본 연구는, catabolic repression시킨 효모세포를 완전배지와 최소배지에서 derepression시켜, 배양시기 및 인산 첨가농도(free, limited, sufficient)에 따른 5종의 다당류 합성변화를 조사하였다. 그리고 다당류 합성과 무기폴리인산 축적량 및 인지질 합성 사이의 상관지수를 구하여 합성시 관련되는 유의한 정도를 검정하였다. 그 결과, 최소배지에서 catabolic derepression시킨 효모세포가, 완전배지에서 derepression시킨 세포에 비하여, glycogen의 합성이 발리 그리고 많이 일어났고, acid soluble glycogen type이 주된 함량을 나타내었으며, alkali soluble glycogen은 당이 많이 소모된 24시간 배양 후에 소량 나타났다. 무기인산 첨가정도에 따라 total glycogen합성이 일정한 비율로 빨리 그리고 높게 일어났다. Glucan의 합성에는 ALPase 중 ALPase "C"가 관련할 것으로 추정되었다. Mannan은 ezponential phase초기와 정체기때, acid soluble 분획은 정체기때 최대함량을 나타내었다. Mannan 합성과 poly-P "C"축적량 사이의 상관지수는 0.866, mannan합성과 인지질 사이의 상관지수는 0.726으로 나타나 매우 유의하였다.
The growth rate of yeast population (Saccharomyces uvarum) cultivated in the Knopp's modified medium (plus various carbon sources) appeared the highest value when the Knopp's minimal medium was treated to 1.5% with disaccharide such as maltose and sucrose. Also the treatment of lactose and raffinose resulted in polulation growth as to the population size in case of maltose and sucrose. However, the gorwth of yeast was not occurred at all when a polysaccharide, such as inulin, was added as carbon source. The growth from of yeast population in Knopp's modified medium are characterized by the fact that log phase continued 100hrs after inoculation and that stationary state phase appeared in general 250hrs after inoculation. Applying the various carbon sources to respiration substrate for yeast cell, the respiration rate of yeast showed the highest value in treatment of maltose and followed in order of raffinose, lactose, glucose, and sucrose. Determined the amount of poly-phosphate and turn over pathway of poly-phosphate according to culture phase of yeast, it is revealed that the yeast synthesized 3 types of poly phosphate (poly-P A,B, and C) and postulated that turn over pathway of poly-phosphate as follows ; Inorganic phosphate is converted into each kind of polyphosphates, and then one part of poly-P-C is converted into poly-P-B, the rest poly-p-C and poly-P-B are converted into poly-P-A. The synthesized poly-phosphate is considered to have a role as energy pool utilizing to synthesis of cellular organic materials. Of the 13 carbon sources used in this experiment, the useful carbon sources for biosynthesis of poly-phosphate and cellular organic materials are confirmed as disaccharide (maltose and sucrose) as well as glucose. Protein synthesis in yeast cell showed the two peaks on 6th and 8th day after inoculation ; nucleic acid on 2nd day (48hrs), carbohydrates on 2nd day (48hrs), and phospholipid on 2nd and 8th day after inoculation, respectively.
본 실험은 erinacine 을 생산하는 Hericium erinaceus 균사체의 최대생산을 목적으로 기본배지를 토대로 수행되었다. 따라서 선정된 몇가지 대표적 carbon source와 nitrogen source를 비교 ${\cdot}$검토하였다. 그 결과 carbon source에서는 glucose에서 다른 source 에 비하여 높은 균사체 생산량을 보여주었으며 nitrogen source에서는 yeast extract에서 높은 균사체 생산량을 보여주었다. 또한 C/N ratio 검토를 근거로 본 실험에서는 glucose 20g/L 와 yeast extract 10g/L를 modified medium으로 선정하였다. 그 결과 균체량은 11.78g/L, Polysaccharide는 l.03g/L 로 측정되었다.
The enzyme expressed from strain L-49 was 2.01 times higher than that of original strain. Strain L-49 can grow on culture plate with $50{\mu}g/mL$ ampicillin. The synthesis of $\alpha$-amylase was greatly suppressed when strain L-49 was grown on monosaccharide such as glucose and polysaccharide at the same time cell concentration was low. Amylase production was enhanced when the bacterium was grown on starch and dextrin. Among different nitrogen sources tried, yeast extract was found to be the best followed by panpeptone, peptone, meat extract, bean meal, and corn steep liquor. The average rate of enzyme production was enhanced for 3~4 times in fermentation time from 24h to 44h. The sugar uptake rate has also increased. Low oxygen supply rate enhanced the rate of strain propagation but depressed the enzyme production. Hence it is benefit to obtain high enzyme activity that agitation speed maintained not lower than 400r/min and aeration rate maintained greater than 1:1vvm.
Gardenia callus was induced in MS medium containing $10{\;}{\mu}M$ of 2,4 diphenoxy acetic acid (2,4-D), $1{\;}{\mu}M$ kinetin, and 3% sucrose in the dark. $B_5$ medium was identified to be the most adequate medium for cell growth. Indole-3-acetic acid (IAA) was better growth regulator than 2,4-D not only for cell growth but slso for carotenoid production. Ligt also played a critical role on synthesis of carotenoid. Gardenia cells grown in $B_5$ medium could utilize a polysaccharide, soluble starch, as a carbon source. The cell growth was stimulated in $B_5$ medium fortified with 0.2% yeast extract. The optimum pH for cell growth was 5.7. High density cultures can be maintained by increasing inoculum size and medium concentration accordingly. Specific growth rate and mass doubling time were 0.095 $day^{-1}$ and 7.3 days, respectively. The cell immobilized in alginate tends to formulate more enlarged vacuoles containing yellow pigment compared with those of suspended cell. Carotenoid content of immobilized cell was about $264.4{\;}{\mu}g/g$ fresh weight (F.W.) corresponding twice of the content of suspended cell ($112.08{\;}{\mu}g/g$ F.W.). The color of gardenia cell was shifted from yellow to red when carbohydrase-secreting fungus, Trichoderma reesei, was co-cultivated with gardenia cells.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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