과 260 mg/kg을 각각 40% 알코올(5 g/kg, B.W.) 투여 30 분 전과 30 분 후에 경구 섭취시키고 1, 3 및 5 시간 동안 경시적으로 혈액 중의 알코올 및 아세트알데히드 농도와 간조직 중의 alcohol dehydrogenase (ADH) 및 acetaldehyde dehydrogenase (ALDH)의 활성과 간지표 효소인 alanine aminotransferase (ALT) 및 aspartate aminotransferase (AST)의 활성을 측정하였다. 알코올 투여 30 분 전에 흑마늘 추출물을 경구 섭취시켰을 때 혈 중 알코올의 농도는 시간 경과에 따라 급격하게 감소하였으며 알코올 투여 후 5 시간 경과 시 알코올 투여 대조군에 비하여 흑마늘 추출물 투여군이 28.5%로 감소하는 경향을 나타내었다. 또한 혈 중 아세트알데히드의 농도는 알코올 대조군에 비하여 흑마늘 추출물 투여군이 매우 감소하였다. 알코올 투여 30 분 후 흑마늘 추출물을 투여한 것은 알코올 투여 30 분 전의 실험군과 비슷한 경향을 나타내었다. 간 조직중의 ADH 활성은 정상군과 흑마늘 추출물 투여군 모두 큰 변화는 찾아 볼 수 없었으나 ALDH의 활성은 약간의 차이를 확인할 수 있었다. 혈청 ALT, AST 활성은 대조군과 흑마늘 추출물 간에 유의적인 차이는 나타내지 않았으나, 흑마늘 추출물의 섭취가 간 기능에 나쁜 영향을 미치지 않는 결과로 보아 안전성이 있다고 사료된다.
Zymomonas mobilis의 알코올 탈수소 효소 유전자가 클로닝된 대장균 형질전환체의 세포 추출물로부터 알코올 탈수소 효소를 분리정제하였다. 형질전환된 Escherichia coli(pADS93)가 생산하는 Z.mobilis 유전자 유래의 알코올 탈수소 효소는 분자량이 40,000인 동일한 4개의 subunits로 구성된 tetramer임이 밝혀졌으며 이것은 Z.mobilis의 세포 추출물로부터 분리한 알코올 탈수소 효소와 동일하였다. 이 효소의 정반응(ethanol 산화)은 pH의 영향을 많이 받으며 pH는 10.0이었고 역반응(acetaldehyde 환원)에서는 최적의 pH가 7.5-8.5 이었지만 pH에 따라 크게 영향을 받지는 않았다.
Background: Excessive alcohol consumption is at the root of serious social problems such as hangovers, liver dysfunction, and alcoholism. Objectives: This study was carried out to determine the hangover ameliorating effect of fermented rice extract and a combination of yeast-fermented powder and lysate containing aldehyde dehydrogenase (ALDH) (improved new ingredients) in an ethanol-induced rat study. Methods: The concentrations of alcohol, acetaldehyde, and malondialdehye in serum were evaluated to assess the anti-alcohol and anti-aldehyde hangover effect in two experiments, one with fermented rice extract) and a second with yeast-fermented powder and lysate, using animal studies. Results: Experiment 2 with yeast-fermented powder and lysate containing ALDH showed similar and higher activity, respectively, in reducing ethanol and acetaldehyde concentration compared with Experiment 1 with fermented rice extract. Experiment 2 also significantly reduced malondialdehyde, a type of lipid peroxide. The ALDH-related compound (ARC) lysate showed better hangover relief effect than ARC powder. Conclusions: These results indicate that ALDH-related compounds exhibit a hangover relief effect, and fermented lysate is considered to be a better candidate for hangover relief.
The changes in aldehyde dehydrogenase(ALDH, E.C. 1.2.1.3.) activity in neurons and astrocytes isolated from rat brains were investigated after administration of ethanol and Korean red ginseng(Panax ginseng C.A. Meyer) saponln. The cerebral ALDH activity with acetaldehyde and Propionaldehyde was higher in the white matter than in the gray matter. However, using indole-3-a-cetaldehyde and 3,4-dihydroxyphenylacetaldehyde as substrates, there was no significant difference in activity between two regions in cerebrum. In ethanol treated group, ALDH activity with all the substrates in the gray and white matter was lower than in normal group. In ethanol-saponin treated group, the enzyme activity in the white matter remarkably Increased. The ALDH activity in neurons isolated from cerebral cortex in ethanol-treated group was lower than in normal group. In ethanol-saponin treated group, neuronal ALDH activity with propionaldehyde was significantly recovered but not with Indole-3-acetaldehyde. In astrocytes, although the ALDH activity with propionaldehyde in the ethanol-treated group was not changed as compared with normal group, considerable increase in activity was found in ethanol-saponin treated group. These results suggest that Korean red ginseng saponin may protect the neuronal functions from the toxic effects of acetaldehyde derived from ethanol by stimulation of ALDH activity in astrocytes surrounding nerve cells.
초산 생성 균주인 Acetobacter sp. HA로부터 membrane-bound alcohol dehydrogenase(ADH)를 분리 정제하였다. 세포막 분획과 세포막에서 효소의 용출 그리고 크로마토그라피 방법 등을 적용하여 수율 35%, 153배 정제된 효소를 획득하였다. 정제된 효소의 분자량은 330,000 dalton이었으며, 각각 분자량 79,000과 49,000 그리고 45,000 dalton을 가진 세 종류의 subunit로 이루어져 있었다. 그리고 흡수 스펙트럼의 분석 결과 본 효소에는 cytochrome c가 존재함을 확인할 수 있었다. 본 효소는 메탄올을 제외한 1차 지방족 알코올을 기질로 이용할 수 있었으며, formaldehyde, acetaldehyde 그리고 glutaraldehyde의 경우에도 다소간 기질로 이용될 수 있었다. 본 효소의 에탄올에 대한 $K_m$값은 1.38mM이었으며, 최적 pH와 온도는 각각 5.0~6.0과 32${\circ}C$이었다. 본 효소의 활성은 $V_2O_5$와 $ZnCl_2,\; NiCl_2$같은 금속 이온에 의하여 저해되었다.
홍합을 함유한 숙취 해소용 식품 개발의 근거를 확보하기 위하여 12종류의 열수 추출물을 제조하였다 - A(겨우살이); B(냉이); C(칡); D(콩나물); E(헛개나무); F(홍합); G(홍합과 겨우살이); H(홍합과 냉이); I(홍합과 칡); J(홍합과 콩나물); K(홍합과 헛개나무). C 추출물이 alcohol dehydrogenase(ADH)와 acetaldehyde dehydrogenase(ALDH)의 활성을 가장 크게 증가시켰으나, 홍합과 혼합한 경우에는 상승 효과를 보이지 않았다. 칡을 함유한 경우를 제외하고는 H 추출물이 높은 ADH($237.4{\pm}1.7%$)와 ALDH($136.5{\pm}2.1%$) 활성을 보였다. 또한, H 추출물은 가장 높은 DPPH 라디칼 소거능($93.9{\pm}0.1%$)과 안지오텐신 전환효소(ACE) 저해능($42.7{\pm}1.6%$)을 나타내었다. 홍합과 냉이를 혼합한 경우에는 alcohol dehydrogenase 활성과 ACE 저해능이 상승되는 시너지 효과를 확인하였다.
본 연구에서는 레몬 머틀 잎 열수 및 에탄올 추출물의 새로운 소재로서의 가능성을 검토하고자 항당뇨 효과와 미백 효과, 알코올 분해능 및 간세포 보호 효과를 확인하였다. 레몬 머틀 추출물의 혈당강하효과는 ${\alpha}$-glucosidase 활성 억제능을 측정하였으며, 열수 및 에탄올 추출물 1 mg/ml 농도에서 각각 7.66%와 40.29%로 에탄올 추출물이 높게 나타났고(p<0.05), tyrosinase 저해활성은 에탄올 추출물 1 mg/ml 농도에서 38.26%로 나타났다. 숙취 해소능을 알아보기 위해 alcohol dehydrogenase (ADH) 및 acetaldehyde dehydrogenase (ALDH) 활성을 측정한 결과, 두 효소 모두 레몬 머틀 열수 및 에탄올 추출물의 농도 의존적으로 증가하였다(p<0.05). 레몬 머틀 열수 및 에탄올 추출물은 tacrine으로 유도된 Hep G2 간암 세포주에 대하여 유의적인 보호 활성이 나타났다. 이상의 결과에서와 같이 레몬 머틀 잎은 항당뇨효과와 숙취 해소효과 및 간세포 보호 효과가 있는 것으로 나타났기에 기능성 소재로서의 활용 가능성을 확인할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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